| 摘要 | 第6-7页 |
| ABSTRACT | 第7-8页 |
| 文献综述 | 第12-16页 |
| 第一章 干扰素诱导跨膜蛋白的研究进展 | 第12-16页 |
| 1.1 IFITM家族简介 | 第12页 |
| 1.2 IFITM结构 | 第12-13页 |
| 1.3 IFITM的功能 | 第13-14页 |
| 1.3.1 IFITM蛋白的抗病毒作用 | 第13-14页 |
| 1.3.2 IFITM蛋白具有抗癌作用 | 第14页 |
| 1.3.3 IFITM调控细胞的生长和分化 | 第14页 |
| 1.4 展望 | 第14页 |
| 1.5 本研究目的及意义 | 第14-16页 |
| 试验研究 | 第16-54页 |
| 第二章 猪干扰素诱导跨膜蛋白基因的克隆 | 第16-28页 |
| 2.1 材料 | 第16-17页 |
| 2.1.1 载体和菌种 | 第16页 |
| 2.1.2 试验耗材 | 第16页 |
| 2.1.3 主要试剂 | 第16页 |
| 2.1.4 主要仪器 | 第16-17页 |
| 2.2 方法 | 第17-22页 |
| 2.2.1 引物设计与合成 | 第17页 |
| 2.2.2 淋巴细胞总RNA的提取 | 第17-18页 |
| 2.2.3 目的基因的扩增 | 第18-19页 |
| 2.2.4 琼脂糖凝胶电泳 | 第19-20页 |
| 2.2.5 目的DNA片段回收 | 第20页 |
| 2.2.6 目的基因与T载体的连接 | 第20页 |
| 2.2.7 pMD18-T-IFITM重组质粒转化 | 第20-21页 |
| 2.2.8 克隆筛选与鉴定 | 第21-22页 |
| 2.2.9 目的基因测序与序列分析 | 第22页 |
| 2.3 结果与分析 | 第22-27页 |
| 2.3.1 猪IFITM PCR扩增 | 第22-23页 |
| 2.3.2 菌液PCR鉴定 | 第23页 |
| 2.3.3 测序结果分析 | 第23-27页 |
| 2.4 讨论 | 第27页 |
| 2.5 小结 | 第27-28页 |
| 第三章 IFITM原核表达载体的构建与诱导表达 | 第28-41页 |
| 3.1 材料 | 第28-29页 |
| 3.1.1 载体、菌种、抗体 | 第28页 |
| 3.1.2 主要试剂 | 第28页 |
| 3.1.3 主要仪器 | 第28-29页 |
| 3.2 方法 | 第29-35页 |
| 3.2.1 引物的设计与合成 | 第29页 |
| 3.2.2 质粒的提取 | 第29页 |
| 3.2.3 PCR扩增目的片段 | 第29-30页 |
| 3.2.4 目的DNA片段回收 | 第30页 |
| 3.2.5 双酶切反应 | 第30页 |
| 3.2.6 原核表达载体与目的基因的连接及转化 | 第30-31页 |
| 3.2.7 重组载体的筛选与鉴定 | 第31页 |
| 3.2.8 重组载体转化表达感受态细胞（BL21） | 第31-32页 |
| 3.2.9 加入诱导剂诱导表达 | 第32页 |
| 3.2.10 菌体裂解 | 第32页 |
| 3.2.11 表达产物SDS-PAGE分析 | 第32-34页 |
| 3.2.12 Western blot检测 | 第34-35页 |
| 3.3 结果与分析 | 第35-39页 |
| 3.3.1 PCR扩增目的基因 | 第35页 |
| 3.3.2 重组质粒pColdⅠ-IFITM菌液PCR与双酶切鉴定 | 第35-37页 |
| 3.3.3 重组质粒pColdⅠ-IFITM原核表达产物的SDS-PAGE检测结果 | 第37-39页 |
| 3.3.4 原核表达产物的Western－blot检测 | 第39页 |
| 3.4 讨论 | 第39-40页 |
| 3.5 小结 | 第40-41页 |
| 第四章 IFITM多克隆抗体制备及抗体效价检测 | 第41-48页 |
| 4.1 材料 | 第41-42页 |
| 4.1.1 菌株、试验动物 | 第41页 |
| 4.1.2 耗材 | 第41页 |
| 4.1.3 试剂 | 第41页 |
| 4.1.4 主要仪器 | 第41-42页 |
| 4.2 方法 | 第42-44页 |
| 4.2.1 目的蛋白的大量诱导 | 第42页 |
| 4.2.2 菌体超声 | 第42页 |
| 4.2.3 纯化 | 第42-43页 |
| 4.2.4 多克隆抗体的制备 | 第43页 |
| 4.2.5 间接ELISA检测抗体效价 | 第43-44页 |
| 4.3 结果与分析 | 第44-46页 |
| 4.3.1 蛋白纯化结果 | 第44-45页 |
| 4.3.2 间接ELISA检测抗体效价 | 第45-46页 |
| 4.4 讨论 | 第46-47页 |
| 4.4.1 蛋白纯化 | 第46-47页 |
| 4.4.2 多克隆抗体 | 第47页 |
| 4.4.3 间接ELISA检测 | 第47页 |
| 4.5 小结 | 第47-48页 |
| 第五章 PRRSV感染对猪不同组织IFITM基因表达的影响 | 第48-54页 |
| 5.1 材料 | 第48-49页 |
| 5.1.1 组织来源 | 第48页 |
| 5.1.2 试剂 | 第48页 |
| 5.1.3 耗材 | 第48页 |
| 5.1.4 主要仪器 | 第48-49页 |
| 5.2 方法 | 第49-50页 |
| 5.2.1 总RNA的提取 | 第49页 |
| 5.2.2 反转录 | 第49页 |
| 5.2.3 引物的设计与合成 | 第49-50页 |
| 5.2.4 Real-time PCR反应 | 第50页 |
| 5.2.5 数据分析 | 第50页 |
| 5.3 结果与分析 | 第50-52页 |
| 5.3.1 猪各组织提取RNA检测 | 第50-51页 |
| 5.3.2 猪各组织IFITM基因的表达 | 第51-52页 |
| 5.4 讨论 | 第52-53页 |
| 5.4.1 实时荧光定量PCR | 第52页 |
| 5.4.2 猪IFITM基因在不同组织中的表达 | 第52-53页 |
| 5.5 小结 | 第53-54页 |
| 总结 | 第54-55页 |
| 参考文献 | 第55-58页 |
| 附录1 试剂的配制 | 第58-63页 |
| 附录2 载体图谱 | 第63-64页 |
| 缩略词 | 第64-65页 |
| 致谢 | 第65-66页 |
| 作者简介 | 第66页 |
