| 摘要 | 第4-6页 |
| ABSTRACT | 第6-7页 |
| 插图和附表清单 | 第12-14页 |
| 缩略词 | 第14-15页 |
| 第一章 文献综述 | 第15-30页 |
| 1.1 植物病毒病的研究进展 | 第15-20页 |
| 1.1.1 植物病毒病的危害 | 第15-16页 |
| 1.1.2 病毒侵染机制 | 第16-17页 |
| 1.1.3 黄瓜花叶病毒 | 第17-19页 |
| 1.1.4 植物病毒病的主要防治方法 | 第19-20页 |
| 1.2 RNAi在植物抗病毒应用中的研究进展 | 第20-25页 |
| 1.2.1 RNAi的机制 | 第20-22页 |
| 1.2.2 病毒抑制PTGS的作用方式 | 第22-23页 |
| 1.2.3 dsRNA引发的基因沉默 | 第23-24页 |
| 1.2.4 RNAi技术的应用 | 第24-25页 |
| 1.3 百合遗传转化的研究进展 | 第25-29页 |
| 1.3.1 百合组织培养 | 第25-26页 |
| 1.3.2 农杆菌介导的遗传转化 | 第26-27页 |
| 1.3.3 GUS与NPTII在遗传转化中的应用 | 第27-28页 |
| 1.3.4 植物基因工程在百合上的应用 | 第28-29页 |
| 1.4 本课题的研究意义与目的 | 第29-30页 |
| 第二章 CMV复制酶基因1α及2α的分子克隆及RNAi载体的构建 | 第30-47页 |
| 2.1 前言 | 第30页 |
| 2.2 材料 | 第30-34页 |
| 2.2.1 病毒材料 | 第30-31页 |
| 2.2.2 菌株和载体 | 第31-33页 |
| 2.2.3 主要试剂 | 第33页 |
| 2.2.4 缓冲液配方 | 第33-34页 |
| 2.3 方法 | 第34-40页 |
| 2.3.1 百合病叶组织RNA提取及纯化 | 第34页 |
| 2.3.2 cDNA逆转录 | 第34页 |
| 2.3.3 PCR反应 | 第34-36页 |
| 2.3.4 T-A克隆 | 第36页 |
| 2.3.5 大肠杆菌感受态细胞的热刺激转化 | 第36-37页 |
| 2.3.6 琼脂糖凝胶电泳 | 第37页 |
| 2.3.7 SDS碱裂解法提取并纯化质粒 | 第37-38页 |
| 2.3.8 PMD-18T-CMV1α及2α的PCR检测 | 第38页 |
| 2.3.9 BP重组反应 | 第38页 |
| 2.3.10 RNAi载体的酶切检测 | 第38-39页 |
| 2.3.11 制备农杆菌感受态细胞 | 第39页 |
| 2.3.12 电转化法转化农杆菌感受态细胞 | 第39页 |
| 2.2.13 PCR检测 | 第39-40页 |
| 2.4 结果与分析 | 第40-45页 |
| 2.4.1 CMV复制酶基因1α和2α的克隆 | 第40-42页 |
| 2.4.2 核苷酸序列的同源性分析 | 第42页 |
| 2.4.3 RNAi载体的构建 | 第42-44页 |
| 2.4.4 RNAi植物表达载体转化农杆菌 | 第44-45页 |
| 2.5 讨论 | 第45-47页 |
| 第三章 遗传转化及CMV抗性分析 | 第47-58页 |
| 3.1 前言 | 第47页 |
| 3.2 材料 | 第47-49页 |
| 3.2.1 植物材料 | 第47-48页 |
| 3.2.2 主要试剂 | 第48页 |
| 3.2.3 CMV材料 | 第48页 |
| 3.2.4 缓冲液和培养液配方 | 第48-49页 |
| 3.3 方法 | 第49-52页 |
| 3.3.1 遗传转化 | 第49-50页 |
| 3.3.2 CTAB法提取植物总DNA | 第50页 |
| 3.3.3 引物设计 | 第50-51页 |
| 3.3.4 PCR检测 | 第51页 |
| 3.3.5 黄瓜花叶病毒粗提液的制备 | 第51-52页 |
| 3.3.6 转基因植株接种病毒 | 第52页 |
| 3.3.7 RNA的提取 | 第52页 |
| 3.3.8 RT-PCR检测 | 第52页 |
| 3.4 结果与分析 | 第52-56页 |
| 3.4.1 转基因植物的PCR检测 | 第52-54页 |
| 3.4.2 转基因烟草接种病毒 | 第54-56页 |
| 3.5 讨论 | 第56-58页 |
| 第四章 岷江百合遗传转化体系的初步建立 | 第58-71页 |
| 4.1 前言 | 第58页 |
| 4.2 材料和试剂 | 第58-60页 |
| 4.2.1 植物材料 | 第58页 |
| 4.2.2 菌株和载体 | 第58-59页 |
| 4.2.3 主要试剂 | 第59页 |
| 4.2.4 缓冲液和培养基配方 | 第59-60页 |
| 4.3 方法 | 第60-62页 |
| 4.3.1 GUS染色 | 第60页 |
| 4.3.2 岷江百合农杆菌侵染参数的优化 | 第60-61页 |
| 4.3.3 CTAB法提取岷江百合基因组DNA | 第61页 |
| 4.3.4 引物设计 | 第61-62页 |
| 4.3.5 PCR反应 | 第62页 |
| 4.4 结果与分析 | 第62-70页 |
| 4.4.1 农杆菌侵染参数的优化 | 第62-68页 |
| 4.4.2 转基因岷江百合的的基因组PCR检测 | 第68-70页 |
| 4.5 讨论 | 第70-71页 |
| 第五章 结论与展望 | 第71-73页 |
| 5.1 结论 | 第71-72页 |
| 5.2 展望 | 第72-73页 |
| 致谢 | 第73-74页 |
| 参考文献 | 第74-82页 |
| 附录A 攻读硕士期间发表论文目录 | 第82页 |