| 第一部分 流感病毒与宿主的相互作用研究 | 第10-87页 |
| 摘要 | 第10-12页 |
| Abstract | 第12-13页 |
| 缩略语 | 第14-16页 |
| 1 文献综述 | 第16-38页 |
| 1.1 流感病毒的形态和结构 | 第16-17页 |
| 1.1.1 流感病毒的基因组结构 | 第17页 |
| 1.1.2 流感病毒基因组的编码产物 | 第17页 |
| 1.2 流感病毒的生活史 | 第17-35页 |
| 1.2.1 流感病毒的侵入 | 第18-23页 |
| 1.2.2 流感病毒的复制和转录 | 第23-26页 |
| 1.2.3 流感病毒的组装和出芽 | 第26-35页 |
| 1.3 流感病毒蛋白与宿主蛋白的相互作用 | 第35-38页 |
| 2 研究目的与意义 | 第38-39页 |
| 3 材料与方法 | 第39-57页 |
| 3.1 材料 | 第39-47页 |
| 3.1.1 菌株,病毒株,细胞,质粒和文库 | 第39-41页 |
| 3.1.2 抗体 | 第41-42页 |
| 3.1.3 主要试剂 | 第42页 |
| 3.1.4 培养基 | 第42-44页 |
| 3.1.5 抗生素 | 第44页 |
| 3.1.6 引物 | 第44-46页 |
| 3.1.7 重要仪器和设备 | 第46-47页 |
| 3.2 方法 | 第47-57页 |
| 3.2.1 PCR | 第47页 |
| 3.2.2 质粒DNA的抽提及纯化 | 第47页 |
| 3.2.3 大肠杆菌 | 第47-48页 |
| 3.2.4 定点诱变 | 第48页 |
| 3.2.5 酵母双杂交 | 第48-50页 |
| 3.2.6 原核表达与纯化 | 第50-51页 |
| 3.2.7 GST融合蛋白的纯化 | 第51页 |
| 3.2.8 SDS-PAGE电泳,GST pull-down,免疫共沉淀与Western Blot | 第51-53页 |
| 3.2.9 RNA抽提 | 第53-54页 |
| 3.2.10 两步法RT-PCR | 第54页 |
| 3.2.11 细胞的复苏,传代,冻存 | 第54-55页 |
| 3.2.12 细胞转染 | 第55页 |
| 3.2.13 哺乳动物双杂交 | 第55页 |
| 3.2.14 间接免疫荧光 | 第55-56页 |
| 3.2.15 siRNA | 第56页 |
| 3.2.16 基因核苷酸和氨基酸序列分析及同源性比较 | 第56-57页 |
| 4 结果与分析 | 第57-81页 |
| 4.1 从人的胎脑cDNA文库筛选与NS2相互作用的配体 | 第57-60页 |
| 4.1.1 构建诱饵质粒 | 第57页 |
| 4.1.2 AH109酵母菌株表型验证 | 第57-58页 |
| 4.1.3 诱饵自激活检测 | 第58页 |
| 4.1.4 从人的胎脑cDNA文库筛选与NS2相互作用的配体 | 第58页 |
| 4.1.5 排除假阳性 | 第58页 |
| 4.1.6 阳性克隆的测序与同源性分析 | 第58-60页 |
| 4.2 哺乳动物双杂交 | 第60-65页 |
| 4.2.1 克隆28个候选克隆到pACT-Vector | 第60-61页 |
| 4.2.2 哺乳动物双杂验证相互作用 | 第61-62页 |
| 4.2.3 克隆HSPBP1和CHD3s | 第62页 |
| 4.2.4 哺乳动物双杂交检测NS2与HSPBP1和CHD3s的相互作用 | 第62-63页 |
| 4.2.5 28个猎物的GO分类 | 第63-64页 |
| 4.2.6 NS2与28个猎物的相互作用网络 | 第64-65页 |
| 4.3 免疫共沉淀验证C-CHD3与HSPBP1s和NS2的相互作用 | 第65-67页 |
| 4.3.1 免疫共沉淀 | 第66-67页 |
| 4.3.2 GST pull-down验证C-CHD3和HSPBP1s与NS2的相互作用 | 第67页 |
| 4.4 检测CHD4与NS2的相互作用 | 第67-68页 |
| 4.4.1 分析CHD3与CHD4的同源性 | 第67-68页 |
| 4.4.2 克隆CHD4的C末端 | 第68页 |
| 4.4.3 C-CHD4不与NS2相互作用 | 第68页 |
| 4.5 NS2与CHD3的亚细胞定位 | 第68-70页 |
| 4.5.1 瞬间表达NS2和C-CHD3检测NS2与C-CHD3的亚细胞定位 | 第68-69页 |
| 4.5.2 流感病毒感染改变C-CHD3的亚细胞定位 | 第69-70页 |
| 4.5.3 流感病毒感染时NS2与内源CHD3的细胞定位 | 第70页 |
| 4.6 NS2与C-CHD3和HSPBP1s相互作用的保守性 | 第70-72页 |
| 4.6.1 克隆A/WSN/1933(H1N1),A/Mexico City/001/2009(H1N1)和A/duck/Hubei/W1/2004(H9N2)的NS2 | 第70-71页 |
| 4.6.2 A/WSN/1933 (H1N1),A/Mexico City/001/2009(H1N1)和A/duck/Hubei/W1/2004(H9N2)的NS2与C-CHD3 HSPBP1s的相互作用 | 第71-72页 |
| 4.7 确定起作用的NS2结构域 | 第72-75页 |
| 4.7.1 克隆NS2的结构域 | 第72页 |
| 4.7.2 确定起作用的NS2结构域 | 第72-73页 |
| 4.7.3 突变核输出信号(NES)的NS2与C-CHD3和HSPBP1s的相互作用 | 第73-75页 |
| 4.8 寻找HSPBP1s的结构域 | 第75-76页 |
| 4.8.1 克隆HSPBP1s的结构域 | 第75页 |
| 4.8.2 HSPBPls的N端和C端结构域不与NS2相互作用 | 第75-76页 |
| 4.9 在HeLa细胞中检测NS2与C-CHD3和HSPBP1s的相互作用 | 第76页 |
| 4.10 CHD3对病毒增殖的影响 | 第76-78页 |
| 4.10.1 过表达C-CHD3抑制病毒增殖 | 第77页 |
| 4.10.2 RNA干扰内源CHD3降低病毒增殖 | 第77-78页 |
| 4.11 过表达全长HSPBP1s对病毒没有影响 | 第78页 |
| 4.12 NS2与CHD3相互作用在病毒增殖中的作用 | 第78-81页 |
| 4.12.1 NS2与CHD3相互作用能调控CHD3对基因表达的抑制作用 | 第78-79页 |
| 4.12.2 NS2与CHD3相互作用影响病毒vRNP的出核 | 第79-81页 |
| 5 讨论 | 第81-86页 |
| 6 总结 | 第86-87页 |
| 第二部分 DEV的US10,SORF3和US2基因特征 | 第87-113页 |
| 摘要 | 第87-88页 |
| Abstract | 第88-89页 |
| 1 文献综述 | 第89-95页 |
| 1.1 α疱疹病毒 | 第89-90页 |
| 1.1.1 α疱疹病毒的基因组结构 | 第89-90页 |
| 1.2 鸭肠炎病毒 | 第90-95页 |
| 1.2.1 鸭病毒性肠炎的病原学 | 第91页 |
| 1.2.2 鸭病毒性肠炎的流行病学 | 第91-92页 |
| 1.2.3 鸭病毒性肠炎的症状和病理学变化 | 第92页 |
| 1.2.4 DEV的形态 | 第92-93页 |
| 1.2.5 DEV在体内的增殖 | 第93页 |
| 1.2.6 鸭肠炎病毒的检测方法 | 第93页 |
| 1.2.7 鸭病毒性肠炎的防治 | 第93页 |
| 1.2.8 鸭病毒性肠炎的分子生物学研究进展 | 第93-95页 |
| 2 目的与意义 | 第95-96页 |
| 3 材料和方法 | 第96-101页 |
| 3.1 材料 | 第96-97页 |
| 3.1.1 引物 | 第96页 |
| 3.1.2 病毒和质粒 | 第96-97页 |
| 3.1.3 试剂 | 第97页 |
| 3.1.4 培养基 | 第97页 |
| 3.2 方法 | 第97-101页 |
| 3.2.1 制备鸡胚成纤维细胞 | 第97页 |
| 3.2.2 DEV基因组提取 | 第97-98页 |
| 3.2.3 构建T载体DEV基因组文库 | 第98-99页 |
| 3.2.4 克隆US1和US10序列片段 | 第99页 |
| 3.2.5 确定ORF | 第99页 |
| 3.2.6 信息学分析 | 第99页 |
| 3.2.7 RNA提取 | 第99页 |
| 3.2.8 3'Rapid amplification of cDNA ends (3'RACE) | 第99-100页 |
| 3.2.9 定位启动子 | 第100页 |
| 3.2.10 进化分析 | 第100页 |
| 3.2.11 基因登录号 | 第100-101页 |
| 4 结果与分析 | 第101-109页 |
| 4.1 DEV的生长曲线 | 第101页 |
| 4.2 绘制DEV的生长曲线 | 第101-102页 |
| 4.3 提取DEV基因组 | 第102页 |
| 4.4 ORF测序结果 | 第102-103页 |
| 4.5 US区分析 | 第103-104页 |
| 4.6 US10,SORF3和US2基因的分子特征 | 第104页 |
| 4.7 确定加尾信号poly(A) | 第104-107页 |
| 4.8 确定启动子序列 | 第107页 |
| 4.9 进化分析 | 第107-109页 |
| 5 讨论 | 第109-111页 |
| 6 总结 | 第111-113页 |
| 参考文献 | 第113-135页 |
| 简历(Curriculum Vitae) | 第135-136页 |
| 发表的主要论文 | 第136-137页 |
| 致谢 | 第137-138页 |
