| 摘要 | 第5-12页 |
| ABSTRACT | 第12-19页 |
| 目录 | 第20-24页 |
| 缩略词表 | 第24-25页 |
| 第一章 前言 | 第25-28页 |
| 第二章 Integrin β4在气道上皮氧化应激损伤修复中的作用 | 第28-59页 |
| 2.1 材料与方法 | 第29-48页 |
| 2.1.1 材料 | 第29页 |
| 2.1.2 主要仪器设备 | 第29-30页 |
| 2.1.3 OVA应激哮喘动物模型的制备 | 第30页 |
| 2.1.4 肺功能检测 | 第30页 |
| 2.1.5 支气管肺泡灌洗(bronchoalvagelavage,BAL) | 第30页 |
| 2.1.6 肺组织病理变化 | 第30-31页 |
| 2.1.7 Real time RT-PCR检测大鼠integrin β4 mRNA表达水平 | 第31页 |
| 2.1.8 免疫组化检测OVA应激哮喘模型大鼠气道粘膜integrin β4水平 | 第31页 |
| 2.1.9 永生化人支气管上皮细胞株(16HBE14o-)的培养 | 第31-32页 |
| 2.1.10 原代大鼠气道上皮细胞(RTE)的培养 | 第32页 |
| 2.1.11 免疫细胞化学检测16HBE14o-及RTE损伤边缘integrin β4表达 | 第32页 |
| 2.1.12 免疫组化染色结果判断 | 第32页 |
| 2.1.13 Western blotting检测16HBE14o-及RTE臭氧应激后integrin β4的表达 | 第32-33页 |
| 2.1.14 流式检测16HBE14o-及RTE臭氧应激后integrin β4的表达 | 第33页 |
| 2.1.15 Integrin β4高表达载体构建 | 第33-39页 |
| 2.1.16 RTE integrin β4 microRNA慢病毒载体制备 | 第39-47页 |
| 2.1.17 测量RTE的损伤修复指数 | 第47页 |
| 2.1.18 RTE活力测定 | 第47页 |
| 2.1.19 RTE抗氧化能力检测及三种抗氧化酶表达检测 | 第47页 |
| 2.1.20 统计学处理 | 第47-48页 |
| 2.2 结果 | 第48-59页 |
| 2.2.1 氧应激16HBE14o-及RTE后integrinβ4表达明显上调 | 第48-49页 |
| 2.2.2 Integrin β4在16HBE14o-及RTE损伤修复边缘高表达 | 第49页 |
| 2.2.3 哮喘动物模型检测 | 第49-51页 |
| 2.2.4 Integrin β4在OVA致敏哮喘大鼠支气管肺组织中表达下调 | 第51-52页 |
| 2.2.5 Integrin β4在pcDNA3.1/integrin β4载体转染后表达增多 | 第52页 |
| 2.2.6 大鼠integrin β4 microRNA慢病毒载体的筛选和验证 | 第52-53页 |
| 2.2.7 Integrin β4高表达及沉默后对RTE损伤修复能力的影响 | 第53-54页 |
| 2.2.8 Integrin β4高表达及沉默后对RTE的增殖能力的影响 | 第54-55页 |
| 2.2.9 Integrin β4高表达及沉默后对RTE的抗氧化能力的影响 | 第55-59页 |
| 第三章 Integrin β4与哮喘相关性分析 | 第59-78页 |
| 3.1 材料和方法 | 第60-68页 |
| 3.1.1 材料 | 第60页 |
| 3.1.2 主要仪器设备 | 第60-61页 |
| 3.1.3 病例 | 第61页 |
| 3.1.4 免疫组化检测哮喘病人支气管黏膜上皮integrin β4水平 | 第61页 |
| 3.1.5 免疫组化染色结果判断 | 第61页 |
| 3.1.6 合成针对integrin β4的siRNA转染到16HBE14o-中 | 第61-62页 |
| 3.1.7 构建integrin β4有效siRNA序列的慢病毒载体及转染 | 第62-65页 |
| 3.1.8 Real time RT-PCR检测16HBE14o-中integrin β4表达水平 | 第65-66页 |
| 3.1.9 Western blotting检测慢病毒转染16HBE14o-后integrin β4的蛋白表达 | 第66页 |
| 3.1.10 Integrin β4基因沉默后16HBE14o-细胞生物学功能检测 | 第66-68页 |
| 3.1.11 统计学处理 | 第68页 |
| 3.2 结果 | 第68-74页 |
| 3.2.1 哮喘病人支气管粘膜integrin β4表达降低 | 第68-69页 |
| 3.2.2 siRNA转染16HBE14o-细胞对integrin β4的表达抑制 | 第69-71页 |
| 3.2.3 Integrin β4基因沉默后气道上皮细胞生物学功能的影响 | 第71-74页 |
| 3.3 讨论 | 第74-78页 |
| 第四章 臭氧攻击后integrin β4表达下调与AHR的相关性 | 第78-90页 |
| 4.1 材料与方法 | 第79-81页 |
| 4.1.1 材料 | 第79页 |
| 4.1.2 主要仪器设备 | 第79-80页 |
| 4.1.3 建立臭氧攻击大鼠模型 | 第80页 |
| 4.1.4 臭氧攻击大鼠肺功能检测 | 第80页 |
| 4.1.5 Real time PCR检测integrin β4 mRNA在大鼠肺组织及16HBE14o-的表达 | 第80页 |
| 4.1.6 免疫组化检测臭氧应激大鼠模型气道粘膜integrin β4水平 | 第80页 |
| 4.1.7 免疫组化染色结果判断 | 第80-81页 |
| 4.1.8 Integrin β4特异siRNA体外合成及转染 | 第81页 |
| 4.1.9 流式检测siRNA转染16HBE14o-后integrin β4表达水平 | 第81页 |
| 4.1.10 Annexin V-PI细胞凋亡检测 | 第81页 |
| 4.1.11 Oxygen DCFH检测细胞抗臭氧应激能力 | 第81页 |
| 4.1.12 统计学处理 | 第81页 |
| 4.2 结果 | 第81-87页 |
| 4.2.1 Integrin β4在臭氧应激的大鼠肺支气管黏膜表达下调 | 第81-83页 |
| 4.2.2 臭氧应激AHR模型检测 | 第83页 |
| 4.2.3 臭氧应激后,肺组织integrin β4 mRNA含量与RL相关性分析 | 第83-85页 |
| 4.2.4 Integrin β4 siRNA有效抑制16HBE14o-integrin β4的表达 | 第85-86页 |
| 4.2.5 Integrin β4沉默对16HBE14o-抗氧化能力及凋亡水平的影响 | 第86-87页 |
| 4.3 讨论 | 第87-90页 |
| 第五章 Integrin β4对气道上皮细胞抗原呈递及淋巴细胞增殖分化的调控 | 第90-104页 |
| 5.1 材料与方法 | 第91-95页 |
| 5.1.1 材料 | 第91-92页 |
| 5.1.2 主要仪器设备 | 第92页 |
| 5.1.3 流式检测16HBE14o-表面B7家成员表达 | 第92页 |
| 5.1.4 免疫组化检测人支气管气道粘膜B7家族成员表达 | 第92页 |
| 5.1.5 免疫组化染色结果判断 | 第92页 |
| 5.1.6 Integrin β4特异siRNA病毒载体体外合成及转染 | 第92页 |
| 5.1.7 Real time RT-PCR检测16HBE14o-integrin β4表达水平 | 第92页 |
| 5.1.8 Western blotting检测慢病毒转染16HBE14o-后integrin β4的蛋白表达 | 第92页 |
| 5.1.9 免疫荧光检测16HBE14o-HLA-DR的表达 | 第92-93页 |
| 5.1.10 支气管上皮细胞抗原呈递能力原位观察 | 第93页 |
| 5.1.11 外周血提取淋巴细胞 | 第93页 |
| 5.1.12 上皮细胞与淋巴细胞共培养 | 第93-94页 |
| 5.1.13 淋巴细胞增殖检测 | 第94页 |
| 5.1.14 细胞因子检测 | 第94-95页 |
| 5.1.15 统计学处理 | 第95页 |
| 5.2 结果 | 第95-101页 |
| 5.2.1. B7家族成员在16HBE14o-的表达 | 第95-96页 |
| 5.2.2. B7家族成员在人支气管气道粘膜上的表达 | 第96页 |
| 5.2.3. HLA-DR在正常及OVA刺激后的16HBE14o-的表达 | 第96-97页 |
| 5.2.4. Integrin β4 siRNA慢病毒载体有效抑制integrin β4的表达 | 第97-98页 |
| 5.2.5. Integrin β4沉默后16HBE14o-抗原呈递能力变化 | 第98-99页 |
| 5.2.6. Integrin β4沉默后与淋巴细胞共培养对淋巴细胞增殖的影响 | 第99-100页 |
| 5.2.7. Integrin β4沉默后与淋巴细胞共培养对淋巴细胞分化的影响 | 第100-101页 |
| 5.3 讨论 | 第101-104页 |
| 第六章 结论 | 第104-105页 |
| 综述 | 第105-133页 |
| 参考文献 | 第113-133页 |
| 在读期间主要的研究成果 | 第133-135页 |
| 致谢 | 第135-136页 |
