| 摘要 | 第6-8页 |
| ABSTRACT | 第8-9页 |
| 第一章 文献综述 | 第13-22页 |
| 1.1 苹果树腐烂病研究进展 | 第13-14页 |
| 1.1.1 苹果树腐烂病概况 | 第13页 |
| 1.1.2 苹果树腐烂病菌的生物学特征 | 第13-14页 |
| 1.1.3 苹果树腐烂病菌致病分子机理的研究进展 | 第14页 |
| 1.2 小RNA研究进展 | 第14-15页 |
| 1.3 小RNA生成通路研究进展 | 第15-18页 |
| 1.3.1 miRNA和siRNA的生物合成 | 第15-16页 |
| 1.3.2 piRNA的生物合成 | 第16-18页 |
| 1.4 小RNA生成通路相关基因研究进展 | 第18-21页 |
| 1.4.1 Dicer研究概况 | 第19-20页 |
| 1.4.2 Argonaute研究概况 | 第20-21页 |
| 1.5 真菌进化过程中小RNA调控的变化 | 第21页 |
| 1.6 本研究的目的意义 | 第21-22页 |
| 第二章 苹果树腐烂病菌VMdcl和VMago基因敲除载体的构建 | 第22-34页 |
| 2.1 实验材料 | 第22页 |
| 2.1.1 菌株 | 第22页 |
| 2.1.2 载体 | 第22页 |
| 2.1.3 仪器设备 | 第22页 |
| 2.1.4 主要试剂和耗材 | 第22页 |
| 2.1.5 常用试剂溶液及培养基 | 第22页 |
| 2.2 实验方法 | 第22-26页 |
| 2.2.1 野生型菌株03-8基因组的提取-CTAB法 | 第22-23页 |
| 2.2.2 质粒提取 | 第23页 |
| 2.2.3 VMDCL和VMAGO基因的鉴定及序列分析 | 第23-24页 |
| 2.2.4 VMDCL和VMAGO基因敲除和检测引物设计 | 第24页 |
| 2.2.5 基因敲除载体的构建 | 第24-26页 |
| 2.2.6 PCR产物浓缩 | 第26页 |
| 2.3 结果与分析 | 第26-32页 |
| 2.3.1 VMDCL和VMAGO基因的蛋白序列分析及进化树分析 | 第26-29页 |
| 2.3.2 VMDCL和VMAGO敲除载体的构建 | 第29-32页 |
| 2.4 小结与讨论 | 第32-34页 |
| 第三章 苹果树腐烂病菌VMdcl和VMago基因敲除及转化子的鉴定 | 第34-42页 |
| 3.1 材料、试剂及仪器 | 第34页 |
| 3.1.1 材料 | 第34页 |
| 3.1.2 主要试剂和耗材 | 第34页 |
| 3.1.3 仪器 | 第34页 |
| 3.2 实验方法 | 第34-38页 |
| 3.2.1 苹果树腐烂病菌野生型03-8原生质体的制备及遗传转化 | 第34-35页 |
| 3.2.2 敲除突变体的筛选及鉴定 | 第35-38页 |
| 3.3 结果与分析 | 第38-41页 |
| 3.3.1 VMDCL和VMAGO敲除转化子统计 | 第38页 |
| 3.3.2 转化子PCR检测与Southern鉴定 | 第38-41页 |
| 3.4 小结与讨论 | 第41-42页 |
| 第四章 苹果树腐烂病菌dicer-like和Argonaute基因功能的初步研究 | 第42-53页 |
| 4.1 材料、培养基及仪器 | 第42页 |
| 4.1.1 材料 | 第42页 |
| 4.1.2 培养基配方 | 第42页 |
| 4.1.3 仪器 | 第42页 |
| 4.2 方法 | 第42-44页 |
| 4.2.1 转化子的纯化 | 第42页 |
| 4.2.2 菌丝形态和菌丝顶端的观察 | 第42-43页 |
| 4.2.3 菌落形态及生长速度的测定 | 第43页 |
| 4.2.4 生物产量的测定 | 第43页 |
| 4.2.5 突变体繁殖体形成情况 | 第43页 |
| 4.2.6 致病力测定 | 第43-44页 |
| 4.2.7 不同盐离子浓度的敏感性 | 第44页 |
| 4.2.8 对外源渗透、氧化胁迫的敏感性测定 | 第44页 |
| 4.3 结果与分析 | 第44-51页 |
| 4.3.1 突变体菌落形态观察 | 第44-45页 |
| 4.3.2 突变体菌丝形态观察 | 第45-46页 |
| 4.3.3 突变体菌丝生长速率测定 | 第46-47页 |
| 4.3.4 敲除突变体生物产量测定 | 第47-48页 |
| 4.3.5 致病力测定 | 第48页 |
| 4.3.6 活性氧胁迫条件下敲除突变体生长情况 | 第48-49页 |
| 4.3.7 渗透胁迫条件下敲除突变体生长情况 | 第49-50页 |
| 4.3.8 敲除突变体繁殖体产生情况 | 第50-51页 |
| 4.4 小结与讨论 | 第51-53页 |
| 第五章 结论与展望 | 第53-54页 |
| 参考文献 | 第54-61页 |
| 附录 | 第61-68页 |
| 致谢 | 第68-69页 |
| 作者简介 | 第69页 |
