| 摘要 | 第6-7页 |
| Abstract | 第7-8页 |
| 缩略词和术语表 | 第9-10页 |
| 目录 | 第10-12页 |
| 第一章 综述 | 第12-27页 |
| 1.1 前言 | 第12-13页 |
| 1.2 链霉菌宿主载体研究进展 | 第13-16页 |
| 1.2.1 链霉菌属来源的环状质粒 | 第13-16页 |
| 1.2.2 整合型质粒的发展 | 第16页 |
| 1.3 标签蛋白融合技术概述 | 第16-20页 |
| 1.3.1 常用的亲和标签 | 第16-19页 |
| 1.3.2 融合蛋白的优缺点 | 第19-20页 |
| 1.4 串联亲和纯化概述 | 第20-25页 |
| 1.4.1 TAP技术的原理 | 第21-22页 |
| 1.4.2 TAP技术的研究进展 | 第22-23页 |
| 1.4.3 TAP技术的优势、局限性及其改进 | 第23-24页 |
| 1.4.4 研究蛋白相互作用的其他方法 | 第24-25页 |
| 1.5 本文的研究内容及意义 | 第25-27页 |
| 1.5.1 本文的研究内容 | 第25-26页 |
| 1.5.2 本课题的意义 | 第26-27页 |
| 第二章 链霉菌高表达穿梭载体的构建及应用 | 第27-44页 |
| 2.1 引言 | 第27-28页 |
| 2.2 实验材料 | 第28-32页 |
| 2.2.1 菌株或者质粒 | 第28-29页 |
| 2.2.2 引物列表 | 第29页 |
| 2.2.3 主要仪器与设备 | 第29-30页 |
| 2.2.4 培养基及培养条件 | 第30-31页 |
| 2.2.5 常用试剂 | 第31-32页 |
| 2.3 实验方法 | 第32-36页 |
| 2.3.1 主要PCR程序 | 第32-33页 |
| 2.3.2 大肠杆菌质粒抽提、酶切、胶回收及DNA片段连接 | 第33页 |
| 2.3.3 大肠杆菌感受态细胞的制备及其转化 | 第33-34页 |
| 2.3.4 大肠杆菌到链霉菌的结合转移 | 第34页 |
| 2.3.5 链霉菌基因组抽提 | 第34-35页 |
| 2.3.6 链霉菌孢子悬液的制备 | 第35页 |
| 2.3.7 链霉菌蛋白的提取及SDS-PAGE和Western blot检测 | 第35-36页 |
| 2.3.8 表型分析和十二烷基灵菌红素(Red)产量测定 | 第36页 |
| 2.4 实验结果 | 第36-43页 |
| 2.4.1 pL97,pL98和pL99载体的构建过程 | 第36-37页 |
| 2.4.2 pL97,pL98和pL99载体图谱及验证 | 第37-39页 |
| 2.4.3 天蓝色链霉菌体内egfp基因的过表达 | 第39-41页 |
| 2.4.4 过表达途径特异性调控基因redD,提高十二烷基灵菌红素的产量 | 第41-43页 |
| 2.5 本章小结及讨论 | 第43-44页 |
| 第三章 链霉菌标签载体的构建及应用 | 第44-59页 |
| 3.1 引言 | 第44-45页 |
| 3.2 实验材料 | 第45-47页 |
| 3.2.1 菌株或者质粒 | 第45-46页 |
| 3.2.2 引物列表 | 第46-47页 |
| 3.2.3 主要仪器与设备 | 第47页 |
| 3.2.4 培养基及培养条件 | 第47页 |
| 3.2.5 常用试剂 | 第47页 |
| 3.3 实验方法 | 第47-49页 |
| 3.3.1 链霉菌中重组蛋白的表达(以整合型表达载体为例) | 第47-48页 |
| 3.3.2 链霉菌体内蛋白的串联亲和纯化 | 第48页 |
| 3.3.3 胰蛋白酶的酶解 | 第48-49页 |
| 3.3.4 质谱检测 | 第49页 |
| 3.4 实验结果及讨论 | 第49-58页 |
| 3.4.1 系列标签载体的构建过程 | 第49-51页 |
| 3.4.2 系列标签载体图谱及验证 | 第51-53页 |
| 3.4.3 天蓝色链霉菌ECF sigma因子SigT在标签载体中的表达 | 第53-55页 |
| 3.4.4 SigT蛋白的串联亲和纯化及蛋白质复合体的质谱检测 | 第55-58页 |
| 3.5 本章小结 | 第58-59页 |
| 第四章 结论与展望 | 第59-60页 |
| 4.1 本文研究成果 | 第59页 |
| 4.2 展望 | 第59-60页 |
| 参考文献 | 第60-67页 |
| 附录 | 第67-71页 |
| 攻读硕士学位期间的主要研究成果 | 第71-72页 |
| 致谢 | 第72页 |
