| 摘要 | 第6-8页 |
| Abstract | 第8-10页 |
| 绪论 | 第15-28页 |
| 1.1 失眠 | 第15页 |
| 1.2 镇静安神类药物的研究现状 | 第15-16页 |
| 1.3 组胺受体研究概述及其重要意义 | 第16-21页 |
| 1.3.1 组胺及其代谢 | 第16页 |
| 1.3.2 组胺受体 | 第16-21页 |
| 1.4 FRET技术及组胺分子探针 | 第21-24页 |
| 1.4.1 FRET技术 | 第21-22页 |
| 1.4.2 组胺分子探针 | 第22-24页 |
| 1.5 研究目的和意义 | 第24-26页 |
| 1.6 本实验研究路线 | 第26-28页 |
| 1.6.1 构建分子探针质粒 | 第26页 |
| 1.6.2 转染并筛选细胞株 | 第26-27页 |
| 1.6.3 细胞株的鉴定 | 第27页 |
| 1.6.4 所构建质粒活性的检测 | 第27页 |
| 1.6.5 中药活性成分筛选 | 第27-28页 |
| 第二章 PCDNA5-FRT-TO-VSV-H1R-YFP(610bp)-TURQUOISE质粒的构建以及瞬时转染293T细胞 | 第28-53页 |
| 2.1 实验材料 | 第28-33页 |
| 2.1.1 载体、菌种及细胞 | 第28页 |
| 2.1.2 实验仪器和耗材 | 第28-29页 |
| 2.1.3 实验试剂和药品 | 第29-30页 |
| 2.1.4 实验试剂的配置 | 第30-33页 |
| 2.2 实验内容与结果 | 第33-47页 |
| 2.2.1 分子实验 | 第33-42页 |
| 2.2.2 细胞实验 | 第42-47页 |
| 2.3 实验结果以及分析 | 第47-51页 |
| 2.3.1 利用菌液PCR鉴定H1R受体连入PCDNA5-FRT-TO-Turquoise | 第47-48页 |
| 2.3.2 利用菌液PCR和PstⅠ单酶切鉴定YFP连入PCDNA5-FRT-T0-H1R-Turquoise(H1R-3-LOOP-左右各保留12个氨基酸) | 第48-49页 |
| 2.3.3 瞬时转染293T检测YFP和Turquoise的荧光表达情况 | 第49-51页 |
| 2.3.4 利用PCR鉴定YFP大小 | 第51页 |
| 2.4 小结 | 第51-53页 |
| 第三章 PCDNA5-FRT-TO-VSV-H1R (12AA,12AA或21AA, 12AA)-YFP(720bp)-TURQUOISE稳定株构建 | 第53-65页 |
| 3.1 实验材料 | 第53-56页 |
| 3.1.1 载体、菌种及细胞 | 第53页 |
| 3.1.2 实验仪器 | 第53页 |
| 3.1.3 实验试剂和用品 | 第53-54页 |
| 3.1.4 实验试剂的配置 | 第54-56页 |
| 3.2 实验内容与结果 | 第56-59页 |
| 3.2.1 分子实验 | 第56页 |
| 3.2.2 细胞实验 | 第56-59页 |
| 3.3 实验结果与分析 | 第59-65页 |
| 3.3.1 利用菌液PCR鉴定H1R受体连入PCDNA5-FRT-TO-Turquoise | 第59-60页 |
| 3.3.2 利用菌液PCR和Pst Ⅰ单酶切鉴定YFP连入PCDNA5-FRT-TO-H1R-Turquoise(H1R-3-LOOP-左右各保留12个氨基酸) | 第60-61页 |
| 3.3.3 利用菌液PCR和Pst Ⅰ单酶切鉴定YFP连入PCDNA5-FRT-TO-H1R-Turquoise(H1R-3-LOOP-左右各保留21,12个氨基酸) | 第61-62页 |
| 3.3.4 瞬时转染293T检测YFP和Turquoise的荧光正常表达 | 第62-65页 |
| 第四章 PCDNA5-FRT-TO-VSV-H3R(12AA,12AA)-YFP(720bp) -TURQUOISE稳定株的构建 | 第65-71页 |
| 4.1 实验材料 | 第65-66页 |
| 4.1.1 载体,菌种以及细胞 | 第65页 |
| 4.1.2 实验仪器以及耗材 | 第65页 |
| 4.1.3 实验试剂和药品 | 第65页 |
| 4.1.4 实验试剂的配置 | 第65-66页 |
| 4.2 实验内容 | 第66页 |
| 4.2.1 分子实验 | 第66页 |
| 4.2.2 细胞实验 | 第66页 |
| 4.3 实验结果与分析 | 第66-71页 |
| 4.3.1 利用菌液PCR鉴定H1R受体连入PCDNA5-FRT-TO-Turquoise | 第66-67页 |
| 4.3.2 利用菌液PCR和Pst Ⅰ单酶切鉴定YFP连入PCDNA5-FRT-TO-H1R-Turquoise(H1R-3-LOOP-左右各保留12个氨基酸) | 第67-68页 |
| 4.3.3 瞬时转染293T检测YFP和Turquoise的荧光正常表达 | 第68-71页 |
| 第五章 H1R和H3R稳定株的诱导表达以及受体的活性检测 | 第71-102页 |
| 5.1 实验材料 | 第71-77页 |
| 5.1.1 细胞 | 第71页 |
| 5.1.2 实验仪器以及耗材 | 第71-72页 |
| 5.1.3 实验试剂和药品 | 第72-74页 |
| 5.1.4 实验试剂的配置 | 第74-77页 |
| 5.2 实验内容 | 第77-86页 |
| 5.2.1 H1R稳定株与H3R稳定株细胞的传代 | 第77页 |
| 5.2.2 H1R稳定株与H3R稳定株细胞的传代 | 第77-78页 |
| 5.2.3 PCDNA5-FRT-TO-H1R(3-loop各12AA,3-loop-左21AA-有-12AA)-YFP-Turquoise稳定株以及PCDNA5-FRT-TO-H3R(3-loop各12AA)-YFP-Turquoise的荧光蛋白表达以及H1R受体表达量的检测 | 第78-84页 |
| 5.2.4 PCDNA5-FRT-TO-H1R(3-loop各12AA,3-loop-左21AA-有-12AA)-YFP-Turquoise稳定株以及PCDNA5-FRT-TO-H3R(3-loop各12AA)-YFP-Turquoise的受体活性检测 | 第84-86页 |
| 5.3 实验结果与分析 | 第86-101页 |
| 5.3.1 在时间梯度和浓度梯度对PCDNAs-FRT-TO-H1R(3-loop各12AA)-YFP-Turquoise稳定株诱导效应的检测 | 第86-92页 |
| 5.3.2 PCDNA5-FRT-TO-H1R(3-loop各12AA,3-loop-左21AA-有-12AA)-YFP-Turquoise稳定株以及PCDNA5-FRT-TO-H3R(3-loop各12AA)-YFP-Turquoise的荧光蛋白表达以及H1R和H3R受体表达量和活性的检测 | 第92-95页 |
| 5.3.3 PCDNA5-FRT-TO-H1R(3-loop各12AA,3-loop-左21AA-有-12AA)-YFP-Turquoise稳定株以及PCDNA5-FRT-TO-H3R(3-loop各12AA)-YFP-Turquoise的活性检测 | 第95-101页 |
| 5.4 小结 | 第101-102页 |
| 第六章 PCDNA5-FRT-TO-H1R(3-loop各12AA, 3-loop-左21AA-有-12AA)-YFP-Turquoise稳定株和PCDNA5-FRT-TO-H3R(3-loop各12AA)-YFP-Turquoise稳定株在荧光显微镜下FRET基线制作 | 第102-109页 |
| 6.1 实验材料 | 第102-103页 |
| 6.1.1 细胞 | 第102页 |
| 6.1.2 实验仪器 | 第102页 |
| 6.1.3 实验试剂 | 第102-103页 |
| 6.1.4 实验溶液配制 | 第103页 |
| 6.2 实验过程 | 第103-104页 |
| 6.2.1 多聚赖氨酸包被8mm盖玻片 | 第103页 |
| 6.2.2 铺板 | 第103页 |
| 6.2.3 诱导 | 第103页 |
| 6.2.4 制作FRET基线 | 第103-104页 |
| 6.3 实验结果与讨论 | 第104-108页 |
| 6.3.1 PCDNA5-FRT-TO-H1R(3-loop各12AA,3-loop-左21AA-有-12AA)-YFP-Turquoise稳定株的FRET基线制作 | 第104-106页 |
| 6.3.2 PCDNA5-FRT-TO-H3R(3-loop各12AA)-YFP-Turquoise稳定株 | 第106-108页 |
| 6.4 小结 | 第108-109页 |
| 第七章 PCDNA5-FRT-TO-H3R稳定株筛选石菖蒲和刺五加中镇静安神成分 | 第109-115页 |
| 7.1 实验材料 | 第109-111页 |
| 7.1.1 细胞 | 第109页 |
| 7.1.2 实验仪器 | 第109-110页 |
| 7.1.3 实验试剂 | 第110-111页 |
| 7.2 实验过程 | 第111-112页 |
| 7.2.1 中药的提取 | 第111页 |
| 7.2.2 中药筛选 | 第111-112页 |
| 7.3 实验结果与讨论 | 第112-114页 |
| 7.4 小结 | 第114-115页 |
| 第八章 结论 | 第115-118页 |
| 参考文献 | 第118-124页 |
| 致谢 | 第124-125页 |
| 附录A | 第125页 |
