摘要 | 第6-8页 |
Abstract | 第8-9页 |
中英文对照词 | 第10-11页 |
1 文献综述 | 第11-20页 |
1.1 G蛋白信号转导调节系统 | 第11页 |
1.2 植物G蛋白信号转导系统 | 第11-12页 |
1.3 G蛋白信号转导系统在植物生长发育过程中的作用 | 第12-15页 |
1.3.1 G蛋白信号转导系统参与糖信号 | 第12-14页 |
1.3.2 G蛋白信号转导系统参与ABA信号 | 第14页 |
1.3.3 糖信号与ABA信号之间的关联 | 第14-15页 |
1.4 RGS蛋白的定位 | 第15-16页 |
1.5 油菜转基因研究现状 | 第16-19页 |
1.5.1 油菜转基因的受体系统 | 第17页 |
1.5.2 油菜的转化方法 | 第17-19页 |
1.5.2.1 农杆菌介导的转化法 | 第17-18页 |
1.5.2.2 外源基因直接导入法 | 第18页 |
1.5.2.3 花粉介导法 | 第18-19页 |
1.6 本研究的目的和意义 | 第19-20页 |
2 材料与方法 | 第20-29页 |
2.1 实验材料、试剂和仪器 | 第20页 |
2.2 实验方法 | 第20-29页 |
2.2.1 BnRGS1和BnGA1的克隆 | 第20-21页 |
2.2.2 重组CaMV35S::BnRGS1和CaMV35S::BnGA1过表达载体以及干扰载体的构建 | 第21-24页 |
2.2.2.1 过表达载体的构建 | 第21-22页 |
2.2.2.2 干扰载体的构建 | 第22-23页 |
2.2.2.3 过表达载体和干扰载体转入农杆菌 | 第23-24页 |
2.2.3 甘蓝型油菜转基因组织培养 | 第24-25页 |
2.2.3.1 主要试剂的配制 | 第24页 |
2.2.3.2 培养基的配方 | 第24页 |
2.2.3.3 转基因愈伤和再生植株的获得 | 第24-25页 |
2.2.4 BnRGS1在愈伤组织中的亚细胞定位 | 第25页 |
2.2.5 干扰和过表达阳性愈伤基因表达分析 | 第25-27页 |
2.2.6 放射免疫法(RIA)测定ABA含量 | 第27页 |
2.2.7 拟南芥的遗传转化以及转化子的筛选 | 第27-28页 |
2.2.7.1 CaMV35S::BnRGS1重组表达pGWB41载体扩大培养 | 第27-28页 |
2.2.7.2 转化拟南芥的准备 | 第28页 |
2.2.7.3 转化过程 | 第28页 |
2.2.7.4 拟南芥转化子的筛选与检测 | 第28页 |
2.2.8 甘蓝型油菜下胚轴遗传再生体系的优化 | 第28-29页 |
2.2.8.1 种子消毒 | 第28页 |
2.2.8.2 播种 | 第28页 |
2.2.8.3 外植体 | 第28页 |
2.2.8.4 预培养 | 第28页 |
2.2.8.5 侵染 | 第28-29页 |
3 结果与分析 | 第29-46页 |
3.1 BnRGS1和BnGA1的克隆 | 第29页 |
3.2 重组CaMV35S::BnRGS1和CaMV35S::BnGA1过表达载体以及干扰载体的构建 | 第29-31页 |
3.3 转基因阳性愈伤对ABA和葡萄糖的响应 | 第31-37页 |
3.3.1 BnRGS1在愈伤组织中的亚细胞定位 | 第31-32页 |
3.3.2 重组CaMV35S::BnRGS1和CaMV35S::BnGA1干扰和过表达阳性愈伤基因表达分析 | 第32-37页 |
3.3.2.1 BnRGSo和BnGAi对外源ABA处理的响应 | 第32-34页 |
3.3.2.2 BnRGSo/i和BnGAi对葡萄糖的响应 | 第34-37页 |
3.4 农杆菌介导的油菜转基因组织培养 | 第37-44页 |
3.4.1 甘蓝型油菜下胚轴遗传再生体系的优化 | 第37-42页 |
3.4.1.1 种子消毒 | 第37-38页 |
3.4.1.2 播种 | 第38页 |
3.4.1.3 外植体 | 第38-39页 |
3.4.1.4 预培养 | 第39-40页 |
3.4.1.5 侵染 | 第40-41页 |
3.4.1.6 分化和继代 | 第41-42页 |
3.4.1.7 成苗 | 第42页 |
3.4.2 甘蓝型油菜转基因植株的获得及鉴定 | 第42-44页 |
3.5 拟南芥的遗传转化以及转化子的筛选 | 第44-46页 |
3.5.1 卡那霉素筛选浓度的确定 | 第44-45页 |
3.5.2 拟南芥抗性苗的筛选 | 第45-46页 |
4 小结与讨论 | 第46-51页 |
4.1 关于油菜的遗传转化 | 第46-47页 |
4.2 关于甘蓝型油菜BnRGS1过表达载体利用蘸花法回补拟南芥突变体rgs | 第47页 |
4.3 关于重组CaMV35S::BnRGS1和CaMV35S::BnGA1干扰和过表达阳性愈伤基因表达分析 | 第47-49页 |
4.4 总结 | 第49页 |
4.5 展望 | 第49-51页 |
参考文献 | 第51-57页 |
攻读硕士学位期间发表论文 | 第57-58页 |
致谢 | 第58-59页 |