| 摘要 | 第5-7页 |
| ABSTRACT | 第7-9页 |
| 第一章 绪论 | 第13-22页 |
| 1.1 Notch的结构和功能 | 第13-15页 |
| 1.2 Notch与肿瘤的关系 | 第15-18页 |
| 1.2.1 Notch信号与肿瘤的发生 | 第15-16页 |
| 1.2.2 Notch与肿瘤转移 | 第16-17页 |
| 1.2.3 Notch调控肿瘤转移的机制 | 第17-18页 |
| 1.3 Notch与NF-κB的相互作用 | 第18-19页 |
| 1.4 以Notch为靶点的治疗 | 第19-20页 |
| 1.5 本论文的研究意义和内容 | 第20-22页 |
| 第二章 Notch-1 对乳腺癌细胞恶性行为的影响 | 第22-69页 |
| 2.1 引言 | 第22-23页 |
| 2.2 实验材料 | 第23-29页 |
| 2.2.1 细胞 | 第23页 |
| 2.2.2 引物序列 | 第23页 |
| 2.2.3 实验仪器 | 第23-24页 |
| 2.2.4 实验试剂配制 | 第24-29页 |
| 2.3 实验方法 | 第29-45页 |
| 2.3.1 细胞培养 | 第29-30页 |
| 2.3.2 RNA提取 | 第30页 |
| 2.3.3 RT-PCR | 第30-31页 |
| 2.3.4 PCR扩增NICD片段 | 第31-32页 |
| 2.3.5 琼脂糖凝胶电泳 | 第32页 |
| 2.3.6 DNA纯化 | 第32页 |
| 2.3.7 DNA双酶切 | 第32-33页 |
| 2.3.8 DNA连接 | 第33页 |
| 2.3.9 转化 | 第33页 |
| 2.3.10 菌落PCR | 第33-34页 |
| 2.3.11 质粒提取 | 第34页 |
| 2.3.12 细胞转染 | 第34-35页 |
| 2.3.13 Real-time PCR | 第35页 |
| 2.3.14 CCK-8 检测细胞增殖 | 第35页 |
| 2.3.15 细胞周期 | 第35页 |
| 2.3.16 细胞凋亡 | 第35-36页 |
| 2.3.17 软琼脂糖克隆形成 | 第36页 |
| 2.3.18 平板克隆形成实验 | 第36页 |
| 2.3.19 细胞黏附 | 第36-37页 |
| 2.3.20 细胞侵袭 | 第37页 |
| 2.3.21 核蛋白提取 | 第37-38页 |
| 2.3.22 蛋白浓度测定 | 第38页 |
| 2.3.23 划痕实验 | 第38页 |
| 2.3.24 明胶酶谱 | 第38-40页 |
| 2.3.25 Western bolt | 第40-41页 |
| 2.3.26 免疫荧光染色 | 第41-42页 |
| 2.3.27 凝胶阻滞 | 第42-45页 |
| 2.3.28 双荧光素酶报告基因检测 | 第45页 |
| 2.3.29 统计分析 | 第45页 |
| 2.4 实验结果 | 第45-66页 |
| 2.4.1 NICD重组质粒构建 | 第45-51页 |
| 2.4.2 细胞沉默效率鉴定 | 第51-53页 |
| 2.4.3 Notch-1 对细胞增殖的影响 | 第53-55页 |
| 2.4.4 Notch-1 对细胞凋亡的影响 | 第55-56页 |
| 2.4.5 Notch-1 对细胞运动能力的影响 | 第56-60页 |
| 2.4.6 Notch-1 活化上调MMP-2、MMP-9，以及VEGF的表达 | 第60-63页 |
| 2.4.7 Notch-1 活化激活NF-κB信号通路 | 第63-65页 |
| 2.4.8 Notch-1 上调NF-κB下游靶基因的表达 | 第65-66页 |
| 2.5 讨论 | 第66-68页 |
| 2.6 本章小结 | 第68-69页 |
| 第三章 Notch-1 调控NF-κB的机制研究 | 第69-89页 |
| 3.1 引言 | 第69-70页 |
| 3.2 实验材料 | 第70-72页 |
| 3.2.1 细胞 | 第70页 |
| 3.2.2 实验仪器 | 第70页 |
| 3.2.3 实验试剂 | 第70-72页 |
| 3.3 实验方法 | 第72-74页 |
| 3.3.1 细胞侵袭 | 第72页 |
| 3.3.2 Real time PCR | 第72页 |
| 3.3.3 酶联免疫吸附试验(ELISA) | 第72-73页 |
| 3.3.4 Western blot | 第73页 |
| 3.3.5 免疫荧光染色 | 第73页 |
| 3.3.6 双荧光素酶报告基因检测 | 第73页 |
| 3.3.7 核蛋白提取 | 第73-74页 |
| 3.4 实验结果 | 第74-84页 |
| 3.4.1 Notch-1 促进细胞侵袭依赖于NF-κB信号通路 | 第74-79页 |
| 3.4.2 Notch-1 上调MMP-2、MMP-9，VEGF表达依赖NF-κB | 第79-81页 |
| 3.4.3 Notch-1 活化激活PI3K/AKT信号通路 | 第81页 |
| 3.4.4 Notch-1 通过AKT途径激活NF-κB信号通路 | 第81-82页 |
| 3.4.5 Notch-1 通过PP2A调控AKT活性 | 第82页 |
| 3.4.6 Notch-1 通过PP2A调控NF-κB活性 | 第82-84页 |
| 3.5 讨论 | 第84-88页 |
| 3.6 本章小结 | 第88-89页 |
| 第四章 全文结论与展望 | 第89-92页 |
| 4.1 结论 | 第89-90页 |
| 4.2 展望 | 第90-92页 |
| 致谢 | 第92-94页 |
| 参考文献 | 第94-102页 |
| 附录 | 第102-105页 |
| 攻读博士学位期间取得的成果 | 第105-107页 |
