| 摘要 | 第4-6页 |
| SUMMARY | 第6-7页 |
| 缩略词对照表 | 第13-15页 |
| 第一章 文献综述 | 第15-33页 |
| 1 引言 | 第15-16页 |
| 2 奶牛乳房炎的分类与诊断 | 第16-18页 |
| 2.1 隐性乳房炎 | 第16-17页 |
| 2.1.1 基于体细胞数的诊断方法 | 第16-17页 |
| 2.1.2 基于酶指标的诊断方法 | 第17页 |
| 2.1.3 基于理化指标的诊断方法 | 第17页 |
| 2.2 临床型乳房炎 | 第17-18页 |
| 2.2.1 最急性乳房炎 | 第18页 |
| 2.2.2 急性乳房炎 | 第18页 |
| 2.2.3 亚急性乳房炎 | 第18页 |
| 2.2.4 慢性乳房炎 | 第18页 |
| 3 奶牛乳房炎病原学 | 第18-21页 |
| 3.1 传染性病原 | 第19-20页 |
| 3.1.1 金黄色葡萄球菌 | 第19页 |
| 3.1.2 无乳链球菌 | 第19页 |
| 3.1.3 支原体 | 第19-20页 |
| 3.2 环境性病原 | 第20-21页 |
| 3.2.1 肠杆菌 | 第20页 |
| 3.2.2 乳房链球菌 | 第20页 |
| 3.2.3 凝固酶阴性葡萄球菌 | 第20-21页 |
| 4 奶牛乳房炎的防治学研究 | 第21-24页 |
| 4.1 奶牛乳房炎的预防 | 第21-22页 |
| 4.1.1 科学饲养管理 | 第21页 |
| 4.1.2 控制环境卫生 | 第21页 |
| 4.1.3 做好挤奶时的卫生 | 第21-22页 |
| 4.2 奶牛乳房炎的治疗 | 第22-24页 |
| 4.2.1 奶牛乳房炎的抗性 | 第22-23页 |
| 4.2.1.1 奶牛乳房炎相关的抗性性状 | 第22页 |
| 4.2.1.2 奶牛乳房炎抗性候选基因 | 第22-23页 |
| 4.2.1.3 奶牛乳房炎抗性相关蛋白质 | 第23页 |
| 4.2.2 抗生素疗法 | 第23页 |
| 4.2.3 非抗生素疗法 | 第23-24页 |
| 4.2.3.1 疫苗 | 第23页 |
| 4.2.3.2 中草药 | 第23-24页 |
| 4.2.3.3 免疫佐剂 | 第24页 |
| 5 奶牛乳房炎疫苗的研究进展 | 第24-28页 |
| 5.1 传统疫苗 | 第24-26页 |
| 5.1.1 灭活疫苗 | 第24-25页 |
| 5.1.1.1 金黄色葡萄球菌疫苗 | 第24-25页 |
| 5.1.1.2 链球菌疫苗 | 第25页 |
| 5.1.1.3 大肠杆菌疫苗 | 第25页 |
| 5.1.1.4 乳房炎多联苗 | 第25页 |
| 5.1.2 减毒活疫苗 | 第25-26页 |
| 5.1.3 亚单位疫苗 | 第26页 |
| 5.2 新型疫苗 | 第26-27页 |
| 5.2.1 重组载体疫苗 | 第26页 |
| 5.2.2 基因缺失疫苗 | 第26页 |
| 5.2.3 合成肽疫苗 | 第26-27页 |
| 5.2.4 DNA疫苗 | 第27页 |
| 5.3 展望 | 第27-28页 |
| 6 肠球菌的研究进展 | 第28-31页 |
| 6.1 肠球菌病原学 | 第28-31页 |
| 6.1.1 生物学特性 | 第28-29页 |
| 6.1.2 肠球菌的致病性 | 第29页 |
| 6.1.3 肠球菌的毒力因子 | 第29-31页 |
| 6.1.3.1 溶血素 | 第29页 |
| 6.1.3.2 明胶酶 | 第29-30页 |
| 6.1.3.3 胶原蛋白黏附素 | 第30页 |
| 6.1.3.4 肠球菌表面蛋白 | 第30-31页 |
| 7 本研究的目的及主要内容 | 第31-33页 |
| 第二章 肠球菌耐药性的检测 | 第33-42页 |
| 1 材料与方法 | 第33-35页 |
| 1.1 材料 | 第33-34页 |
| 1.1.1 菌株来源 | 第33页 |
| 1.1.2 抗菌药物的选择 | 第33-34页 |
| 1.1.3 主要仪器 | 第34页 |
| 1.1.4 细菌用培养基 | 第34页 |
| 1.1.5 主要试剂 | 第34页 |
| 1.2 实验方法 | 第34-35页 |
| 1.2.1 96孔药敏板的配制 | 第34-35页 |
| 1.2.2 试验菌液的制备 | 第35页 |
| 1.2.3 最小抑菌浓度(MIC)的测定 | 第35页 |
| 2 结果 | 第35-40页 |
| 2.1 分离菌株对β-内酰胺类抗生素的药物敏感性 | 第35-36页 |
| 2.2 分离菌株对氨基糖苷类抗生素的药物敏感性 | 第36页 |
| 2.3 病原菌对喹诺酮类抗生素的敏感性 | 第36-37页 |
| 2.4 病原菌对多肽类抗生素的耐药性 | 第37页 |
| 2.5 病原菌对其他类抗生素的耐药性 | 第37-38页 |
| 2.6 10种抗生素对分离病原菌的体外抑菌活性 | 第38-39页 |
| 2.7 101株奶牛乳腺炎病原菌对10种抗生素的耐药谱分析 | 第39-40页 |
| 3 讨论 | 第40-42页 |
| 第三章 肠球菌多克隆抗体的制备 | 第42-47页 |
| 1 材料与方法 | 第42-45页 |
| 1.1 材料 | 第42-43页 |
| 1.1.1 菌株 | 第42页 |
| 1.1.2 实验动物 | 第42页 |
| 1.1.3 主要仪器 | 第42页 |
| 1.1.4 主要试剂 | 第42-43页 |
| 1.1.5 主要溶液的配制 | 第43页 |
| 1.2 方法 | 第43-45页 |
| 1.2.1 肠球菌的抗原制备 | 第43页 |
| 1.2.2 动物免疫 | 第43-44页 |
| 1.2.3 间接ELISA检测血清效价 | 第44-45页 |
| 1.2.3.1 免疫血清的制备 | 第44页 |
| 1.2.3.2 间接ELISA检测多克隆抗体 | 第44-45页 |
| 2 结果 | 第45页 |
| 2.1 间接ELISA测定结果 | 第45页 |
| 3 讨论 | 第45-47页 |
| 第四章 ESP基因的克隆及其真核载体的构建 | 第47-57页 |
| 1 材料与方法 | 第47-53页 |
| 1.1 材料 | 第47-48页 |
| 1.1.1 菌株与质粒 | 第47页 |
| 1.1.2 主要仪器 | 第47页 |
| 1.1.3 主要试剂 | 第47-48页 |
| 1.2 实验方法 | 第48-53页 |
| 1.2.1 主要溶液的配制 | 第48页 |
| 1.2.2 肠球菌基因组DNA的提取 | 第48页 |
| 1.2.3 特异性引物设计 | 第48-49页 |
| 1.2.4 肠球菌esp基因的克隆 | 第49页 |
| 1.2.5 琼脂糖凝胶电泳 | 第49页 |
| 1.2.6 肠球菌esp基因扩增产物的回收 | 第49-50页 |
| 1.2.7 Esp基因的T/A克隆 | 第50-51页 |
| 1.2.7.1 目的片段的连接 | 第50页 |
| 1.2.7.2 转化 | 第50页 |
| 1.2.7.3 阳性克隆的筛选与鉴定 | 第50-51页 |
| 1.2.8 质粒pcDNA3.1 HisB的制备 | 第51页 |
| 1.2.9 肠球菌esp基因及质粒pcDNA HisB的双酶切 | 第51-52页 |
| 1.2.10 重组质粒pcDNA HisB-rib esp的构建 | 第52-53页 |
| 1.2.10.1 目的DNA与质粒的连接 | 第52页 |
| 1.2.10.2 转化 | 第52-53页 |
| 1.2.10.3 阳性克隆的筛选与鉴定 | 第53页 |
| 2 结果 | 第53-56页 |
| 2.1 肠球菌esp基因的克隆与鉴定 | 第53页 |
| 2.2 Esp基因的T/A克隆的PCR及酶切鉴定 | 第53-55页 |
| 2.2.1 质粒PCR的鉴定 | 第53-54页 |
| 2.2.2 质粒的酶切鉴定 | 第54-55页 |
| 2.3 重组质粒pcDNA HisB-rib esp的PCR及酶切鉴定 | 第55-56页 |
| 2.3.1 重组质粒的PCR鉴定 | 第55页 |
| 2.3.2 重组质粒的酶切鉴定 | 第55-56页 |
| 3 讨论 | 第56-57页 |
| 第五章 真核表达质粒PCDNA HISB-RIB ESP在真核细胞中的表达 | 第57-68页 |
| 1 材料与方法 | 第57-64页 |
| 1.1 材料 | 第57-58页 |
| 1.1.1 细胞 | 第57页 |
| 1.1.2 质粒 | 第57页 |
| 1.1.3 主要试剂 | 第57-58页 |
| 1.1.4 主要仪器 | 第58页 |
| 1.1.5 主要溶液 | 第58页 |
| 1.2 方法 | 第58-64页 |
| 1.2.1 MCF-7细胞的培养 | 第58-59页 |
| 1.2.2 重组质粒的提取 | 第59页 |
| 1.2.3 转染MCF-7细胞 | 第59页 |
| 1.2.4 细胞总RNA的提取 | 第59-60页 |
| 1.2.5 逆转录合成cDNA | 第60页 |
| 1.2.6 PCR检测cDNA | 第60-61页 |
| 1.2.7 PCR电泳检测 | 第61页 |
| 1.2.8 Western blot的检测重组质粒esp蛋白的表达 | 第61-64页 |
| 1.2.8.1 细胞总蛋白的提取 | 第61页 |
| 1.2.8.2 SDS-PAGE电泳 | 第61-63页 |
| 1.2.8.3 转膜 | 第63页 |
| 1.2.8.4 封闭与抗体孵育 | 第63页 |
| 1.2.8.5 显色 | 第63页 |
| 1.2.8.6 曝光 | 第63-64页 |
| 2 结果 | 第64-66页 |
| 2.1 重组质粒pcDNA HisB-rib esp在MCF-7细胞中的稳定表达的观察 | 第64-65页 |
| 2.2 重组质粒pcDNA HisB-rib esp转染MCF-7细胞表达的检测 | 第65-66页 |
| 2.2.1 PCR检测细胞总RNA | 第65页 |
| 2.2.2 Western blot检测esp蛋白表达 | 第65-66页 |
| 3 讨论 | 第66-68页 |
| 结论 | 第68-69页 |
| 参考文献 | 第69-82页 |
| 致谢 | 第82-83页 |
| 导师简介 | 第83-84页 |
| 作者简介 | 第84-85页 |
