| 摘要 | 第3-5页 |
| Abstract | 第5-6页 |
| 引言 | 第10-11页 |
| 1 文献综述 | 第11-21页 |
| 1.1 兼职功能蛋白 | 第11-12页 |
| 1.1.1 兼职功能蛋白转换功能的机制 | 第11页 |
| 1.1.2 兼职功能蛋白的意义 | 第11-12页 |
| 1.2 天冬氨酸氨基转移酶 | 第12-14页 |
| 1.2.1 概述 | 第12页 |
| 1.2.2 性质及功能 | 第12-13页 |
| 1.2.3 临床意义 | 第13页 |
| 1.2.4 天冬氨酸氨基转移酶研究现状 | 第13-14页 |
| 1.3 人线粒体天冬氨酸氨基转移酶 | 第14-16页 |
| 1.3.1 天冬氨酸氨基转移功能 | 第15页 |
| 1.3.2 犬尿氨酸转氨功能 | 第15页 |
| 1.3.3 长链脂肪酸结合功能 | 第15-16页 |
| 1.3.4 人线粒体天冬氨酸氨基转移酶功能异常 | 第16页 |
| 1.4 蛋白质结晶 | 第16-18页 |
| 1.4.1 蛋白质结晶原理 | 第17页 |
| 1.4.2 蛋白质结晶方法 | 第17页 |
| 1.4.3 提高蛋白质晶体质量方法 | 第17-18页 |
| 1.5 X射线晶体学 | 第18-20页 |
| 1.5.1 X射线晶体学的发展 | 第19页 |
| 1.5.2 蛋白质三维结构测定方法 | 第19-20页 |
| 1.6 选题依据和研究内容 | 第20-21页 |
| 1.6.1 选题依据 | 第20页 |
| 1.6.2 研究内容 | 第20-21页 |
| 2 人线粒体天冬氨酸氨基转移酶的重组制备及性质分析 | 第21-35页 |
| 2.1 引言 | 第21页 |
| 2.2 实验材料与方法 | 第21-26页 |
| 2.2.1 实验材料 | 第21-22页 |
| 2.2.2 酶的克隆与表达 | 第22-23页 |
| 2.2.3 酶的分离与纯化 | 第23-24页 |
| 2.2.4 SDS-PAGE、Western Blot分析 | 第24页 |
| 2.2.5 酶的性质分析 | 第24-26页 |
| 2.3 实验结果与分析 | 第26-34页 |
| 2.3.1 表达载体pET22b-hmAspAT提取结果 | 第26-27页 |
| 2.3.2 PCR检菌 | 第27页 |
| 2.3.3 重组蛋白诱导表达后的结果分析 | 第27-28页 |
| 2.3.4 镍离子金属螯合亲和层析后样品的SDS-PAGE电泳分析结果 | 第28-29页 |
| 2.3.5 纯化时各样品的酶活性测定 | 第29-30页 |
| 2.3.6 阳离子交换层析后样品的SDS-PAGE电泳分析结果 | 第30-31页 |
| 2.3.7 人线粒体型天冬氨酸氨基转移酶的最适温度 | 第31-32页 |
| 2.3.8 人线粒体型天冬氨酸氨基转移酶的最适pH值 | 第32页 |
| 2.3.9 各分离步骤的蛋白浓度及纯化表 | 第32-34页 |
| 2.4 本章小结 | 第34-35页 |
| 3 人线粒体天冬氨酸氨基转移酶的结晶研究 | 第35-44页 |
| 3.1 引言 | 第35-36页 |
| 3.2 实验材料与方法 | 第36-38页 |
| 3.2.1 实验材料 | 第36页 |
| 3.2.2 蛋白质结晶方法的确定 | 第36页 |
| 3.2.3 蛋白质浓度及蛋白质溶解缓冲液的确定 | 第36-37页 |
| 3.2.4 蛋白质结晶条件的初筛及优化 | 第37页 |
| 3.2.5 蛋白质晶体的观察 | 第37页 |
| 3.2.6 蛋白质晶体保护剂的配制 | 第37页 |
| 3.2.7 蛋白质晶体的捞取及保存 | 第37-38页 |
| 3.3 实验结果与分析 | 第38-43页 |
| 3.3.1 确定适于结晶的蛋白质浓度及缓冲液 | 第38-39页 |
| 3.3.2 蛋白质结晶条件的初步筛选结果 | 第39-42页 |
| 3.3.3 蛋白质结晶条件多次优化的结果 | 第42-43页 |
| 3.4 本章小结 | 第43-44页 |
| 4 人线粒体天冬氨酸氨基转移酶晶体X射线衍射及结构分析 | 第44-52页 |
| 4.1 引言 | 第44-45页 |
| 4.2 实验材料与方法 | 第45页 |
| 4.2.1 实验材料 | 第45页 |
| 4.2.2 X射线衍射 | 第45页 |
| 4.2.3 蛋白质晶体结构分析 | 第45页 |
| 4.3 实验结果与分析 | 第45-51页 |
| 4.3.1 X射线衍射图 | 第45-46页 |
| 4.3.2 X射线衍射获得数据 | 第46页 |
| 4.3.3 人线粒体天冬氨酸氨基转移酶晶体结构 | 第46-51页 |
| 4.4 本章小结 | 第51-52页 |
| 结论 | 第52-54页 |
| 参考文献 | 第54-59页 |
| 附录A 常用仪器一览表 | 第59-60页 |
| 附录B 大肠杆菌转化 | 第60-61页 |
| 附录C Western Blot | 第61-62页 |
| 攻读硕士学位期间发表学术论文情况 | 第62-63页 |
| 致谢 | 第63-64页 |
