| 摘要 | 第7-9页 |
| ABSTRACT | 第9-11页 |
| 缩略词表(ABBREVIATION) | 第12-13页 |
| 第一章 绪论 | 第13-28页 |
| 1.1 纤维素材料的结构特征 | 第13-15页 |
| 1.2 降解纤维素的微生物 | 第15-17页 |
| 1.2.1 降解纤维素的细菌 | 第15-17页 |
| 1.2.2 降解纤维素的放线菌 | 第17页 |
| 1.2.3 降解纤维素的真菌 | 第17页 |
| 1.3 纤维素的微生物降解机制 | 第17-22页 |
| 1.3.1 纤维素酶降解纤维素的机理 | 第17-18页 |
| 1.3.2 微生物降解纤维素的策略 | 第18-22页 |
| 1.4 Cytophaga hutchinsonii研究背景 | 第22-27页 |
| 1.5 论文的立题依据和工作内容 | 第27-28页 |
| 第二章 C.hutchinsonii生长条件及遗传转化体系的优化 | 第28-45页 |
| 2.1 材料与方法 | 第28-34页 |
| 2.1.1 菌株及质粒 | 第28-29页 |
| 2.1.2 培养基及缓冲液 | 第29-30页 |
| 2.1.3 培养方法 | 第30页 |
| 2.1.4 主要试剂与仪器 | 第30-31页 |
| 2.1.5 菌体生长测定 | 第31页 |
| 2.1.6 微镜观察 | 第31页 |
| 2.1.7 C.hutchinsonii原生质体制备与再生方法 | 第31页 |
| 2.1.8 接合供体菌的获得 | 第31-32页 |
| 2.1.9 C.hutchinsonii接合方法 | 第32页 |
| 2.1.10 C.hutchinsonii电转化方法 | 第32-33页 |
| 2.1.11 无细胞提取液(CFE)的制备 | 第33页 |
| 2.1.12 CFE对E.coli质粒的甲基修饰反应 | 第33-34页 |
| 2.2 结果与分析 | 第34-43页 |
| 2.2.1 培养基中不同碳氮源比例对菌体生长的影响 | 第34-36页 |
| 2.2.2 C.hutchinsonii在不同培养基中生长各个时期的细胞形态观察 | 第36-37页 |
| 2.2.3 C.hutchinsonii原生质体制备与再生 | 第37-39页 |
| 2.2.4 C.hutchinsonii与大肠杆菌接合实验 | 第39-40页 |
| 2.2.5 C.hutchinsonii电转化条件优化 | 第40-43页 |
| 2.3 小结与讨论 | 第43-45页 |
| 第三章 C.hutchinsonii中纤维素降解相关基因的荧光定量PCR分析 | 第45-56页 |
| 3.1 材料与方法 | 第45-48页 |
| 3.1.1 菌株 | 第45页 |
| 3.1.2 培养基 | 第45-46页 |
| 3.1.3 C.hutchinsonii RNA提取方法 | 第46页 |
| 3.1.4 反转录PCR(RT-PCR)技术 | 第46-47页 |
| 3.1.5 荧光定量PCR技术 | 第47-48页 |
| 3.2 结果与分析 | 第48-54页 |
| 3.2.1 C.hutchinsonii RNA的提取 | 第48-49页 |
| 3.2.2 荧光定量PCR标准曲线实验 | 第49-51页 |
| 3.2.3 荧光定量PCR对纤维素降解相关基因转录水平的分析 | 第51-54页 |
| 3.3 小结与讨论 | 第54-56页 |
| 第四章 C.hutchinsonii纤维素利用缺陷型突变株的性质研究 | 第56-71页 |
| 4.1 材料与方法 | 第56-62页 |
| 4.1.1 菌株及质粒 | 第56页 |
| 4.1.2 主要试剂及仪器 | 第56-57页 |
| 4.1.3 培养条件 | 第57页 |
| 4.1.4 基因克隆 | 第57-60页 |
| 4.1.5 转座诱变及纤维素利用缺陷突变株的筛选 | 第60页 |
| 4.1.6 转座诱变随机突变株转座子插入位置的分析 | 第60页 |
| 4.1.7 C.hutchinsonii RNA提取及反转录PCR技术 | 第60页 |
| 4.1.8 chu_1278序列分析方法 | 第60-61页 |
| 4.1.9 chu-1278突变株(C-34)的基因功能回补 | 第61页 |
| 4.1.10 回补菌株验证 | 第61页 |
| 4.1.11 回补菌株的荧光观察 | 第61页 |
| 4.1.12 回补菌株性质研究 | 第61-62页 |
| 4.2 结果与分析 | 第62-70页 |
| 4.2.1 C.hutchinsonii纤维素利用缺陷型突变株筛选 | 第62-63页 |
| 4.2.2 纤维素利用缺陷型突变株C-34中转座子插入位置分析 | 第63页 |
| 4.2.3 chu_1278基因序列的分析 | 第63-64页 |
| 4.2.4 纤维素利用缺陷型突变株C-34生长特性的研究 | 第64-66页 |
| 4.2.5 纤维素利用缺陷型突变株C-34的功能回补 | 第66-70页 |
| 4.3 小结与讨论 | 第70-71页 |
| 第五章 C.hutchinsonii中滑动相关蛋白的研究及敲除体系的探索 | 第71-95页 |
| 5.1 材料与方法 | 第71-77页 |
| 5.1.1 菌株及质粒 | 第71页 |
| 5.1.2 培养基 | 第71-73页 |
| 5.1.3 基因克隆 | 第73页 |
| 5.1.4 重组载体构建 | 第73-77页 |
| 5.1.5 突变株MT0170UP的Southern Blot验证 | 第77页 |
| 5.2 结果与分析 | 第77-93页 |
| 5.2.1 C.hutchinsonii中滑动相关基因的分析 | 第77-79页 |
| 5.2.2 基因单插入失活载体的构建 | 第79-80页 |
| 5.2.3 同源双交换载体的构建 | 第80-88页 |
| 5.2.4 重组载体电转化C.hutchinsonii的验证 | 第88页 |
| 5.2.5 Cre-lox系统 | 第88-93页 |
| 5.3 小结与讨论 | 第93-95页 |
| 全文总结 | 第95-97页 |
| 参考文献 | 第97-103页 |
| 致谢 | 第103-104页 |
| 附表 | 第104页 |
