| 摘要 | 第5-7页 |
| Abstract | 第7-8页 |
| 1 前言 | 第12-18页 |
| 1.1 多聚免疫球蛋白受体的研究进展 | 第12-17页 |
| 1.1.1 多聚免疫球蛋白受体的结构 | 第12-14页 |
| 1.1.2 多聚免疫球蛋白受体的功能 | 第14-15页 |
| 1.1.3 硬骨鱼类多聚免疫球蛋白受体的研究进展 | 第15-17页 |
| 1.2 本研究的目的和意义 | 第17-18页 |
| 2 大菱鲆多聚免疫球蛋白受体基因的克隆与生物信息学分析 | 第18-36页 |
| 2.1 实验用品 | 第18-19页 |
| 2.1.1 实验材料 | 第18-19页 |
| 2.1.2 实验仪器 | 第19页 |
| 2.2 实验方法 | 第19-25页 |
| 2.2.1 实验用品的准备 | 第19页 |
| 2.2.2 感受态细胞的制备 | 第19-20页 |
| 2.2.3 大菱鲆肝脏总 RNA 的提取 | 第20页 |
| 2.2.4 琼脂糖凝胶电泳检测 RNA 的完整性 | 第20页 |
| 2.2.5 大菱鲆 pIgR cDNA 第一链的合成 | 第20-21页 |
| 2.2.6 大菱鲆 pIgR 基因的同源扩增 | 第21-23页 |
| 2.2.7 大菱鲆 pIgR 基因全长的获得和验证 | 第23-25页 |
| 2.2.8 大菱鲆 pIgR 生物信息学分析 | 第25页 |
| 2.3 结果与分析 | 第25-33页 |
| 2.3.1 大菱鲆肝脏总 RNA 的提取 | 第25-26页 |
| 2.3.2 大菱鲆 pIgR 基因的全长克隆及验证 | 第26-27页 |
| 2.3.3 大菱鲆 pIgR 基因序列的特征分析 | 第27-28页 |
| 2.3.4 大菱鲆 pIgR 的蛋白结构预测与分析 | 第28-30页 |
| 2.3.5 大菱鲆 pIgR 与其他生物的同源性分析 | 第30-33页 |
| 2.4 讨论 | 第33-36页 |
| 3 大菱鲆 pIgR 基因的表达差异分析 | 第36-44页 |
| 3.1 实验用品 | 第36页 |
| 3.1.1 实验材料 | 第36页 |
| 3.1.2 实验仪器 | 第36页 |
| 3.2 实验方法 | 第36-38页 |
| 3.2.1 半定量 RT-PCR 分析 pIgR 在大菱鲆组织中的差异表达 | 第36-38页 |
| 3.2.2 实时荧光定量 PCR 检测 pIgR 对灭活鳗弧菌免疫的应答表达 | 第38页 |
| 3.3 结果与分析 | 第38-41页 |
| 3.3.1 大菱鲆 pIgR 基因在各组织中的表达 | 第38-39页 |
| 3.3.2 免疫刺激后大菱鲆 pIgR 基因的表达变化情况 | 第39-41页 |
| 3.4 讨论 | 第41-44页 |
| 4 大菱鲆 pIgR 的原核表达及其多克隆抗体的制备 | 第44-55页 |
| 4.1 实验用品 | 第44页 |
| 4.1.1 实验材料 | 第44页 |
| 4.1.2 实验仪器 | 第44页 |
| 4.2 实验方法 | 第44-51页 |
| 4.2.1 大菱鲆 pIgR 基因表达引物的设计 | 第44-45页 |
| 4.2.2 大菱鲆 pIgR 表达基因的 PCR 扩增及纯化 | 第45页 |
| 4.2.3 大菱鲆 pIgR 基因与 pET-32a 双酶切 | 第45-46页 |
| 4.2.4 酶切产物的连接与转化 | 第46页 |
| 4.2.5 菌落 PCR 及双酶切检测 | 第46-47页 |
| 4.2.6 重组表达载体在大肠杆菌中的诱导表达 | 第47页 |
| 4.2.7 SDS-PAGE 检测重组菌表达情况 | 第47-48页 |
| 4.2.8 重组蛋白的纯化 | 第48-49页 |
| 4.2.9 多克隆抗体的制备 | 第49-50页 |
| 4.2.10 免疫印迹技术(Western blotting)检测重组蛋白与多抗的结合 | 第50-51页 |
| 4.3 结果与分析 | 第51-53页 |
| 4.3.1 大菱鲆 pIgR 开放阅读框片段的克隆 | 第51页 |
| 4.3.2 重组表达载体的双酶切检测 | 第51-52页 |
| 4.3.3 重组表达载体的的诱导表达 | 第52页 |
| 4.3.4 免疫印迹检测大菱鲆 pIgR 多克隆抗体 | 第52-53页 |
| 4.4 讨论 | 第53-55页 |
| 5 pIgR 在大菱鲆 4 种黏膜组织中的分布 | 第55-62页 |
| 5.1 实验用品 | 第55页 |
| 5.1.1 实验材料 | 第55页 |
| 5.1.2 实验仪器 | 第55页 |
| 5.2 实验方法 | 第55-58页 |
| 5.2.1 大菱鲆 4 种黏膜组织石蜡切片的制备 | 第55-56页 |
| 5.2.2 免疫组化染色及观察 | 第56-58页 |
| 5.3 结果与分析 | 第58页 |
| 5.4 讨论 | 第58-62页 |
| 总结 | 第62-64页 |
| 参考文献 | 第64-70页 |
| 致谢 | 第70-72页 |
| 个人简历 | 第72页 |
| 已发表的学术论文 | 第72-73页 |
