| 摘要 | 第4-6页 |
| Abstract | 第6-7页 |
| 引言 | 第11-12页 |
| 1 绪论动物毒素来源及人工合成RGD肽的研究进展 | 第12-20页 |
| 1.1 动物毒素RGD肽 | 第12-16页 |
| 1.1.1 动物毒素RGD肽的来源 | 第12-15页 |
| 1.1.2 动物毒素来源RGD肽的结构特征及其所处微环境 | 第15-16页 |
| 1.2 人工合成的RGD肽 | 第16-17页 |
| 1.3 RGD的功能 | 第17-19页 |
| 1.3.1 RGD与αIIbβ3 参与的血小板聚集和血栓形成 | 第17-18页 |
| 1.3.2 RGD与抗血管新生 | 第18页 |
| 1.3.3 RGD肽与肿瘤转移 | 第18-19页 |
| 1.4 小结 | 第19-20页 |
| 2 去纯化标签的Lj-RGD4的分子克隆、诱导表达及纯化工艺 | 第20-35页 |
| 2.1 材料 | 第20页 |
| 2.1.1 主要试剂 | 第20页 |
| 2.1.2 主要仪器 | 第20页 |
| 2.2 方法 | 第20-27页 |
| 2.2.1 rLj-RGD4基因的来源 | 第20-21页 |
| 2.2.2 去纯化His标签的Lj-RGD4基因的分子克隆 | 第21-22页 |
| 2.2.3 重组质粒转化入E.coli BL21表达菌 | 第22页 |
| 2.2.4 重组rLj-RGD4（tag-）的诱导表达及纯化 | 第22-24页 |
| 2.2.5 纯化蛋白的Tricine-SDS PAGE电泳 | 第24-25页 |
| 2.2.6 蛋白质生物信息学分析 | 第25页 |
| 2.2.7 rLj-RGD4蛋白的N-端测序 | 第25-26页 |
| 2.2.8 考马斯亮蓝(G-250)法测定rLj-RGD4蛋白浓度 | 第26-27页 |
| 2.3 结果 | 第27-34页 |
| 2.3.1 rLj-RGD4基因的设计思路及生物信息学分析 | 第27-28页 |
| 2.3.2 rLj-RGD4基因的人工合成与克隆 | 第28-31页 |
| 2.3.3 rLj-RGD4(tag-)蛋白的诱导表达与纯化 | 第31-33页 |
| 2.3.4 rLj-RGD4蛋白N-端测序结果 | 第33-34页 |
| 2.3.5 绘制蛋白标准曲线并测量所得蛋白浓度 | 第34页 |
| 2.4 讨论 | 第34页 |
| 2.5 结论 | 第34-35页 |
| 3 重组突变体小肽rLj-RGD4对小鼠黑色素瘤B16细胞生物活性及部分机制的研究 | 第35-65页 |
| 3.1 材料 | 第35页 |
| 3.1.1 主要试剂 | 第35页 |
| 3.1.2 主要仪器 | 第35页 |
| 3.2 方法 | 第35-40页 |
| 3.2.1 MTT法检测rLj-RGD4蛋白对B16细胞增殖的影响 | 第35-36页 |
| 3.2.2 rLj-RGD4蛋白对B16细胞黏附的影响 | 第36页 |
| 3.2.3 划痕实验检测rLj-RGD4蛋白对B16细胞迁移的影响 | 第36页 |
| 3.2.4 Tranwell法检测rLj-RGD4蛋白对B16细胞迁移的影响 | 第36-37页 |
| 3.2.5 Tranwell法检测rLj-RGD4蛋白对B16细胞浸润的影响 | 第37页 |
| 3.2.6 Hoechst 33258 检测rLj-RGD4蛋白对B16细胞凋亡的影响 | 第37-38页 |
| 3.2.7 TUNEL法检测rLj-RGD4蛋白对B16细胞凋亡的影响 | 第38页 |
| 3.2.8 鬼笔环肽检测rLj-RGD4蛋白对B16细胞骨架的影响 | 第38-39页 |
| 3.2.9 Western Blot检测rLj-RGD4蛋白对凋亡相关蛋白caspase-3 和Bcl-2 表达的影响 | 第39页 |
| 3.2.10 结果统计 | 第39-40页 |
| 3.3 结果 | 第40-63页 |
| 3.3.1 rLj-RGD4蛋白对bFGF诱导的B16细胞增殖的抑制作用 | 第40-41页 |
| 3.3.2 rLj-RGD4蛋白对B16细胞黏附于细胞外基质蛋白的抑制作用 | 第41页 |
| 3.3.3 rLj-RGD4蛋白对bFGF诱导的B16细胞迁移的抑制作用 | 第41-50页 |
| 3.3.4 rLj-RGD4蛋白对bFGF诱导下B16细胞浸润的抑制作用 | 第50-53页 |
| 3.3.5 rLj-RGD4蛋白对bFGF诱导下的B16细胞凋亡的作用 | 第53-59页 |
| 3.3.5.1 Hoechst33258检测rLj-RGD4对B16细胞凋亡的影响 | 第53-56页 |
| 3.3.5.2 TUNEL法检测rLj-RGD4对B16细胞凋亡的影响 | 第56-59页 |
| 3.3.6 rLj-RGD4蛋白对B16细胞骨架的破坏作用 | 第59-61页 |
| 3.3.7 rLj-RGD4蛋白对B16细胞凋亡通路中关键分子Caspase-3 和Bcl-2 的影响 | 第61-63页 |
| 3.3.7.1 rLj-RGD4蛋白对Caspase-3 表达和激活的影响 | 第61-62页 |
| 3.3.7.2 rLj-RGD4蛋白对B淋巴细胞瘤-2 基因(B-cell lymphoma-2,Bcl-2)表达的影响 | 第62-63页 |
| 3.4 讨论 | 第63-64页 |
| 3.5 结论 | 第64-65页 |
| 本论文的创新点 | 第65-66页 |
| 展望及今后需要研究的问题 | 第66-67页 |
| 参考文献 | 第67-71页 |
| 攻读硕士学位期间发表学术论文情况 | 第71-72页 |
| 致谢 | 第72页 |
