| 摘要 | 第5-7页 |
| Abstract | 第7-9页 |
| 第一章 文献综述 | 第14-27页 |
| 1 研究背景 | 第14-15页 |
| 2 太平洋牡蛎简介 | 第15-16页 |
| 3 诺如病毒 | 第16-22页 |
| 3.1 NoV 基因组 | 第16-17页 |
| 3.2 NoV 蛋白 | 第17-20页 |
| 3.2.1 结构蛋白 | 第17-19页 |
| 3.2.2 非结构蛋白 | 第19-20页 |
| 3.3 NoV 流行状况 | 第20-22页 |
| 4 诺如病毒受体 | 第22-27页 |
| 4.1 人类诺如病毒受体 | 第22-25页 |
| 4.2 牡蛎中诺如病毒受体 | 第25-27页 |
| 第二章 太平洋牡蛎类 FUT2 基因的克隆 | 第27-38页 |
| 1 引言 | 第27页 |
| 2 材料与试剂 | 第27-28页 |
| 2.1 材料 | 第27-28页 |
| 2.2 试剂 | 第28页 |
| 3 方法 | 第28-30页 |
| 3.1 总 RNA 的提取和 SMART cDNA 的合成 | 第28页 |
| 3.2 中间片段的克隆 | 第28-29页 |
| 3.3 全长 cDNA 的克隆（RACE） | 第29页 |
| 3.4 序列分析 | 第29-30页 |
| 4 结果与分析 | 第30-35页 |
| 4.1 类 FUT2 基因的克隆 | 第30页 |
| 4.2 类 FUT2 基因的序列分析 | 第30-35页 |
| 5 讨论 | 第35-38页 |
| 第三章 太平洋牡蛎类 FUT2 基因原核表达与鉴定 | 第38-52页 |
| 1 引言 | 第38页 |
| 2 材料与仪器 | 第38-42页 |
| 2.1 主要试剂及相关溶液配制 | 第38-42页 |
| 2.1.1 基因扩增及检测所需试剂 | 第38-39页 |
| 2.1.2 相关质粒、菌株及抗体 | 第39-40页 |
| 2.1.3 大肠杆菌培养基及试剂 | 第40页 |
| 2.1.4 质粒抽提试剂配方 | 第40页 |
| 2.1.5 琼脂糖凝胶电泳相关溶液 | 第40-41页 |
| 2.1.6 SDS-PAGE 相关溶液 | 第41页 |
| 2.1.7 western blotting 相关试剂 | 第41-42页 |
| 2.2 实验模板 | 第42页 |
| 2.3 主要仪器 | 第42页 |
| 3 实验方法 | 第42-46页 |
| 3.1 稀有密码子分析与优化 | 第42-43页 |
| 3.2 目的基因扩增引物设计与合成 | 第43页 |
| 3.3 目的基因扩增 | 第43页 |
| 3.4 重组表达载体 pRSET-mof 构建 | 第43-45页 |
| 3.5 表达菌株的诱导和表达 | 第45页 |
| 3.6 SDS-PAGE 分析 | 第45-46页 |
| 3.7 western blotting 鉴定 | 第46页 |
| 4 结果与分析 | 第46-49页 |
| 4.1 稀有密码子分析 | 第46页 |
| 4.2 表达载体构建结果 | 第46-49页 |
| 5 讨论 | 第49-52页 |
| 第四章 太平洋牡蛎类 FUT2 基因荧光定量检测方法的建立与时空表达分析 | 第52-71页 |
| 1 引言 | 第52-53页 |
| 2 材料与试剂 | 第53-55页 |
| 2.1 材料 | 第53页 |
| 2.2 试剂 | 第53-54页 |
| 2.3 ELISA 实验试剂配制 | 第54页 |
| 2.4 试验仪器 | 第54-55页 |
| 3 实验方法 | 第55-60页 |
| 3.1 太平洋牡蛎类 FUT2 基因荧光定量 RT-PCR 检测方法的建立与时空表达分析 | 第55-59页 |
| 3.1.1 引物设计 | 第55页 |
| 3.1.2 样品 RNA 的提取步骤 | 第55-56页 |
| 3.1.3 cDNA 合成 | 第56-57页 |
| 3.1.4 引物的特异性检测 | 第57页 |
| 3.1.5 实时荧光定量 RT-PCR 检测方法的建立及反应条件优化 | 第57-58页 |
| 3.1.6 组织表达分析 | 第58页 |
| 3.1.7 实时荧光定量 RT-PCR 检测太平洋牡蛎类 FUT2 基因的时空表达规律 | 第58-59页 |
| 3.2 太平洋牡蛎类 A 型 HBGA 含量变化规律 | 第59-60页 |
| 3.2.1 样品前处理 | 第59页 |
| 3.2.2 ELISA 检测方法 | 第59-60页 |
| 3.3 对太平洋牡蛎中诺如病毒的检测 | 第60页 |
| 3.4 牡蛎养殖区环境初步评估 | 第60页 |
| 3.4.1 对大肠菌群和菌落总数的检测 | 第60页 |
| 3.4.2 对水质分析 | 第60页 |
| 4 结果 | 第60-67页 |
| 4.1 RNA 质量检测 | 第60-61页 |
| 4.1.1 紫外吸收法测定 | 第60-61页 |
| 4.1.2 RNA 琼脂糖凝胶电泳分析 | 第61页 |
| 4.2 引物的特异性分析 | 第61页 |
| 4.3 太平洋牡蛎类 FUT2 基因实时荧光定量 RT-PCR 方法建立 | 第61-63页 |
| 4.4 太平洋牡蛎类 FUT2 基因实时荧光定量 RT-PCR 方法稳定性分析 | 第63页 |
| 4.5 组织表达分析 | 第63-64页 |
| 4.6 牡蛎中类 FUT2 基因表达变化规律研究 | 第64-65页 |
| 4.7 太平洋牡蛎类 A 型 HBGA 含量变化规律的 ELISA 检测结果 | 第65-66页 |
| 4.8 对太平洋牡蛎中诺如病毒的检测结果 | 第66页 |
| 4.9 牡蛎养殖区环境初评结果 | 第66-67页 |
| 5 讨论 | 第67-71页 |
| 结论 | 第71-72页 |
| 参考文献 | 第72-78页 |
| 致谢 | 第78-79页 |
| 个人简历 | 第79-80页 |
| 发表的学术论文 | 第80-81页 |
