| 摘要 | 第4-6页 |
| ABSTRACT | 第6-8页 |
| 第一部分 文献综述 | 第12-25页 |
| 引言 | 第12-13页 |
| 1 禽类原始生殖细胞和干细胞 | 第13-15页 |
| 1.1 精原干细胞(SSCs)或卵原干细胞(OSCs) | 第13页 |
| 1.2 胚胎生殖细胞(EGCs) | 第13页 |
| 1.3 胚胎干细胞(ESCs) | 第13-14页 |
| 1.4 诱导多能性干细胞(iPSCs) | 第14页 |
| 1.5 ESCs和iPSCs在一定条件下可特化为PGCs | 第14-15页 |
| 2 禽类PGCs的起源、迁移和生物学形态 | 第15-17页 |
| 2.1 禽类PGCs的起源及迁移 | 第15-17页 |
| 2.2 形态特征及生物学特性 | 第17页 |
| 3 禽类PGCs的分离及体外培养 | 第17-21页 |
| 3.1 禽类PGCs的分离 | 第17-18页 |
| 3.2 禽类PGCs的体外培养 | 第18-21页 |
| 4 禽类PGCs的体外鉴定 | 第21-22页 |
| 4.1 形态鉴定 | 第21页 |
| 4.2 过碘酸雪夫氏试剂(PAS)染色检测 | 第21页 |
| 4.3 碱性磷酸酶活性(AP)检测 | 第21页 |
| 4.4 免疫荧光染色检测 | 第21-22页 |
| 4.5 嵌合体试验 | 第22页 |
| 5 禽类PGCs的研究进展及应用前景 | 第22-24页 |
| 5.1 种质资源保存 | 第22-23页 |
| 5.2 转基因应用 | 第23-24页 |
| 6 本研究的目的及意义 | 第24-25页 |
| 第二部分 试验研究 | 第25-60页 |
| 第一章 黄羽鸡原始生殖细胞的分离、培养及鉴定 | 第25-52页 |
| 引言 | 第25-26页 |
| 第一节 黄羽鸡原始生殖细胞的分离及培养 | 第26-40页 |
| 1 材料与方法 | 第26-33页 |
| 1.1 实验材料 | 第26页 |
| 1.2 主要试剂 | 第26-27页 |
| 1.3 仪器和耗材 | 第27-28页 |
| 1.4 主要溶液配置 | 第28-29页 |
| 1.5 MEF的分离、培养及冷冻 | 第29-30页 |
| 1.6 饲养层的制备 | 第30-31页 |
| 1.7 BRL条件培养液的制备 | 第31页 |
| 1.8 PGCs的分离 | 第31-32页 |
| 1.9 PGCs的体外培养 | 第32页 |
| 1.10 PGCs的冷冻保存及复苏 | 第32-33页 |
| 1.11 生长曲线的制作 | 第33页 |
| 2 实验结果 | 第33-38页 |
| 2.1 饲养层的制备 | 第33页 |
| 2.2 血液来源的PGCs(cPGCs)的体外培养 | 第33-35页 |
| 2.3 性腺来源的PGCs(gPGCs)的体外培养 | 第35-37页 |
| 2.4 不同分离来源的PGCs之间的比较 | 第37页 |
| 2.5 细胞培养小室对PGCs体外培养的影响 | 第37页 |
| 2.6 不同饲养层对PGCs体外培养的影响 | 第37-38页 |
| 3 分析与讨论 | 第38-39页 |
| 3.1 饲养层的制备及对PGCs体外培养的影响 | 第38页 |
| 3.2 细胞培养小室对PGCs建系能力的影响 | 第38-39页 |
| 4 小结 | 第39-40页 |
| 第二节 体外培养的PGCs的生物学特性的鉴定 | 第40-52页 |
| 1 材料与方法 | 第40-45页 |
| 1.1 实验材料 | 第40页 |
| 1.2 主要试剂 | 第40页 |
| 1.3 仪器及耗材 | 第40-45页 |
| 2 实验结果 | 第45-49页 |
| 2.1 形态鉴定 | 第45页 |
| 2.2 多能性基因的RT-PCR鉴定 | 第45-46页 |
| 2.3 碱性磷酸酶染色鉴定 | 第46-47页 |
| 2.4 SSEA-1和EMA-1免疫荧光染色 | 第47-48页 |
| 2.5 性别鉴定 | 第48-49页 |
| 2.6 向性腺的迁移能力鉴定 | 第49页 |
| 3 分析与讨论 | 第49-51页 |
| 3.1 形态观察 | 第49页 |
| 3.2 碱性磷酸酶活性检测 | 第49-50页 |
| 3.3 SSEA-1和EMA-1免疫荧光染色 | 第50页 |
| 3.4 RT-PCR分析多能性基因的表达 | 第50页 |
| 3.5 向性腺迁移能力的验证 | 第50页 |
| 3.6 性别鉴定雌性株的缺失 | 第50-51页 |
| 4 小结 | 第51-52页 |
| 第二章 鸡PGC转基因应用的初步研究 | 第52-60页 |
| 引言 | 第52页 |
| 1 材料与方法 | 第52-56页 |
| 1.1 实验材料 | 第52页 |
| 1.2 主要试剂 | 第52-53页 |
| 1.3 仪器和耗材 | 第53页 |
| 1.4 脂质体转染法优化 | 第53-54页 |
| 1.5 电穿孔转染法优化 | 第54-55页 |
| 1.6 转染效率的计算方法 | 第55页 |
| 1.7 GFP基因导入PGCs | 第55页 |
| 1.8 GFP-PGCs的筛选建系 | 第55页 |
| 1.9 GFP-PGCs向性腺迁移 | 第55-56页 |
| 2 结果与分析 | 第56-58页 |
| 2.1 脂质体转染效率的优化 | 第56页 |
| 2.2 电转染效率的优化 | 第56页 |
| 2.3 GFP-PGCs细胞系的建立 | 第56-58页 |
| 2.4 GFP-PGCs向性腺迁移 | 第58页 |
| 3 讨论 | 第58-59页 |
| 3.1 鸡PGCs转基因效率的优化 | 第58-59页 |
| 3.2 PGCs的基因修饰及向性腺的迁移 | 第59页 |
| 4 小结 | 第59-60页 |
| 总结论 | 第60-61页 |
| 参考文献 | 第61-68页 |
| 附录 重要缩略词中英文对照表 | 第68-70页 |
| 致谢 | 第70-71页 |
| 硕士期间发表的论文 | 第71页 |
