| 摘要 | 第5-6页 |
| ABSTRACT | 第6-7页 |
| 第1章 绪论 | 第11-33页 |
| 1.1 基因表达调控的不同水平 | 第11页 |
| 1.2 miRNA 定义 | 第11页 |
| 1.3 miRNA生物发生过程与作用机制 | 第11-14页 |
| 1.3.1 miRNA生物发生过程 | 第11-12页 |
| 1.3.2 miRNA作用机制 | 第12-14页 |
| 1.3.3 miRNA广泛的生物学功能 | 第14页 |
| 1.4 miRNA在雌性生殖过程中的作用 | 第14-17页 |
| 1.4.1 Dicer与卵巢 | 第14-15页 |
| 1.4.2 Specific miRNA研究 | 第15-16页 |
| 1.4.3 卵巢中miRNA表达谱研究 | 第16-17页 |
| 1.5 哺乳动物原始卵泡库 | 第17-21页 |
| 1.5.1 小鼠原始卵泡形成过程 | 第18-19页 |
| 1.5.2 人原始卵泡形成过程 | 第19-20页 |
| 1.5.3 原始卵泡库资源的有限性 | 第20-21页 |
| 1.6 原始卵泡形成调控机制 | 第21-30页 |
| 1.6.1 编程性细胞死亡 | 第21-22页 |
| 1.6.2 减数分裂与原始卵泡形成 | 第22-23页 |
| 1.6.3 激素与原始卵泡形成 | 第23-25页 |
| 1.6.4 生长因子、信号转导分子与原始卵泡形成 | 第25-28页 |
| 1.6.5 转录因子和原始卵泡形成 | 第28-30页 |
| 1.7 遗传因素与原发性卵巢功能不全 | 第30-31页 |
| 1.8 研究内容及研究意义 | 第31-33页 |
| 第2章 利用Solexa深度测序技术建立正常人胚胎卵巢miRNA表达谱 | 第33-49页 |
| 2.1 实验材料 | 第33页 |
| 2.1.1 卵巢组织收集,样本准备 | 第33页 |
| 2.1.2 试剂 | 第33页 |
| 2.2 实验方法 | 第33-37页 |
| 2.2.1 总RNA抽提 | 第33-34页 |
| 2.2.2 小RNAs文库建立和Solexa测序 | 第34页 |
| 2.2.3 小RNAs测序数据生物信息学分析 | 第34页 |
| 2.2.4 新miRNAs预测 | 第34-35页 |
| 2.2.5 荧光定量PCR验证miRNA测序数据 | 第35-36页 |
| 2.2.6 miRNAs靶基因预测 | 第36页 |
| 2.2.7 miRNA预测下游靶基因GO(Gene Ontology)分析 | 第36页 |
| 2.2.8 miRNA下游靶基因参与的信号通路分析 | 第36-37页 |
| 2.3 结果 | 第37-42页 |
| 2.3.1 使用Solexa测序技术,构建人胚胎卵巢小RNA文库 | 第37-38页 |
| 2.3.2 小RNA染色体定位和实验验证已知miRNA表达 | 第38-40页 |
| 2.3.3 新miRNAs预测 | 第40页 |
| 2.3.4 已知高丰度miRNAs和新miRNAs靶基因预测 | 第40-42页 |
| 2.4 讨论 | 第42-49页 |
| 2.4.1 人胚胎卵巢miRNA表达谱建立的重要性 | 第42-43页 |
| 2.4.2 高丰度miRNAs生物学功能讨论 | 第43-45页 |
| 2.4.3 新miRNAs生物学功能讨论 | 第45页 |
| 2.4.4 原始卵泡形成过程中,高丰度miRNAs和新miRNAs预测的靶基因参与的信号通路和生物学过程 | 第45-47页 |
| 2.4.5 小结 | 第47-49页 |
| 第3章 miR-376a通过下游靶基因Pcna调控小鼠原始卵泡形成过程 | 第49-83页 |
| 3.1 引言 | 第49页 |
| 3.2 实验材料 | 第49-54页 |
| 3.2.1 实验动物 | 第50页 |
| 3.2.2 细胞系 | 第50页 |
| 3.2.3 实验试剂 | 第50-54页 |
| 3.3 实验方法 | 第54-64页 |
| 3.3.1 胎鼠卵巢组织体外培养 | 第54页 |
| 3.3.2 培养胎鼠卵巢siRNAs和miRNA mimics转染 | 第54页 |
| 3.3.3 卵巢组织石蜡包埋 | 第54-55页 |
| 3.3.4 卵巢组织石蜡包埋切片和贴片 | 第55页 |
| 3.3.5 卵巢组织免疫组化染色 | 第55-56页 |
| 3.3.6 卵巢组织荧光染色 | 第56页 |
| 3.3.7 免疫印迹 | 第56-58页 |
| 3.3.8 双荧光素酶报告系统 | 第58-59页 |
| 3.3.9 BrdU标记细胞增殖实验 | 第59页 |
| 3.3.10 细胞凋亡检测 | 第59-60页 |
| 3.3.11 miRNA原位杂交 | 第60-61页 |
| 3.3.12 mRNA反转录及荧光定量PCR检测 | 第61-62页 |
| 3.3.13 Taqman探针法进行miRNA反转录及荧光定量PCR检测 | 第62-63页 |
| 3.3.14 卵母细胞和卵泡形态学判断标准 | 第63-64页 |
| 3.3.15 实验数据统计分析方法 | 第64页 |
| 3.4 实验结果 | 第64-77页 |
| 3.4.1 miR-376a与Pcna mRNA在胎鼠和新生小鼠卵巢中表达 | 第64-66页 |
| 3.4.2 miR-376a可以直接结合Pcna mRNA3’UTR | 第66-67页 |
| 3.4.3 在培养的小鼠卵巢中,miR-376a可以抑制Pcna蛋白和mRNA表达 | 第67-69页 |
| 3.4.4 miR-376a通过调控Pcna,促进原始卵泡形成 | 第69-72页 |
| 3.4.5 miR-376a转染后,原始卵泡数目的增加,源自存活的卵母细胞数目的增多 | 第72-73页 |
| 3.4.6 miR-376a促进卵母细胞存活是通过抑制其凋亡实现 | 第73-75页 |
| 3.4.7 miR-376a过表达对体细胞增殖的影响 | 第75-77页 |
| 3.5 讨论 | 第77-81页 |
| 3.6 小结 | 第81-83页 |
| 参考文献 | 第83-99页 |
| 附录 中英文对照表 | 第99-101页 |
| 致谢 | 第101-103页 |
| 在读期间发表的学术论文与取得的研究成果 | 第103页 |
