| 中文摘要 | 第3-5页 |
| ABSTRACT | 第5-6页 |
| 符号说明 | 第9-10页 |
| 第一章 文献综述 | 第10-23页 |
| 1 食欲肽及其受体 | 第10-14页 |
| 1.1 食欲肽的结构 | 第10-12页 |
| 1.2 食欲肽受体的结构 | 第12-13页 |
| 1.3 食欲肽及其受体的组织分布 | 第13-14页 |
| 2 OX_2R的研究进展 | 第14-16页 |
| 2.1 调节摄食与能量平衡 | 第14-15页 |
| 2.2 对睡眠和醒觉的调节 | 第15页 |
| 2.3 对生殖系统的调节 | 第15页 |
| 2.4 对其他系统的调节 | 第15-16页 |
| 3 OX_2R参与的信号调节过程 | 第16-18页 |
| 3.1 OX_2R与其他调节肽的相互作用 | 第16页 |
| 3.2 OX_2R的拮抗剂 | 第16-17页 |
| 3.3 OX_2R参与的信号转到机制 | 第17-18页 |
| 4 细胞内信号因子的主要检测方法 | 第18-21页 |
| 4.1 基于第二信使的检测方法 | 第18-20页 |
| 4.1.1 钙离子的测定 | 第19页 |
| 4.1.2 环磷酸腺苷(cAMP)和三磷酸肌醇(IP3)的测定 | 第19-20页 |
| 4.2 基于报告基因的检测方法 | 第20-21页 |
| 4.2.1 CRE响应元件 | 第21页 |
| 4.2.2 TRE和SRE响应元件 | 第21页 |
| 5 本研究的目的及意义 | 第21-23页 |
| 第二章 猪食欲肽受体2基因真核表达载体的构建与表达 | 第23-33页 |
| 1 材料与方法 | 第23-25页 |
| 1.1 材料 | 第23-24页 |
| 1.1.1 仪器设备 | 第23-24页 |
| 1.1.2 试剂 | 第24页 |
| 1.2 方法 | 第24-25页 |
| 1.2.1 引物设计与合成 | 第24页 |
| 1.2.2 扩增/pOX_2R的目的基因 | 第24-25页 |
| 1.2.3 pcDNA3.1(+)-myc/pOX_2R重组质粒的构建及鉴定 | 第25页 |
| 1.2.4 pcDNA3.1(+)-myc/pOX_2R质粒转染HEK293T细胞 | 第25页 |
| 1.2.5 Western blot检测目的基因的表达 | 第25页 |
| 2 结果 | 第25-29页 |
| 2.1 RT-PCR扩增目的片段结果 | 第25-26页 |
| 2.2 重组质粒的双酶切鉴定及测序鉴定 | 第26-28页 |
| 2.3 加myc蛋白质标签的pOX_2R重组质粒测序结果 | 第28页 |
| 2.4 质粒转染HEK293T细胞Western blot检测结果 | 第28-29页 |
| 3 讨论 | 第29-32页 |
| 3.1 pOX_2R基因的分子克隆PCR技术 | 第29页 |
| 3.2 真核表达载体的选择 | 第29-30页 |
| 3.3 质粒转染HEK293T细胞 | 第30-31页 |
| 3.4 Western blot | 第31页 |
| 3.5 OXR在哺乳动物细胞中表达 | 第31-32页 |
| 4 小结 | 第32-33页 |
| 第三章 OX_2R激动剂或拮抗剂对细胞内cAMP信号通路的影响 | 第33-45页 |
| 1 试验材料 | 第33-34页 |
| 1.1 主要仪器设备 | 第33页 |
| 1.2 主要试剂 | 第33-34页 |
| 1.3 主要溶液的配制 | 第34页 |
| 2 试验方法 | 第34-38页 |
| 2.0 质粒的共转染 | 第34-35页 |
| 2.1 配体与受体的作用 | 第35-37页 |
| 2.1.1 阴性细胞株的建立 | 第35页 |
| 2.1.2 食欲肽A以及食欲肽A和TCS的共同作用共表达OX_2R和荧光素酶的细胞株 | 第35-36页 |
| 2.1.3 食欲肽B以及食欲肽B和TCS的共同作用共表达OX_2R和荧光素酶的的细胞株 | 第36-37页 |
| 2.2 荧光素酶的检测 | 第37页 |
| 2.3 数据分析 | 第37-38页 |
| 3 结果与分析 | 第38-41页 |
| 3.1 阴性细胞株荧光素酶的检测 | 第38-39页 |
| 3.2 食欲肽A和TCS共同作用检测细胞后荧光素酶的检测 | 第39-40页 |
| 3.3 食欲肽B和TCS共同作用检测细胞后荧光素酶的检测 | 第40-41页 |
| 4 讨论 | 第41-44页 |
| 4.1 报告基因质粒的选择 | 第41-42页 |
| 4.2 受体质粒与报告基因质粒的比例 | 第42页 |
| 4.3 配体与受体的作用 | 第42-44页 |
| 5 小结 | 第44-45页 |
| 全文结论 | 第45-46页 |
| 参考文献 | 第46-53页 |
| 在读期间发表的文章 | 第53-54页 |
| 致谢 | 第54-55页 |
