| 摘要 | 第5-7页 |
| ABSTRACT | 第7-8页 |
| 第一章 文献综述 | 第13-22页 |
| 1.1 小麦黄花叶病的研究进展 | 第13-16页 |
| 1.1.1 小麦黄花叶病的生物学特性 | 第13-14页 |
| 1.1.2 小麦黄花叶病毒的传播介体及侵染循环 | 第14-16页 |
| 1.2 小麦黄花叶病毒的分子生物学研究 | 第16-19页 |
| 1.2.1 小麦黄花叶病毒基因组 | 第16-17页 |
| 1.2.2 WYMV编码蛋白的功能 | 第17-19页 |
| 1.3 病毒末端结合蛋白VPg的研究进展 | 第19-21页 |
| 1.3.1 VPg参与病毒复制过程 | 第20页 |
| 1.3.2 VPg参与病毒翻译过程 | 第20页 |
| 1.3.3 VPg可以决定病毒的致病性 | 第20页 |
| 1.3.4 VPg参与病毒的长距离运输 | 第20-21页 |
| 1.4 研究的目的与意义 | 第21-22页 |
| 第二章 材料与方法 | 第22-43页 |
| 2.1 实验材料 | 第22-23页 |
| 2.1.1 植物材料 | 第22页 |
| 2.1.2 载体与细菌菌种 | 第22页 |
| 2.1.3 仪器与试剂 | 第22-23页 |
| 2.2 实验方法 | 第23-43页 |
| 2.2.1 间接ELISA检测 | 第23-24页 |
| 2.2.2 植物总RNA提取 | 第24页 |
| 2.2.3 RT-PCR | 第24-25页 |
| 2.2.4 PCR产物纯化回收 | 第25-26页 |
| 2.2.5 连接与转化 | 第26-27页 |
| 2.2.6 感受态细胞制备 | 第27-28页 |
| 2.2.7 筛选和鉴定重组质粒阳性克隆 | 第28-29页 |
| 2.2.8 质粒DNA提取 | 第29页 |
| 2.2.9 双酶切 | 第29-30页 |
| 2.2.10 载体末端去磷酸化 | 第30-31页 |
| 2.2.11 酚仿抽提与乙醇沉淀 | 第31页 |
| 2.2.12 原核表达体系建立 | 第31-32页 |
| 2.2.13 目的蛋白的大量表达、纯化与回收 | 第32-35页 |
| 2.2.14 Western Blot | 第35-38页 |
| 2.2.15 农杆菌浸润烟草及显微镜观察 | 第38-39页 |
| 2.2.16 原生质体的制备 | 第39-40页 |
| 2.2.17 细胞组分的分级分离 | 第40-41页 |
| 2.2.18 免疫电镜胶体金标记技术 | 第41-43页 |
| 第三章 小麦黄花叶病毒VPg蛋白氨基酸序列特征分析 | 第43-47页 |
| 3.1 材料与方法 | 第43-44页 |
| 3.1.1 实验材料 | 第43页 |
| 3.1.2 WYMV VPg基因克隆与蛋白特征分析 | 第43-44页 |
| 3.2 结果与分析 | 第44-45页 |
| 3.2.1 WYMV VPg蛋白基因克隆 | 第44页 |
| 3.2.2 WYMV VPg蛋白特征分析 | 第44-45页 |
| 3.3 讨论 | 第45-47页 |
| 第四章 WYMV VPg融合蛋白的原核表达与PULL-DOWN实验 | 第47-54页 |
| 4.1 材料与试剂 | 第47页 |
| 4.2 实验方法 | 第47-49页 |
| 4.2.1 原核表达载体构建 | 第47-48页 |
| 4.2.2 GST-VPg融合蛋白诱导表达及检测 | 第48页 |
| 4.2.3 GST和GST-VPg蛋白大量表达纯化 | 第48页 |
| 4.2.4 GST和GST-VPg蛋白的PULL DOWN实验 | 第48页 |
| 4.2.5 Western blotting验证 | 第48页 |
| 4.2.6 双分子荧光互补实验验证 | 第48-49页 |
| 4.3 结果分析与讨论 | 第49-52页 |
| 4.3.1 原核表达载体构建 | 第49-50页 |
| 4.3.2 GST-VPg融合蛋白的小量诱导表达及检测 | 第50页 |
| 4.3.3 GST和GST-VPg蛋白大量表达纯化 | 第50-51页 |
| 4.3.4 GST和GST-VPg蛋白PULL DOWN实验结果 | 第51页 |
| 4.3.5 Western blotting验证 | 第51-52页 |
| 4.3.6 BiFC验证 | 第52页 |
| 4.4 小结与讨论 | 第52-54页 |
| 第五章 WYMV VPg亚细胞定位变化的研究 | 第54-67页 |
| 5.1 材料与试剂 | 第54页 |
| 5.2 实验方法 | 第54-58页 |
| 5.2.1 WYMV VPg亚细胞定位 | 第54-56页 |
| 5.2.2 WYMV VPg蛋白核质穿梭机制研究 | 第56-57页 |
| 5.2.3 VPg蛋白突变体与外壳蛋白CP的相互作用及共表达 | 第57页 |
| 5.2.4 VPg蛋白与病毒粒子的结合关系 | 第57-58页 |
| 5.3 结果分析与讨论 | 第58-65页 |
| 5.3.1 WYMV VPg亚细胞定位 | 第58-61页 |
| 5.3.2 WYMV VPg蛋白核质穿梭机制研究 | 第61-63页 |
| 5.3.3 VPg蛋白突变体与外壳蛋白CP的相互作用及共表达 | 第63-64页 |
| 5.3.4 VPg蛋白与病毒粒子的结合关系 | 第64-65页 |
| 5.4 小结与讨论 | 第65-67页 |
| 第六章 结论与进一步计划 | 第67-69页 |
| 6.1 结论 | 第67-68页 |
| 6.2 进一步计划 | 第68-69页 |
| 参考文献 | 第69-78页 |
| 附录 | 第78-81页 |
| 致谢 | 第81-82页 |
| 攻读硕士期间投稿和发表的学术论文 | 第82-83页 |
