| 摘要 | 第3-4页 |
| Abstract | 第4-5页 |
| 引言 | 第10-12页 |
| 1 文献综述 | 第12-30页 |
| 1.1 布鲁氏菌概述 | 第12-19页 |
| 1.1.1 布鲁氏菌的发现历史 | 第12-13页 |
| 1.1.2 布鲁氏菌的特性及分类 | 第13-14页 |
| 1.1.3 布鲁氏菌基因组研究概况 | 第14-15页 |
| 1.1.4 布鲁氏菌的感染机制 | 第15页 |
| 1.1.5 布鲁氏菌的病原学特性 | 第15-16页 |
| 1.1.6 布鲁氏菌病的传播与流行 | 第16页 |
| 1.1.7 我国布鲁氏菌病疫情及危害 | 第16-18页 |
| 1.1.8 布鲁氏菌病的防治 | 第18-19页 |
| 1.2 布鲁氏菌的研究进展 | 第19-26页 |
| 1.2.1 布鲁氏菌的致病性和调节系统 | 第19页 |
| 1.2.2 布鲁氏菌的免疫原性 | 第19-20页 |
| 1.2.3 布鲁氏菌的主要外膜抗原 | 第20-21页 |
| 1.2.4 布鲁氏菌的毒力相关因子 | 第21-24页 |
| 1.2.5 布鲁氏菌的核糖体蛋白基因（L7/L12） | 第24页 |
| 1.2.6 布鲁氏菌的 2,4-二氧四氢蝶啶合成酶 BLS | 第24-25页 |
| 1.2.7 布鲁氏菌病的诊断方法 | 第25-26页 |
| 1.3 布鲁氏菌病疫苗的研究进展及研究意义 | 第26-29页 |
| 1.3.1 畜牧业常用的传统疫苗 | 第27-28页 |
| 1.3.2 基因工程疫苗的研制与应用 | 第28页 |
| 1.3.3 布鲁氏菌疫苗的研究意义 | 第28-29页 |
| 1.4 本文的研究内容及研究意义 | 第29-30页 |
| 2 L7/L12 蛋白的制备与鉴定 | 第30-46页 |
| 2.1 实验材料和实验器材 | 第30-34页 |
| 2.1.1 试验中用到的基因工程酶类、试剂盒和菌株 | 第30-31页 |
| 2.1.2 试验中用到主要实验试剂、药品和器材 | 第31-32页 |
| 2.1.3 本章实验所用试剂及配方 | 第32-34页 |
| 2.2 试验方法 | 第34-39页 |
| 2.2.1 引物设计 | 第34-35页 |
| 2.2.2 目的基因 L7/L12 的 PCR 扩增纯化与双酶切 | 第35页 |
| 2.2.3 pET-28a 质粒载体的提取纯化与双酶切 | 第35-36页 |
| 2.2.4 目的基因 L7/L12 克隆至 pET-28a 质粒载体 | 第36页 |
| 2.2.5 大肠杆菌克隆菌株 DH5α和表达菌株 TL129 感受态细胞的制备 | 第36-37页 |
| 2.2.6 重组质粒 pET-28a-L7/L12 转化 DH5α | 第37页 |
| 2.2.7 大肠杆菌 DH5α阳性克隆子的筛选与测序鉴定 | 第37-38页 |
| 2.2.8 重组质粒 pET-28a-L7/L12 的提取与双酶切验证 | 第38页 |
| 2.2.9 重组质粒 pET-28a-L7/L12 导入 TL129 菌株及阳性克隆子筛选 | 第38页 |
| 2.2.10 L7/L12 蛋白的诱导表达与鉴定 | 第38-39页 |
| 2.2.11 L7/L12 蛋白的纯化 | 第39页 |
| 2.3 试验结果 | 第39-45页 |
| 2.3.1 引物设计结果 | 第39-40页 |
| 2.3.2 目的基因 L7/L12 的 PCR 扩增结果 | 第40页 |
| 2.3.3 pET-28a 质粒的提取和双酶切结果 | 第40-41页 |
| 2.3.4 重组质粒 pET-28a-L7/L12 的 DH5α阳性克隆子的菌落 PCR 筛选 | 第41-42页 |
| 2.3.5 重组质粒 pET-28a-L7/L12 的双酶切检测结果 | 第42页 |
| 2.3.6 重组质粒 pET-28a-L7/L12 碱基序列测定结果 | 第42页 |
| 2.3.7 重组质粒 pET-28a-L7/L12 的 TL129 阳性克隆子的菌落 PCR 筛选 | 第42-43页 |
| 2.3.8 L7-L12 蛋白的诱导表达与鉴定结果 | 第43-44页 |
| 2.3.9 L7/L12 蛋白的纯化结果 | 第44-45页 |
| 2.4 结果和讨论 | 第45-46页 |
| 3 L7/L12-BLS 融合蛋白的制备与鉴定 | 第46-60页 |
| 3.1 实验材料和实验器材 | 第46页 |
| 3.2 试验方法 | 第46-51页 |
| 3.2.1 引物设计 | 第46页 |
| 3.2.2 目的基因 L7/L12 和 bls 的融合片段的 PCR 扩增与纯化 | 第46-47页 |
| 3.2.3 目的基因 L7/L12 和 bls 的融合 PCR | 第47页 |
| 3.2.4 融合片段 L7/L2-bls 的纯化与双酶切 | 第47-48页 |
| 3.2.5 pET-28a 质粒载体的提取纯化与双酶切 | 第48页 |
| 3.2.6 融合片段 L7/L12-bls 克隆至 pET-28a 质粒载体 | 第48页 |
| 3.2.7 重组质粒 pET-28a-L7/L12-bls 转化 DH5α | 第48页 |
| 3.2.8 大肠杆菌 DH5α-pET-28a-L7/L12-bls 阳性克隆子筛选保存与测序 | 第48-49页 |
| 3.2.9 重组质粒 pET-28a-L7/L12-bls 的提取与双酶切验证 | 第49页 |
| 3.2.10 重组质粒pET-28a-L7/L12-bls转化TL129表达菌株及阳性克隆子的筛选 | 第49页 |
| 3.2.11 L7/L12-BLS 蛋白的诱导表达与鉴定 | 第49-50页 |
| 3.2.12 L7/L12-BLS 蛋白的纯化 | 第50-51页 |
| 3.3 试验结果 | 第51-58页 |
| 3.3.1 引物设计结果 | 第51页 |
| 3.3.2 L7/L12 和 bls 用融合引物的 PCR 扩增结果 | 第51-52页 |
| 3.3.3 L7/L12 和 bls 的融合 PCR 及纯化结果 | 第52-53页 |
| 3.3.4 pET-28a 质粒的提取和双酶切结果 | 第53-54页 |
| 3.3.5 pET-28a-L7/L12-bls 转化 DH5α阳性克隆子的筛选结果 | 第54-55页 |
| 3.3.6 重组质粒 pET-28a-L7/L12-bls 的提取及双酶切检测结果 | 第55页 |
| 3.3.7 重组质粒 pET-28a-L7/L12-bls 碱基序列测定结果 | 第55-56页 |
| 3.3.8 pET-28a-L7/L12-bls 转化 TL129 阳性克隆子筛选结果 | 第56页 |
| 3.3.9 L7/L12-BLS 蛋白的诱导表达及鉴定结果 | 第56-58页 |
| 3.3.10 L7/L12-BLS 蛋白的纯化结果 | 第58页 |
| 3.4 结果和讨论 | 第58-60页 |
| 4 L7/L12 蛋白和 L7/L12-BLS 融合蛋白的免疫原性研究 | 第60-69页 |
| 4.1 实验材料和实验器材 | 第60-61页 |
| 4.1.1 主要试剂配方和实验器材 | 第60页 |
| 4.1.2 实验动物及其处理 | 第60-61页 |
| 4.2 试验方法 | 第61-65页 |
| 4.2.1 L7/L12 蛋白和 L7/L12-BLS 融合蛋白免疫长耳家兔 | 第61-62页 |
| 4.2.2 L7/L12 免疫血清和 L7/L12-BLS 免疫血清以及正常血清的提取 | 第62页 |
| 4.2.3 免疫血清的 Western blot 检测 | 第62-63页 |
| 4.2.4 免疫血清的 ELISA 检测 | 第63-65页 |
| 4.3 试验结果 | 第65-68页 |
| 4.3.1 免疫血清 Western blot 检测结果 | 第65页 |
| 4.3.2 免疫血清 ELISA 检测结果 | 第65-68页 |
| 4.4 结果及讨论 | 第68-69页 |
| 参考文献 | 第69-79页 |
| 在校研究成果 | 第79-80页 |
| 致谢 | 第80页 |
