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以组胺受体空间结构变化为指针筛选石菖蒲、刺五加中的镇静安神成分

摘要第6-8页
Abstract第8-10页
绪论第15-28页
    1.1 失眠第15页
    1.2 镇静安神类药物的研究现状第15-16页
    1.3 组胺受体研究概述及其重要意义第16-21页
        1.3.1 组胺及其代谢第16页
        1.3.2 组胺受体第16-21页
    1.4 FRET技术及组胺分子探针第21-24页
        1.4.1 FRET技术第21-22页
        1.4.2 组胺分子探针第22-24页
    1.5 研究目的和意义第24-26页
    1.6 本实验研究路线第26-28页
        1.6.1 构建分子探针质粒第26页
        1.6.2 转染并筛选细胞株第26-27页
        1.6.3 细胞株的鉴定第27页
        1.6.4 所构建质粒活性的检测第27页
        1.6.5 中药活性成分筛选第27-28页
第二章 PCDNA5-FRT-TO-VSV-H1R-YFP(610bp)-TURQUOISE质粒的构建以及瞬时转染293T细胞第28-53页
    2.1 实验材料第28-33页
        2.1.1 载体、菌种及细胞第28页
        2.1.2 实验仪器和耗材第28-29页
        2.1.3 实验试剂和药品第29-30页
        2.1.4 实验试剂的配置第30-33页
    2.2 实验内容与结果第33-47页
        2.2.1 分子实验第33-42页
        2.2.2 细胞实验第42-47页
    2.3 实验结果以及分析第47-51页
        2.3.1 利用菌液PCR鉴定H1R受体连入PCDNA5-FRT-TO-Turquoise第47-48页
        2.3.2 利用菌液PCR和PstⅠ单酶切鉴定YFP连入PCDNA5-FRT-T0-H1R-Turquoise(H1R-3-LOOP-左右各保留12个氨基酸)第48-49页
        2.3.3 瞬时转染293T检测YFP和Turquoise的荧光表达情况第49-51页
        2.3.4 利用PCR鉴定YFP大小第51页
    2.4 小结第51-53页
第三章 PCDNA5-FRT-TO-VSV-H1R (12AA,12AA或21AA, 12AA)-YFP(720bp)-TURQUOISE稳定株构建第53-65页
    3.1 实验材料第53-56页
        3.1.1 载体、菌种及细胞第53页
        3.1.2 实验仪器第53页
        3.1.3 实验试剂和用品第53-54页
        3.1.4 实验试剂的配置第54-56页
    3.2 实验内容与结果第56-59页
        3.2.1 分子实验第56页
        3.2.2 细胞实验第56-59页
    3.3 实验结果与分析第59-65页
        3.3.1 利用菌液PCR鉴定H1R受体连入PCDNA5-FRT-TO-Turquoise第59-60页
        3.3.2 利用菌液PCR和Pst Ⅰ单酶切鉴定YFP连入PCDNA5-FRT-TO-H1R-Turquoise(H1R-3-LOOP-左右各保留12个氨基酸)第60-61页
        3.3.3 利用菌液PCR和Pst Ⅰ单酶切鉴定YFP连入PCDNA5-FRT-TO-H1R-Turquoise(H1R-3-LOOP-左右各保留21,12个氨基酸)第61-62页
        3.3.4 瞬时转染293T检测YFP和Turquoise的荧光正常表达第62-65页
第四章 PCDNA5-FRT-TO-VSV-H3R(12AA,12AA)-YFP(720bp) -TURQUOISE稳定株的构建第65-71页
    4.1 实验材料第65-66页
        4.1.1 载体,菌种以及细胞第65页
        4.1.2 实验仪器以及耗材第65页
        4.1.3 实验试剂和药品第65页
        4.1.4 实验试剂的配置第65-66页
    4.2 实验内容第66页
        4.2.1 分子实验第66页
        4.2.2 细胞实验第66页
    4.3 实验结果与分析第66-71页
        4.3.1 利用菌液PCR鉴定H1R受体连入PCDNA5-FRT-TO-Turquoise第66-67页
        4.3.2 利用菌液PCR和Pst Ⅰ单酶切鉴定YFP连入PCDNA5-FRT-TO-H1R-Turquoise(H1R-3-LOOP-左右各保留12个氨基酸)第67-68页
        4.3.3 瞬时转染293T检测YFP和Turquoise的荧光正常表达第68-71页
第五章 H1R和H3R稳定株的诱导表达以及受体的活性检测第71-102页
    5.1 实验材料第71-77页
        5.1.1 细胞第71页
        5.1.2 实验仪器以及耗材第71-72页
        5.1.3 实验试剂和药品第72-74页
        5.1.4 实验试剂的配置第74-77页
    5.2 实验内容第77-86页
        5.2.1 H1R稳定株与H3R稳定株细胞的传代第77页
        5.2.2 H1R稳定株与H3R稳定株细胞的传代第77-78页
        5.2.3 PCDNA5-FRT-TO-H1R(3-loop各12AA,3-loop-左21AA-有-12AA)-YFP-Turquoise稳定株以及PCDNA5-FRT-TO-H3R(3-loop各12AA)-YFP-Turquoise的荧光蛋白表达以及H1R受体表达量的检测第78-84页
        5.2.4 PCDNA5-FRT-TO-H1R(3-loop各12AA,3-loop-左21AA-有-12AA)-YFP-Turquoise稳定株以及PCDNA5-FRT-TO-H3R(3-loop各12AA)-YFP-Turquoise的受体活性检测第84-86页
    5.3 实验结果与分析第86-101页
        5.3.1 在时间梯度和浓度梯度对PCDNAs-FRT-TO-H1R(3-loop各12AA)-YFP-Turquoise稳定株诱导效应的检测第86-92页
        5.3.2 PCDNA5-FRT-TO-H1R(3-loop各12AA,3-loop-左21AA-有-12AA)-YFP-Turquoise稳定株以及PCDNA5-FRT-TO-H3R(3-loop各12AA)-YFP-Turquoise的荧光蛋白表达以及H1R和H3R受体表达量和活性的检测第92-95页
        5.3.3 PCDNA5-FRT-TO-H1R(3-loop各12AA,3-loop-左21AA-有-12AA)-YFP-Turquoise稳定株以及PCDNA5-FRT-TO-H3R(3-loop各12AA)-YFP-Turquoise的活性检测第95-101页
    5.4 小结第101-102页
第六章 PCDNA5-FRT-TO-H1R(3-loop各12AA, 3-loop-左21AA-有-12AA)-YFP-Turquoise稳定株和PCDNA5-FRT-TO-H3R(3-loop各12AA)-YFP-Turquoise稳定株在荧光显微镜下FRET基线制作第102-109页
    6.1 实验材料第102-103页
        6.1.1 细胞第102页
        6.1.2 实验仪器第102页
        6.1.3 实验试剂第102-103页
        6.1.4 实验溶液配制第103页
    6.2 实验过程第103-104页
        6.2.1 多聚赖氨酸包被8mm盖玻片第103页
        6.2.2 铺板第103页
        6.2.3 诱导第103页
        6.2.4 制作FRET基线第103-104页
    6.3 实验结果与讨论第104-108页
        6.3.1 PCDNA5-FRT-TO-H1R(3-loop各12AA,3-loop-左21AA-有-12AA)-YFP-Turquoise稳定株的FRET基线制作第104-106页
        6.3.2 PCDNA5-FRT-TO-H3R(3-loop各12AA)-YFP-Turquoise稳定株第106-108页
    6.4 小结第108-109页
第七章 PCDNA5-FRT-TO-H3R稳定株筛选石菖蒲和刺五加中镇静安神成分第109-115页
    7.1 实验材料第109-111页
        7.1.1 细胞第109页
        7.1.2 实验仪器第109-110页
        7.1.3 实验试剂第110-111页
    7.2 实验过程第111-112页
        7.2.1 中药的提取第111页
        7.2.2 中药筛选第111-112页
    7.3 实验结果与讨论第112-114页
    7.4 小结第114-115页
第八章 结论第115-118页
参考文献第118-124页
致谢第124-125页
附录A第125页

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