| ABSTRACT | 第5-6页 |
| NOMENCLATURE | 第14-16页 |
| Chapter 1. Biodiversity and phylogeny of Trichoderma | 第16-26页 |
| 1.1. Characteristics of Trichoderma spp | 第17-18页 |
| 1.2. Tools for genetic manipulation of Trichoderma | 第18-19页 |
| 1.3. Defense mechanisms and their exploitation | 第19页 |
| 1.4. Trichoderma's strategies for combat | 第19-20页 |
| 1.5. Regulatory mechanisms triggering the defense of Trichoderma | 第20-21页 |
| 1.6. Trichoderma as a protector of plant health | 第21页 |
| 1.7. Secondary metabolites | 第21-22页 |
| 1.8. Trichoderma spp. as industrial workhorses | 第22页 |
| 1.9. Cellulases and plant cell wall-degrading enzymes | 第22-23页 |
| 1.10. Heterologous protein production | 第23-24页 |
| 1.11. Food industry | 第24页 |
| 1.12. Human pathogenic species | 第24-26页 |
| Chapter 2. Agrobacterium-mediated transformation of Trichoderma reeseioverexpressing the Perilla frutescens y-tocopherol methyltransferase gene | 第26-51页 |
| 2.1. Introduction | 第26-29页 |
| 2.2. Materials and methods | 第29-37页 |
| 2.2.1. Strains, plasmid, media and major reagent | 第29页 |
| 2.2.2. Primer design | 第29页 |
| 2.2.3. RNA Isolation | 第29-30页 |
| 2.2.4. Reverse Transcriptase Reactions PCR | 第30-31页 |
| 2.2.5. Transformation plasmid into DH5a strain of Escherichia coli | 第31-32页 |
| 2.2.6. Vector construction | 第32-33页 |
| 2.2.7. Transformation of A. tumefaciens with plasmid DNA (binary vector system) | 第33-34页 |
| 2.2.7.1. Preparation of competent cells | 第33-34页 |
| 2.2.7.2. Electroporation | 第34页 |
| 2.2.8. Agrobacterium tumefaciens-mediated fungal transformation | 第34-35页 |
| 2.2.9. Molecular analysis of transformants | 第35页 |
| 2.2.10. Expression γ-PfTMT gene in Trichoderma viride | 第35-36页 |
| 2.2.11. Expression γ-PfTMT gene in E. coli BL21 | 第36页 |
| 2.2.12. The enzyme activity assay of the recombinant γ-PfTMT | 第36-37页 |
| 2.2.13. Chemical analysis | 第37页 |
| 2.3. Results | 第37-48页 |
| 2.3.1. Characterization of γ-PfTMTgene | 第37-40页 |
| 2.3.2. Agrobacterium-mediated fungal transformation | 第40-42页 |
| 2.3.3. Molecular analysis of transformants | 第42-43页 |
| 2.3.4. Expression of γ-PfTMT in Trichoderma reesei | 第43-44页 |
| 2.3.5. Expression of γ-PfTMT in E. coli | 第44-45页 |
| 2.3.6. The enzyme activity assay of the recombinant γ-PfTMT protein | 第45-48页 |
| 2.4. Discussion | 第48-50页 |
| 2.5. Conclusion | 第50-51页 |
| Chapter 3. Agrobacterium-mediated transformation of Trichoderma reeseioverexpressing the Brassica oleracea γ-tocopherol methyltransferase gene | 第51-68页 |
| 3.1. Introduction | 第51-52页 |
| 3.2. Materials and methods | 第52-58页 |
| 3.2.1. Strains, plasmid, media and major reagent | 第52-53页 |
| 3.2.2. Primer design | 第53页 |
| 3.2.3. Transformation plasmid into DH5α strain of Escherichia coli | 第53页 |
| 3.2.4. Vector construction | 第53-55页 |
| 3.2.5. Agrobacterium tumefaciens-mediated fungal transformation | 第55-56页 |
| 3.2.6. Molecular analysis of transformants | 第56页 |
| 3.2.7. Expression γ-BoTMT gene in Trichoderma reesei | 第56-57页 |
| 3.2.8. Expression γ-BoTMTgene in E. coli BL21 | 第57页 |
| 3.2.9. The enzyme activity assay of the recombinant γ-BoTMT | 第57页 |
| 3.2.10. Chemical analysis | 第57-58页 |
| 3.3. Results | 第58-65页 |
| 3.3.1. Characterization of γ-BoTMT | 第58-59页 |
| 3.3.2. Agrobacterium-mediated fungal transformation | 第59-61页 |
| 3.3.3. Molecular analysis of transformants | 第61-62页 |
| 3.3.4. Expression of γ-BoTMT in Trichoderma reesei | 第62-63页 |
| 3.3.5. Expression of γ-BoTMT in E.coli | 第63-64页 |
| 3.3.6. The enzyme activity assay of the recombinant γ-BoTMT protein | 第64-65页 |
| 3.4. Discussion | 第65-67页 |
| 3.5. Conclusion | 第67-68页 |
| Chapter 4.Agrobacterium-mediated transformation of Tricoderma reeseioverexpressing the FAD2 gene | 第68-85页 |
| 4.1. Introduction | 第68-72页 |
| 4.2. Materials and methods | 第72-76页 |
| 4.2.1. Strains,plasmid,media and major reagent | 第72页 |
| 4.2.2. Primer design | 第72页 |
| 4.2.3. RNA Isolation,Reverse Transcriptase Reactions PCR | 第72-73页 |
| 4.2.4. Transformation plasmid into DH5α strain of Escherichia coli | 第73页 |
| 4.2.5. Vector construction | 第73-75页 |
| 4.2.6. Agrobacterium tumefaciens-mediated fungal transformation | 第75页 |
| 4.2.7. Molecular analysis of transformants | 第75-76页 |
| 4.2.8. Expression FAD2 gene in E.coli and Trichoderma reesei | 第76页 |
| 4.3. Results | 第76-83页 |
| 4.3.1. Characterization of maize FAD2 gene | 第76-79页 |
| 4.3.2. Agrobacterium-mediated fungal transformation | 第79-81页 |
| 4.3.3. Molecular analysis of transformants | 第81-82页 |
| 4.3.4. Expression of FAD2 in Trichoderma reesei | 第82-83页 |
| 4.4. Discussion | 第83-84页 |
| 4.5. Conclusion | 第84-85页 |
| Chapter 5. Novel plant transformation vectors containing γ-PfTMT and FAD2 genes | 第85-100页 |
| 5.1. Introduction | 第85-87页 |
| 5.2. Materials and methods | 第87-92页 |
| 5.2.1. PCR Overlapping Extension | 第87-89页 |
| 5.2.2. Vector construction | 第89-91页 |
| 5.2.3. Transformation of A.tumefacient with plasmid DNA | 第91-92页 |
| 5.2.3.1. Preparation of competent cell | 第91-92页 |
| 5.2.3.2 Electroporation | 第92页 |
| 5.3. Results and discussion | 第92-99页 |
| 5.3.1. PCR Overlapping Extension | 第92-94页 |
| 5.3.2. Construction of plasmid vector pCAMBlA1301S-FAD2,pCAMBIA1301S-TMT and pCAMBIA1301S-FAD2-TMT | 第94-98页 |
| 5.3.3. Transformation of A.tumefacient with plasmid DNA | 第98-99页 |
| 5.4. Conclusion | 第99-100页 |
| Chapter 6. Conclusion and Future direction | 第100-102页 |
| 6.1. Conclusion | 第100-101页 |
| 6.2. Future direction | 第101-102页 |
| REFERENCE | 第102-130页 |
| ACKNOWLEDGEMENT | 第130-131页 |
| AUTHOR'S INTRODUTION | 第131-134页 |
| APPENDIX | 第134-135页 |
