| 摘要 | 第6-8页 |
| Abstract | 第8-9页 |
| 前言 | 第12-18页 |
| 1 概述 | 第12-13页 |
| 1.1 新孢子虫 | 第12页 |
| 1.2 新孢子虫的生活史 | 第12-13页 |
| 1.3 新孢子虫病 | 第13页 |
| 2 免疫学研究 | 第13-14页 |
| 3 新孢子虫病的防治 | 第14页 |
| 4 新孢子虫抗原 | 第14-15页 |
| 5 腺病毒载体 | 第15-16页 |
| 6 Prime-Boost免疫策略 | 第16页 |
| 7 研究目的与意义 | 第16-18页 |
| 材料与方法 | 第18-35页 |
| 1 材料 | 第18-22页 |
| 1.1 虫株与细胞株 | 第18页 |
| 1.2 载体与实验动物 | 第18页 |
| 1.3 血清、培养液及二抗 | 第18页 |
| 1.4 主要试剂 | 第18-19页 |
| 1.5 主要仪器设备 | 第19页 |
| 1.6 试验所需主要溶液 | 第19-22页 |
| 2 方法 | 第22-35页 |
| 2.1 引物的设计与合成 | 第22页 |
| 2.2 细胞和虫体培养 | 第22-23页 |
| 2.3 感受态细胞的制备 | 第23页 |
| 2.4 虫体总RNA的提取 | 第23页 |
| 2.5 犬新孢子虫AMA1基因的扩增 | 第23-24页 |
| 2.6 PCR产物的纯化 | 第24-25页 |
| 2.7 犬新孢子虫AMA1基因的克隆 | 第25-26页 |
| 2.8 重组pVAX1-AMA1质粒的构建 | 第26-27页 |
| 2.9 重组质粒pVAX1-AMA1的大量提取 | 第27-28页 |
| 2.10 重组质粒pVAX1-AMA1的表达 | 第28-29页 |
| 2.11 重组腺病毒穿梭质粒pCR259-AMA1的构建 | 第29页 |
| 2.12 AMA1基因重组腺病毒表达载体的构建 | 第29-30页 |
| 2.13 AMA1基因重组腺病毒表达质粒的线性化 | 第30-31页 |
| 2.14 AMA1基因重组腺病毒的包装 | 第31页 |
| 2.15 重组腺病毒Ad5-NcAMA1的鉴定 | 第31-32页 |
| 2.16 重组腺病毒Ad5-NcAMA1 TCID_(50)的测定 | 第32页 |
| 2.17 动物免疫试验 | 第32页 |
| 2.18 小鼠血清中抗体水平的检测 | 第32-33页 |
| 2.19 小鼠血清中IgG1、IgG2a水平检测 | 第33页 |
| 2.20 小鼠血清中IFN-γ、IL-4水平检测 | 第33页 |
| 2.21 CD4+、CD8+T淋巴细胞亚群测定 | 第33-34页 |
| 2.22 数据分析 | 第34-35页 |
| 结果 | 第35-49页 |
| 1 AMA1基因的扩增 | 第35页 |
| 2 重组质粒pMD18-AMA1的鉴定 | 第35-36页 |
| 3 重组表达质粒pVAX1-AMA1的鉴定 | 第36-37页 |
| 4 pVAX1-AMA1质粒中AMA1基因表达的鉴 | 第37-38页 |
| 4.1 间接免疫荧光检测AMA1基因的表达 | 第37-38页 |
| 4.2 Western blot检测AMA1基因的表达 | 第38页 |
| 5 重组腺病毒穿梭质粒pCR259-AMA1的鉴定 | 第38-39页 |
| 6 重组腺病毒表达质粒294-AMA1的鉴定 | 第39-40页 |
| 7 AMA1基因重组腺病毒的包装 | 第40-41页 |
| 8 重组腺病毒Ad5-NcAMA1的鉴定 | 第41-43页 |
| 8.1 PCR检测AMA1基因 | 第41页 |
| 8.2 间接免疫荧光检测AMA1基因的表达 | 第41-42页 |
| 8.3 Western blot检测AMA1基因的表达 | 第42-43页 |
| 9 重组腺病毒Ad5-NcAMA1病毒滴度测定 | 第43页 |
| 10 BALB/c小鼠血清中的特异性抗体检测结果 | 第43-45页 |
| 10.1 IgG检测结果 | 第43页 |
| 10.2 IgG1检测结果 | 第43-44页 |
| 10.3 IgG2a检测结果 | 第44-45页 |
| 11 BALB/c小鼠T淋巴细胞亚群含量检测 | 第45-46页 |
| 12 外周血中细胞因子水平检测 | 第46-49页 |
| 12.1 IL-4检测结果 | 第46-47页 |
| 12.2 IFN-γ检测结果 | 第47-49页 |
| 讨论 | 第49-52页 |
| 结论 | 第52-53页 |
| 参考文献 | 第53-60页 |
| 致谢 | 第60-61页 |
| 附录A (作者简介) | 第61-62页 |
| 附录B (在研期间发表的论文) | 第62页 |
