| 摘要 | 第4-8页 |
| Abstract | 第8-13页 |
| 第一章 前言 | 第18-37页 |
| 1.1 酿酒酵母糖发酵研究的发展史 | 第18-19页 |
| 1.2 绿色新能源-燃料乙醇 | 第19-22页 |
| 1.3 影响酿酒酵母乙醇发酵的因素 | 第22-23页 |
| 1.4 酿酒酵母耐高渗机制的研究 | 第23-29页 |
| 1.4.1 HOG途径上游信号转导机制 | 第24-28页 |
| 1.4.2 HOG途径下游适应性应答 | 第28-29页 |
| 1.5 基因表达量测定方法的发展 | 第29-31页 |
| 1.5.1 Northern 印迹法 | 第29页 |
| 1.5.2 RT-PCR | 第29-30页 |
| 1.5.3 微列阵芯片技术 | 第30-31页 |
| 1.5.4 RNA-Seq | 第31页 |
| 1.6 酵母基因功能研究方法 | 第31-35页 |
| 1.7 立项依据和研究内容 | 第35-36页 |
| 1.8 技术路线 | 第36-37页 |
| 第二章 材料与方法 | 第37-58页 |
| 2.1 材料 | 第37-40页 |
| 2.1.1 菌株 | 第37页 |
| 2.1.2 培养基 | 第37-38页 |
| 2.1.3 菌种培养与保存 | 第38页 |
| 2.1.4 酶与试剂 | 第38-39页 |
| 2.1.5 主要仪器设备 | 第39-40页 |
| 2.2 实验方法 | 第40-58页 |
| 2.2.1 紫外诱变及筛选 | 第40页 |
| 2.2.2 菌株在YPD培养基中生长曲线的测定 | 第40-41页 |
| 2.2.3 菌株在YP40培养基中生长曲线和发酵曲线的测定 | 第41页 |
| 2.2.4 菌株在不同浓度葡萄糖固体培养基上的生长情况 | 第41页 |
| 2.2.5 菌株乙醇耐受性的检测 | 第41页 |
| 2.2.6 RNA的提取及质量检测 | 第41-42页 |
| 2.2.7 转录组测序数据分析 | 第42-44页 |
| 2.2.8 荧光定量PCR检测 | 第44-46页 |
| 2.2.9 菌株相对呼吸强度的检测 | 第46-47页 |
| 2.2.10 高糖胁迫下细胞膜透性的检测 | 第47页 |
| 2.2.11 利用Cre/LoxP系统对STE12和TUP1基因进行敲除 | 第47-54页 |
| 2.2.12 敲除株性状变化检测 | 第54页 |
| 2.2.13 STE12和TUP1基因的回补表达 | 第54-57页 |
| 2.2.14 回补表达菌株性状的检测 | 第57-58页 |
| 第三章 结果与分析 | 第58-96页 |
| 3.1 紫外诱变菌株的筛选 | 第58页 |
| 3.2 菌株UV02_HG和MF02在YPD培养基中的生长曲线 | 第58-59页 |
| 3.3 菌株UV02_HG和MF02在YP40培养基中的生长和发酵曲线 | 第59-60页 |
| 3.4 菌株MF02和UV02_HG在不同浓度葡萄糖固体培养基上的生长情况 | 第60页 |
| 3.5 菌株MF02和UV02_HG乙醇耐受性的检测 | 第60-61页 |
| 3.6 RNA提取及质量检测 | 第61-62页 |
| 3.7 转录组测序及数据分析 | 第62-76页 |
| 3.7.1 测序数据质量分析 | 第62-63页 |
| 3.7.2 与参考基因组比对情况 | 第63-65页 |
| 3.7.3 表达差异分析 | 第65页 |
| 3.7.4 KEGG分析 | 第65-71页 |
| 3.7.5 GO分析 | 第71-72页 |
| 3.7.6 SNP分析 | 第72-73页 |
| 3.7.7 PheNetic网络分析 | 第73-76页 |
| 3.8 荧光定量PCR验证 | 第76页 |
| 3.9 高糖压力下突变株UV02_HG和野生菌株MF02相对呼吸强度的检测 | 第76-78页 |
| 3.10 高糖压力下突变菌株UV02_HG和野生菌株MF02细胞膜透性的变化 | 第78页 |
| 3.11 STE12和TUP1基因的敲除 | 第78-84页 |
| 3.11.1 两个基因的扩增 | 第78-79页 |
| 3.11.2 敲除系统的构建 | 第79页 |
| 3.11.3 酿酒酵母UV02_HG菌株单倍体细胞的制备 | 第79-80页 |
| 3.11.4 敲除株的筛选及验证 | 第80-83页 |
| 3.11.5 单倍体敲除株的复倍 | 第83页 |
| 3.11.6 二倍体敲除株的消抗 | 第83-84页 |
| 3.12 基因缺失菌株的性状检测 | 第84-90页 |
| 3.12.1 基因缺失菌株在YPD培养基中的生长曲线 | 第84-85页 |
| 3.12.2 基因缺失菌株在YP40中的生长和发酵曲线 | 第85-86页 |
| 3.12.3 基因缺失菌株在不同浓度葡萄糖固体培养基上的生长情况 | 第86-87页 |
| 3.12.4 基因缺失菌株乙醇耐受性的检测 | 第87页 |
| 3.12.5 基因缺失菌株相对呼吸强度的检测 | 第87-89页 |
| 3.12.6 基因缺失菌株在高糖压力下细胞膜透性的检测 | 第89-90页 |
| 3.13 STE12和TUP1基因的回补表达 | 第90-92页 |
| 3.13.1 STE12和TUP1的扩增 | 第90页 |
| 3.13.2 表达组件的构建 | 第90-91页 |
| 3.13.3 同源置换片段的转化及筛选 | 第91-92页 |
| 3.14 回补菌株性状变化的检测 | 第92-96页 |
| 3.14.1 基因缺失和基因回补菌株在YPD中的生长曲线 | 第92页 |
| 3.14.2 基因缺失和基因回补菌株在YP40中的生长和发酵曲线 | 第92-93页 |
| 3.14.3 基因缺失和基因回补菌株相对呼吸强度的检测 | 第93-94页 |
| 3.14.4 基因缺失和基因回补菌株细胞膜透性的检测 | 第94-96页 |
| 第四章 讨论 | 第96-106页 |
| 4.1 野生酿酒酵母菌株MF02和突变菌株UV02_HG性状及表达差异分析 | 第96-101页 |
| 4.1.1 核糖体 | 第96页 |
| 4.1.2 线粒体和氧化磷酸化 | 第96页 |
| 4.1.3 糖代谢途径 | 第96-99页 |
| 4.1.4 MAPK途径 | 第99页 |
| 4.1.5 蛋白加工及运输 | 第99-100页 |
| 4.1.6 突变菌株性状诱发因子分析 | 第100-101页 |
| 4.2 STE12和TUP1基因对酿酒酵母菌株耐高糖性状的影响及功能分析 | 第101-106页 |
| 4.2.1 STE12基因 | 第101-102页 |
| 4.2.2 TUP1基因 | 第102-106页 |
| 第五章 总结 | 第106-108页 |
| 参考文献 | 第108-127页 |
| 附录 | 第127-149页 |
| 附录Ⅰ 部分试剂的配置 | 第127-128页 |
| 附录Ⅱ 部分基因测序序列 | 第128-134页 |
| 附录Ⅲ 部分实验结果 | 第134-149页 |
| 致谢 | 第149-150页 |
| 攻读学位期间所发表的学术论文和研究成果 | 第150-151页 |
