| 中文摘要 | 第3-5页 |
| ABSTRACT | 第5-6页 |
| 符号说明 | 第9-11页 |
| 第一章 文献综述 | 第11-23页 |
| 1 G蛋白偶联受体 | 第11-15页 |
| 1.1 G蛋白偶联受体的结构 | 第11-12页 |
| 1.2 G蛋白偶联受体的信号传导系统 | 第12-14页 |
| 1.2.1 细胞外信号 | 第12页 |
| 1.2.2 G蛋白 | 第12-13页 |
| 1.2.3 效应器 | 第13-14页 |
| 1.3 G蛋白偶联受体与药物的研发 | 第14-15页 |
| 2 生长激素促分泌素及其受体 | 第15-19页 |
| 2.1 生长激素促分泌素及其受体的研究进展 | 第15-16页 |
| 2.2 生长激素促分泌素及其受体的结构与功能 | 第16页 |
| 2.3 生长激素促分泌素的信号调节过程 | 第16-19页 |
| 2.3.1 激动剂 | 第17-18页 |
| 2.3.2 反向激动剂 | 第18-19页 |
| 3 定点突变突变技术 | 第19-21页 |
| 4 本研究的目的意义 | 第21-23页 |
| 第二章 猪生长激素促分泌素受体基因及其突变体的分子克隆和真核表达 | 第23-43页 |
| 1 材料与方法 | 第23-31页 |
| 1.1 材料 | 第23-25页 |
| 1.1.1 试剂 | 第23-24页 |
| 1.1.2 细胞及培养基 | 第24页 |
| 1.1.3 仪器设备 | 第24-25页 |
| 1.2 方法 | 第25-31页 |
| 1.2.1 引物设计与合成 | 第25-26页 |
| 1.2.2 pGHSR目的基因扩增 | 第26-27页 |
| 1.2.3 pcDNA3.1(+)-myc/pGHSR重组质粒的构建及鉴定 | 第27页 |
| 1.2.4 单点突变 | 第27-28页 |
| 1.2.5 突变质粒的构建及鉴定 | 第28页 |
| 1.2.6 大提质粒 | 第28-29页 |
| 1.2.7 质粒瞬时转染HEK293T细胞 | 第29页 |
| 1.2.8 Western blotting检测蛋白的表达 | 第29-31页 |
| 1.2.9 数据分析 | 第31页 |
| 2 结果 | 第31-36页 |
| 2.1 SOE-PCR扩增目的片段结果 | 第31页 |
| 2.2 重组质粒的双酶切鉴定及测序鉴定 | 第31-32页 |
| 2.3 加myc蛋白质标签的pGHSR重组质粒测序结果 | 第32-33页 |
| 2.4 点突变结果 | 第33-35页 |
| 2.5 Western blotting检测蛋白的表达结果 | 第35-36页 |
| 3 讨论 | 第36-41页 |
| 3.1 猪GHSR基因的分子克隆 | 第36-37页 |
| 3.2 真核表达载体的选择 | 第37-38页 |
| 3.3 猪GHSR基因突变位点的选择 | 第38-39页 |
| 3.4 PCR介导的定点突变 | 第39页 |
| 3.5 质粒转染HEK293 T细胞 | 第39-40页 |
| 3.6 Western blotting检测蛋白表达水平 | 第40-41页 |
| 3.6.1 Western blotting内参的使用 | 第41页 |
| 4 小结 | 第41-43页 |
| 第三章 配体诱导野生型猪生长素促分泌素受体及其突变体细胞内CA~(2+)水平的改变 | 第43-54页 |
| 1 材料与方法 | 第43-46页 |
| 1.1 材料 | 第43-44页 |
| 1.1.1 试剂 | 第43页 |
| 1.1.2 细胞及培养基 | 第43-44页 |
| 1.1.3 仪器设备 | 第44页 |
| 1.2 方法 | 第44-46页 |
| 1.2.1 pGHSR WT及突变体的基础活性和配体诱导活性的测定 | 第44-45页 |
| 1.2.2 配体诱导pGHSRs Ca~(2+)水平的变化 | 第45-46页 |
| 1.2.3 蛋白提取和发光值的测定 | 第46页 |
| 1.2.4 数据分析 | 第46页 |
| 2 结果 | 第46-49页 |
| 2.1 pGHSR WT及突变体的基础活性和配体诱导活性的改变 | 第46-47页 |
| 2.2 Hexarelin诱导pGHSR WT及突变体活性的改变 | 第47-48页 |
| 2.3 SP-analog诱导pGHSR WT及突变体活性的改变 | 第48-49页 |
| 3 讨论 | 第49-53页 |
| 3.1 荧光素酶报告基因法检测细胞内Ca~(2+)水平 | 第49-50页 |
| 3.2 GHSR基础活性 | 第50页 |
| 3.3 配体诱导pGH SRs细胞内Ca~(2+)水平的变化 | 第50-53页 |
| 3.3.1 激动剂诱导细胞内Ca~(2+)水平的变化 | 第51-52页 |
| 3.3.2 反向激动剂诱导细胞内Ca~(2+)水平的变化 | 第52-53页 |
| 4 小结 | 第53-54页 |
| 全文结论 | 第54-55页 |
| 致谢 | 第55-56页 |
| 参考文献 | 第56-62页 |
| 在读期间发表的文章 | 第62-63页 |
