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DNA损伤应答中长非编码RNA LRIK、ncRNA0301及蛋白质XPF的功能研究

摘要第5-7页
ABSTRACT第7-8页
第1章 绪论第14-40页
    1.1 引言第14-18页
        1.1.1 DNA损伤第14页
        1.1.2 DNA损伤应答第14-16页
        1.1.3 DNA损伤与疾病第16-18页
    1.2 DNA损伤修复途径第18-29页
        1.2.1 碱基切除修复第19-20页
        1.2.2 错配修复第20-24页
        1.2.3 核苷酸剪切修复第24-26页
        1.2.4 双链断裂修复第26-29页
        1.2.5 其他DNA损伤修复第29页
    1.3 长非编码RNA的研究第29-37页
        1.3.1 长非编码RNA的特征第29-31页
        1.3.2 长非编码RNA的功能第31页
        1.3.3 长非编码RNA发挥功能的方式第31-34页
        1.3.4 长非编码RNA的研究方法第34-35页
        1.3.5 长非编码RNA与疾病第35-37页
    1.4 长非编码RNA在DNA损伤修复中的研究第37-38页
        1.4.1 调控DNA损伤应答相关基因第37-38页
        1.4.2 调节基因组的稳定性第38页
        1.4.3 直接参与DNA损伤修复第38页
    1.5 论文主要研究内容和意义第38-40页
第2章 长非编码RNALRIK参与DNA双链断裂的修复第40-72页
    2.1 前言第40页
    2.2 材料和方法第40-55页
        2.2.1 细胞培养与处理第40-41页
        2.2.2 总RNA提取第41页
        2.2.3 基因组DNA的去除以及逆转录第41-42页
        2.2.4 实时荧光定量PCR与PCR第42-43页
        2.2.5 cDNA末端快速扩增技术第43-44页
        2.2.6 体外转录带标记的RNA第44-45页
        2.2.7 Northern Blot第45-46页
        2.2.8 细胞组分分离第46页
        2.2.9 免疫荧光第46-47页
        2.2.10 RNA原位杂交第47-48页
        2.2.11 载体构建第48页
        2.2.12 质粒转染第48页
        2.2.13 集落形成实验第48-49页
        2.2.14 中性彗星实验第49页
        2.2.15 基因组DNA的提取第49-50页
        2.2.16 CPD修复效率的检测第50-51页
        2.2.17 主要缓冲液的配制第51-53页
        2.2.18 抗体信息第53页
        2.2.19 统计学分析第53-54页
        2.2.20 本章所用引物等序列第54-55页
    2.3 结果和分析第55-71页
        2.3.1 LRIK的发现第55-58页
        2.3.2 LRIK的表征第58-61页
        2.3.3 LRIK对CPD修复效率的影响第61-63页
        2.3.4 LRIK对紫外光造成的DSB修复效率的影响第63-65页
        2.3.5 DSB诱导剂使LRIK转录上调第65-67页
        2.3.6 LRIK对DNA双链断裂修复效率的影响第67-71页
    2.4 本章小结第71-72页
第3章 长非编码RNA LRIK参与非同源末端连接修复的分子生物学机理第72-102页
    3.1 前言第72-73页
    3.2 材料和方法第73-80页
        3.2.1 细胞培养第73页
        3.2.2 总RNA提取第73页
        3.2.3 基因组DNA的去除以及逆转录第73页
        3.2.4 实时荧光定量PCR第73页
        3.2.5 载体构建及质粒转染第73页
        3.2.6 免疫荧光第73页
        3.2.7 集落形成实验第73页
        3.2.8 中性彗星实验第73页
        3.2.9 RNA pull-down第73-74页
        3.2.10 蛋白质银染第74-75页
        3.2.11 RNA免疫共沉淀第75-76页
        3.2.12 染色质复合物的提取第76页
        3.2.13 Western blot第76页
        3.2.14 主要缓冲液的配制第76-78页
        3.2.15 抗体信息第78-79页
        3.2.16 统计学分析第79页
        3.2.17 本章所用引物等序列第79-80页
    3.3 结果和分析第80-100页
        3.3.1 LRIK与Ku70相互作用第80-84页
        3.3.2 LRIK对NHEJ修复蛋白的影响第84-85页
        3.3.3 LRIK影响NHEJ修复蛋白结合在有DNA损伤的染色质第85-88页
        3.3.4 LRIK影响γH2AXfoci的产生第88-93页
        3.3.5 LRIK与Ku70协同影响DSB修复第93-97页
        3.3.6 LRIK与Ku70协同发挥作用第97-100页
    3.4 本章小结第100-102页
第4章 长非编码RNA 0301在核苷酸剪切修复中的作用第102-114页
    4.1 前言第102页
    4.2 材料和方法第102-105页
        4.2.1 细胞培养与处理第102-103页
        4.2.2 总RNA提取第103页
        4.2.3 基因组DNA的去除及逆转录第103页
        4.2.4 实时荧光定量PCR与PCR第103页
        4.2.5 cDNA末端快速扩增技术第103页
        4.2.6 体外转录RNA探针第103页
        4.2.7 细胞组分分离第103页
        4.2.8 载体构建第103页
        4.2.9 质粒转染第103页
        4.2.10 RNA pull-down第103页
        4.2.11 蛋白质银染第103页
        4.2.12 RNA免疫共沉淀第103-104页
        4.2.13 集落形成实验第104页
        4.2.14 Western blot第104页
        4.2.15 基因组DNA的提取第104页
        4.2.16 CPD修复效率检测第104页
        4.2.17 抗体信息第104页
        4.2.18 本章所用引物序列第104-105页
    4.3 结果和分析第105-112页
        4.3.1 长非编码RNA 0301的发现第105-106页
        4.3.2 长非编码RNA 0301的表征第106-107页
        4.3.3 长非编码RNA 0301影响CPD修复效率第107-110页
        4.3.4 长非编码RNA 0301与MAT1相互作用第110-112页
    4.4 本章小结第112-114页
第5章 XPF缓解银纳米颗粒引起的DNA损伤应答第114-132页
    5.1 前言第114-115页
    5.2 材料和方法第115-118页
        5.2.1 银纳米颗粒的制备第115页
        5.2.2 银纳米颗粒的表征第115页
        5.2.3 细胞培养及处理方法第115-116页
        5.2.4 载体构建及细胞转染第116页
        5.2.5 集落形成实验第116页
        5.2.6 Western blot第116页
        5.2.7 银纳米颗粒的内吞作用第116-117页
        5.2.8 ROS的检测方法第117页
        5.2.9 中性彗星实验第117页
        5.2.10 总RNA提取第117页
        5.2.11 基因组DNA的去除以及逆转录第117页
        5.2.12 实时荧光定量PCR第117页
        5.2.13 主要缓冲液配制第117-118页
        5.2.14 抗体信息第118页
    5.3 结果和分析第118-130页
        5.3.1 AgNPs的表征第118-120页
        5.3.2 XPF敲降细胞对AgNPs敏感第120-123页
        5.3.3 AgNPs在XPF突变或敲降细胞中引起DNA损伤第123-126页
        5.3.4 XPF缓解AgNPs引起的DNA损伤第126-130页
    5.4 本章小结第130-132页
结论第132-134页
参考文献第134-153页
附录A 攻读学位期间所发表的学术论文目录第153-154页
附录B 缩略语第154-155页
致谢第155-156页

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