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番茄SlNAC4和SlDEAD31基因在果实成熟及非生物胁迫响应中的功能研究

中文摘要第3-6页
英文摘要第6-9页
缩略词表第15-18页
1 绪论第18-60页
    1.1 乙烯与番茄果实成熟调控第18-32页
        1.1.1 乙烯的生理功能第20-21页
        1.1.2 乙烯的生物合成及调控第21-23页
        1.1.3 乙烯的信号转导途径第23-27页
        1.1.4 番茄果实成熟相关突变体第27-29页
        1.1.5 果实成熟的信号调控模型第29-30页
        1.1.6 番茄果实成熟过程中的色素代谢第30-32页
    1.2 NAC转录因子家族的研究进展第32-44页
        1.2.1 NAC转录因子的命名及其家族成员第33页
        1.2.2 NAC转录因子的结构与分类第33-35页
        1.2.3 NAC转录因子的功能第35-41页
        1.2.4 NAC转录因子的表达调控第41-42页
        1.2.5 番茄中NAC转录因子的研究进展第42-43页
        1.2.6 展望第43-44页
    1.3 DEAD-box解螺酶的研究进展第44-55页
        1.3.1 解旋酶的分类与结构第45-47页
        1.3.2 DEAD-box解旋酶的发现与分类第47-48页
        1.3.3 DEAD-box解旋酶在植物中的功能研究进展第48-52页
        1.3.4 解旋酶参与胁迫响应的机制及其表达调控第52-54页
        1.3.5 展望第54-55页
    1.4 课题的提出及研究意义第55-56页
    1.5 课题的研究内容、技术路线及创新点第56-60页
        1.5.1 课题的研究内容第56-58页
        1.5.2 课题的技术路线第58-59页
        1.5.3 课题的创新点第59-60页
2 番茄NAC基因的筛选与表达分析第60-88页
    2.1 引言第60页
    2.2 材料、试剂与设备第60-61页
        2.2.1 材料第60页
        2.2.2 试剂及药品第60-61页
        2.2.3 仪器与设备第61页
    2.3 实验方法第61-68页
        2.3.1 番茄材料的收集第61-62页
        2.3.2 番茄NAC基因的生物信息学分析第62-63页
        2.3.3 总RNA的提取第63-64页
        2.3.4 c DNA的合成第64页
        2.3.5 番茄NAC基因的引物设计及评估第64-66页
        2.3.6 番茄 NAC 基因的组织表达模式分析第66-67页
        2.3.7 番茄NAC基因响应非生物胁迫的表达模式分析第67页
        2.3.8 番茄NAC基因响应激素处理的表达模式分析第67-68页
    2.4 结果与分析第68-84页
        2.4.1 番茄SlNAC基因的核苷酸及蛋白序列生物信息学分析第68-72页
        2.4.2 番茄SlNAC4-SlNAC10 基因的定量引物设计与评估第72-73页
        2.4.3 番茄SlNAC4-SlNAC10 基因的组织表达模式分析第73-75页
        2.4.4 番茄SlNAC4-SlNAC10 基因的激素处理表达模式分析第75-77页
        2.4.5 番茄SlNAC4-SlNAC10 基因的非生物胁迫处理表达模式分析第77-82页
        2.4.6 番茄SlNAC4-SlNAC10 基因的启动子序列分析第82-84页
    2.5 讨论第84-86页
    2.6 本章小结第86-88页
3 SlNAC4 基因的功能研究第88-144页
    3.1 引言第88页
    3.2 材料、试剂与设备第88-100页
        3.2.1 材料第88-91页
        3.2.2 试剂与培养基第91-99页
        3.2.3 仪器与设备第99-100页
    3.3 实验方法第100-119页
        3.3.1 番茄材料的收集第100页
        3.3.2 总RNA的提取及c DNA的合成第100页
        3.3.3 基因组DNA的提取第100页
        3.3.4 SlNAC4 基因的克隆第100-103页
        3.3.5 SlNAC4 基因超表达载体的构建第103-105页
        3.3.6 SlNAC4 基因RNAi沉默载体的构建第105-108页
        3.3.7 双元质粒的农杆菌结合转移第108页
        3.3.8 农杆菌LBA4404 介导的番茄转基因第108-110页
        3.3.9 SlNAC4 基因超表达和沉默阳性转基因番茄株系的筛选第110页
        3.3.10 超表达和沉默转基因番茄株系SlNAC4 基因表达水平检测第110页
        3.3.11 果实总叶绿素及类胡萝卜素的提取第110-111页
        3.3.12 果实乙烯合成量的测定第111页
        3.3.13 定量PCR分析转基因对成熟相关基因表达的影响第111-113页
        3.3.14 SlNAC4 蛋白与RIN及NOR蛋白的互作研究第113-117页
        3.3.15 SlNAC4 转基因株系的盐胁迫耐受性分析第117页
        3.3.16 SlNAC4 转基因株系的干旱胁迫耐受性分析第117页
        3.3.17 SlNAC4 转基因株系胁迫情况下各生理指标的测定第117-118页
        3.3.18 定量Real-time PCR分析转基因对胁迫相关基因表达的影响第118-119页
    3.4 结果与分析第119-137页
        3.4.1 SlNAC4 基因超表达和RNAi沉默载体的构建第119-120页
        3.4.2 SlNAC4 转基因番茄苗系的培育与筛选第120-123页
        3.4.3 SlNAC4 基因的沉默抑制了番茄果实的正常成熟第123-124页
        3.4.4 SlNAC4 基因的沉默改变了果实色素含量及相关基因的表达第124-127页
        3.4.5 SlNAC4 基因的沉默抑制了乙烯的合成及乙烯相关基因的表达第127-129页
        3.4.6 SlNAC4 基因的沉默影响了成熟相关基因的表达第129-130页
        3.4.7 SlNAC4 蛋白与RIN、NOR蛋白的互作研究第130-131页
        3.4.8 SlNAC4 基因的沉默减少了番茄对盐胁迫的耐受性第131-134页
        3.4.9 SlNAC4 基因的沉默抑制了胁迫相关基因的表达第134-135页
        3.4.10 SlNAC4 基因的沉默减少了番茄对干旱胁迫的耐受性第135-137页
    3.5 讨论第137-142页
        3.5.1 SlNAC4 基因在番茄果实成熟中的功能第137-139页
        3.5.2 SlNAC4 基因在非生物胁迫响应中的功能第139-142页
    3.6 本章小结第142-144页
4 SlDEAD31 基因的功能研究第144-174页
    4.1 引言第144页
    4.2 材料、设备与试剂第144页
        4.2.1 材料第144页
        4.2.2 试剂与培养基第144页
        4.2.3 仪器与设备第144页
    4.3 实验方法第144-151页
        4.3.1 番茄材料的收集第144-145页
        4.3.2 番茄材料总RNA的提取及c DNA的合成第145页
        4.3.3 SlDEAD30 和SlDEAD31 基因的生物信息学分析第145页
        4.3.4 SlDEAD30 和SlDEAD31 基因的引物设计及评估第145-146页
        4.3.5 SlDEAD30 和SlDEAD31 基因的表达模式分析第146页
        4.3.6 SlDEAD30 和SlDEAD31 基因响应非生物胁迫和激素的表达模式分析第146页
        4.3.7 SlDEAD30 和SlDEAD31 基因的克隆第146页
        4.3.8 SlDEAD31 基因超表达载体的构建第146-148页
        4.3.9 SlDEAD31 基因沉默载体的构建第148-150页
        4.3.10 农杆菌LBA4404 介导的番茄转基因及阳性转基因株系的筛选第150-151页
        4.3.11 超表达转基因株系Sl DEAD31 基因的表达水平检测第151页
        4.3.12 SlDEAD31 转基因株系的盐胁迫耐受性分析第151页
        4.3.13 SlDEAD31 转基因株系的干旱胁迫耐受性分析第151页
        4.3.14 SlDEAD31 转基因株系胁迫情况下各生理指标的测定第151页
        4.3.15 定量Real-time PCR分析转基因对胁迫相关基因表达的影响第151页
    4.4 结果与分析第151-168页
        4.4.1 DEAD-box解旋酶蛋白序列的生物信息学分析第151-155页
        4.4.2 SlDEAD30 和SlDEAD31 基因的定量引物设计与评估第155页
        4.4.3 SlDEAD30 和SlDEAD31 基因的组织表达模式分析第155-156页
        4.4.4 SlDEAD30 和SlDEAD31 基因的激素处理表达模式分析第156-157页
        4.4.5 SlDEAD30 和SlDEAD31 基因的非生物胁迫处理表达模式分析第157-158页
        4.4.6 DEAD-box基因的进化树及功能分析第158-159页
        4.4.7 SlDEAD31 基因超表达和RNAi沉默载体的构建第159-160页
        4.4.8 SlDEAD31 转基因番茄苗系的培育与筛选第160-162页
        4.4.9 SlDEAD31 基因的超表达增强了番茄对盐胁迫的耐受性第162-165页
        4.4.10 SlDEAD31 基因超表达影响了胁迫相关基因的表达第165-167页
        4.4.11 SlDEAD31 基因的超表达增强了番茄对干旱胁迫的耐受性第167-168页
    4.5 讨论第168-172页
        4.5.1 SlDEAD31 基因在非生物胁迫响应中的功能第169-170页
        4.5.2 SlDEAD31 可能参与调控多个胁迫相关基因的表达第170-172页
    4.6 本章小结第172-174页
5 结论与展望第174-178页
    5.1 主要结论第174-176页
    5.2 展望第176-178页
致谢第178-180页
参考文献第180-206页
附录第206-208页
    A. 作者在攻读博士学位期间研究的其他工作第206页
    B. 作者在攻读博士学位期间发表的论文目录第206-207页
    C. 作者在攻读博士学位期间发明的专利第207-208页
    D. 作者在攻读博士学位期间主持和参与的科研项目第208页
    E. 作者在攻读博士学位期间所获奖项第208页

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