| 致谢 | 第4-9页 |
| 摘要 | 第9-11页 |
| 英文缩略表 | 第11-12页 |
| 第一章 文献综述 | 第12-24页 |
| 1.1 蜱卵巢相关功能分子的研究进展 | 第12-14页 |
| 1.1.1 酶 | 第12-13页 |
| 1.1.2 卵泡抑素相关蛋白 | 第13页 |
| 1.1.3 卵黄蛋白 | 第13页 |
| 1.1.4 卵黄蛋白原和卵黄蛋白原受体 | 第13-14页 |
| 1.2 microRNA研究进展 | 第14-21页 |
| 1.2.1 miRNA的生物合成途径 | 第14-15页 |
| 1.2.2 miRNA与靶基因的作用机制 | 第15-16页 |
| 1.2.3 miRNA特点 | 第16-17页 |
| 1.2.3.1 miRNA可变性、时序性 | 第16-17页 |
| 1.2.3.2 miRNA细胞和组织特异性 | 第17页 |
| 1.2.3.3 miRNA其他特点 | 第17页 |
| 1.2.4 miRNA功能 | 第17-18页 |
| 1.2.5 miRNA靶基因预测 | 第18-19页 |
| 1.2.6 miRNA寄生虫应用现状 | 第19页 |
| 1.2.7 模式动物miRNA研究现状 | 第19-20页 |
| 1.2.8 miR-275研究现状 | 第20-21页 |
| 1.3 RNA干扰技术研究进展 | 第21-23页 |
| 1.3.1 RNAi的发现及意义 | 第21页 |
| 1.3.2 RNAi的作用机制及特点 | 第21-23页 |
| 1.3.2.1 作用机制 | 第21-22页 |
| 1.3.2.2 RNAi的作用特点 | 第22-23页 |
| 1.3.3 RNA干扰技术的应用 | 第23页 |
| 1.3.3.1 基因功能研究应用 | 第23页 |
| 1.3.3.2 RNAi在基因治疗方面的应用 | 第23页 |
| 1.3.3.3 RNAi在功能基因组研究上的应用 | 第23页 |
| 1.4 研究内容和方法 | 第23-24页 |
| 第二章 miR-275生物学特性分析及靶标预测 | 第24-31页 |
| 2.1 材料与方法 | 第24-27页 |
| 2.1.1 材料与主要试剂 | 第24页 |
| 2.1.2 主要仪器 | 第24页 |
| 2.1.3 方法 | 第24-27页 |
| 2.1.3.1 引物合成 | 第24-25页 |
| 2.1.3.3 一链cDNA合成 | 第25-26页 |
| 2.1.3.4 扩增miR-275 | 第26页 |
| 2.1.3.5 miR-275 克隆连接 | 第26-27页 |
| 2.1.3.6 连接产物转化 | 第27页 |
| 2.2 结果 | 第27-29页 |
| 2.2.1 miR-275 PCR扩增结果 | 第27-28页 |
| 2.2.2 miR-275序列特征分析 | 第28页 |
| 2.2.3 miR-275系统进化树分析 | 第28-29页 |
| 2.2.4 靶标预测 | 第29页 |
| 2.3 小结 | 第29-31页 |
| 第三章 卵黄原蛋白基因的克隆及生物特性分析 | 第31-43页 |
| 3.1 材料与方法 | 第31-37页 |
| 3.1.1 材料 | 第31-32页 |
| 3.1.1.1 虫种和血清 | 第31页 |
| 3.1.1.2 主要试剂 | 第31-32页 |
| 3.1.1.3 主要仪器 | 第32页 |
| 3.1.2 方法 | 第32-35页 |
| 3.1.2.1 引物合成 | 第32页 |
| 3.1.2.2 Total RNA提取及一链cDNA合成 | 第32页 |
| 3.1.2.3 扩增靶标基因卵黄原蛋白 | 第32-33页 |
| 3.1.2.4 胶回收PCR产物 | 第33-34页 |
| 3.1.2.5 克隆连接胶回收产物 | 第34页 |
| 3.1.2.6 连接产物转化 | 第34页 |
| 3.1.2.7 提取质粒 | 第34页 |
| 3.1.2.8 重组表达载体的构建和PCR鉴定 | 第34-35页 |
| 3.1.3 原核表达及免疫原性分析 | 第35-37页 |
| 3.1.3.1 诱导表达 | 第35页 |
| 3.1.3.2 融合蛋白可溶性分析 | 第35-36页 |
| 3.1.3.3 融合蛋白小量纯化 | 第36-37页 |
| 3.1.3.4 Western blot | 第37页 |
| 3.2 结果 | 第37-41页 |
| 3.2.1 卵黄原蛋白基因的PCR扩增 | 第37页 |
| 3.2.2 卵黄原蛋白基因序列分析 | 第37-38页 |
| 3.2.3 系统发生关系分析 | 第38-39页 |
| 3.2.4 重组表达载体构建及PCR鉴定 | 第39-40页 |
| 3.2.5 重组蛋白SDS-PAGE及其纯化分析 | 第40页 |
| 3.2.6 重组蛋白Western Blot分析 | 第40-41页 |
| 3.3 小结 | 第41-43页 |
| 第四章 miR-275和卵黄原蛋白基因在血红扇头蜱卵不同发育时期的表达水平 | 第43-48页 |
| 4.1 材料 | 第43页 |
| 4.1.1 试剂 | 第43页 |
| 4.1.2 仪器 | 第43页 |
| 4.1.3 提取卵不同发育时期总RNA | 第43页 |
| 4.2 miR-275和卵黄原蛋白在血红扇头蜱卵不同发育时期的表达水平 | 第43-44页 |
| 4.2.1 荧光定量引物设计合成 | 第43页 |
| 4.2.2 荧光相对定量反应 | 第43-44页 |
| 4.3 结果 | 第44-46页 |
| 4.3.1 卵黄原蛋白基因在成蜱不同吸血时期表达水平 | 第44-45页 |
| 4.3.2 miR-275在成蜱不同吸血时期表达水平 | 第45页 |
| 4.3.3 卵黄原蛋白基因在卵不同发育时期表达水平 | 第45页 |
| 4.3.4 miR-275在卵不同发育时期表达水平 | 第45-46页 |
| 4.4 小结 | 第46-48页 |
| 第五章 卵黄原蛋白基因的RNAi实验 | 第48-55页 |
| 5.1 材料 | 第48页 |
| 5.1.1 不同发育时期卵总RNA的提取和一链cDNA合成 | 第48页 |
| 5.1.2 试剂 | 第48页 |
| 5.1.3 仪器 | 第48页 |
| 5.2 方法 | 第48-50页 |
| 5.2.1 RNAi相关引物序列 | 第48-49页 |
| 5.2.2 扩增Liner DNA模板 | 第49页 |
| 5.2.3 制备dsRNA | 第49-50页 |
| 5.2.3.1 ssRNA合成 | 第49-50页 |
| 5.2.3.2 纯化dsRNA | 第50页 |
| 5.2.3.3 检测 | 第50页 |
| 5.2.4 注射dsRNA | 第50页 |
| 5.2.4.1 干扰效果分析 | 第50页 |
| 5.2.4.2 干扰后衅的生理情况 | 第50页 |
| 5.3 结果 | 第50-52页 |
| 5.3.1 卵黄原蛋白基因沉默分析 | 第50-51页 |
| 5.3.2 RNAi后蜱的生理指标变化统计 | 第51页 |
| 5.3.3 RNAi后miR-275和卵黄原蛋白基因表达水平 | 第51-52页 |
| 5.4 小结 | 第52-55页 |
| 第六章 全文结论 | 第55-56页 |
| 参考文献 | 第56-66页 |
| ABSTRACT | 第66-67页 |
