| 摘要 | 第10-12页 |
| Abstract | 第12-13页 |
| 前言 | 第14-17页 |
| 第一部分 粉尘螨第Ⅴ类变应原Der f5基因的克隆、原核表达重组载体的构建与表达 | 第17-46页 |
| 研究内容 | 第17页 |
| 材料与方法 | 第17-38页 |
| 1 材料 | 第17-25页 |
| 1.1 质粒 | 第17页 |
| 1.2 菌株 | 第17页 |
| 1.3 引物 | 第17-18页 |
| 1.4 粉尘螨 | 第18页 |
| 1.5 主要试剂 | 第18-19页 |
| 1.6 主要仪器和设备 | 第19-20页 |
| 1.7 主要试剂配制 | 第20-25页 |
| 2 方法 | 第25-38页 |
| 2.1 粉尘螨总RNA的提取 | 第25-26页 |
| 2.2 Der f5基因的克隆与鉴定 | 第26-29页 |
| 2.3 p ET28a(+)-Der f 5 重组表达载体的构建 | 第29-32页 |
| 2.4 Der f5蛋白的小剂量诱导表达 | 第32-34页 |
| 2.5 Der f5蛋白的大剂量诱导表达 | 第34-35页 |
| 2.6 Der f5蛋白的纯化及鉴定 | 第35页 |
| 2.7 纯化产物的Western blot分析 | 第35-36页 |
| 2.8 Der f 5 蛋白浓度的测定 | 第36-38页 |
| 结果 | 第38-44页 |
| 1 目的基因Der f5的c DNA片段RT-PCR扩增 | 第38页 |
| 2 重组克隆载体p UC57-Der f5的构建及酶切鉴定 | 第38-40页 |
| 3 重组表达质粒p ET28a(+)-Der f 5 的鉴定 | 第40页 |
| 4 Der f5蛋白的SDS-PAGE分析 | 第40-41页 |
| 5 Der f5重组蛋白的纯化 | 第41-42页 |
| 6 纯化产物的免疫印记（Western blot）鉴定 | 第42-43页 |
| 7 Der f5蛋白浓度测定 | 第43-44页 |
| 讨论 | 第44-46页 |
| 第二部分Der f5重组蛋白对哮喘小鼠免疫治疗的效果分析 | 第46-58页 |
| 研究内容 | 第46页 |
| 材料与方法 | 第46-50页 |
| 1 材料 | 第46-48页 |
| 1.1 实验动物 | 第46页 |
| 1.2 主要试剂 | 第46-47页 |
| 1.3 主要试剂的配制 | 第47-48页 |
| 2 方法 | 第48-50页 |
| 2.1 实验分组 | 第48页 |
| 2.2 哮喘小鼠模型的建立 | 第48页 |
| 2.3 特异性免疫治疗 | 第48-49页 |
| 2.4 血清抗原特异性Ig E和Ig G1和Ig G2a抗体含量测定 | 第49页 |
| 2.5 支气管肺泡灌洗液（BALF）中嗜酸性粒细胞和白细胞总数计数 | 第49页 |
| 2.6 BALF中特异性细胞因子IL-5、IL-17和IFN-γ 的检测 | 第49页 |
| 2.7 ELISA法检测脾细胞培养上清中IL-5、IL-17和IFN-γ 因子含量 | 第49-50页 |
| 2.8 肺组织病理切片观察 | 第50页 |
| 2.9 数据分析 | 第50页 |
| 结果 | 第50-56页 |
| 1 各组小鼠症状和体征的改变 | 第50-51页 |
| 2 检测小鼠血清中抗原特异性Ig E、Ig G1和Ig G2a抗体表达的含量 | 第51-52页 |
| 3 支气管肺泡灌洗液（BALF）中细胞因子IL-5、IL-17和IFN-γ 的含量 | 第52-53页 |
| 4 脾细胞培养上清液（SCSS）中细胞因子IL-5、IL-17和IFN-γ 的含量 | 第53-54页 |
| 5 支气管肺泡灌洗液（BALF）中白细胞总数和嗜酸性粒细胞数目计数 | 第54页 |
| 6 肺组织切片HE染色 | 第54-56页 |
| 讨论 | 第56-58页 |
| 结论 | 第58页 |
| 论文创新点 | 第58-59页 |
| 参考文献 | 第59-65页 |
| 综述 | 第65-75页 |
| 参考文献 | 第69-75页 |
| 作者简介及读研期间主要科研成果 | 第75-76页 |
| 致谢 | 第76页 |
