| 摘要 | 第1-4页 |
| Abstract | 第4-12页 |
| 引言 | 第12-23页 |
| 1 包拉米虫的病原学 | 第12-16页 |
| ·包拉米虫的种类及分布 | 第12-13页 |
| ·牡蛎包拉米虫的分类学地位 | 第13页 |
| ·牡蛎包拉米虫的形态特征 | 第13-14页 |
| ·牡蛎包拉米虫的病理变化 | 第14页 |
| ·牡蛎包拉米虫的生活史 | 第14页 |
| ·牡蛎包拉米虫的流行病学及危害 | 第14-15页 |
| ·牡蛎包拉米虫的防治 | 第15-16页 |
| 2 牡蛎包拉米虫检测方法的研究进展 | 第16-21页 |
| ·牡蛎包拉米虫形态学的检测方法 | 第17-18页 |
| ·虫体浓缩法 | 第17页 |
| ·组织病理切片技术 | 第17页 |
| ·组织印记法 | 第17-18页 |
| ·组织细胞学方法 | 第18页 |
| ·电镜技术 | 第18页 |
| ·牡蛎包拉米虫免疫学的检测方法 | 第18-19页 |
| ·牡蛎包拉米虫分子生物学的检测方法 | 第19-21页 |
| ·PCR 技术 | 第19页 |
| ·PCR-RFLP 技术 | 第19-20页 |
| ·实时荧光定量PCR 技术 | 第20页 |
| ·原位杂交技术 | 第20-21页 |
| 3 本研究的目的与意义 | 第21-23页 |
| 实验部分 | 第23-56页 |
| 研究一 包拉米虫病原学检测方法的建立 | 第23-29页 |
| 1 材料与方法 | 第23-25页 |
| ·材料 | 第23-24页 |
| ·材料来源 | 第23页 |
| ·主要试剂 | 第23页 |
| ·主要设备与耗材 | 第23页 |
| ·主要溶液的配制 | 第23-24页 |
| ·方法 | 第24-25页 |
| ·牡蛎血涂片的制备 | 第24页 |
| ·牡蛎组织印记的制备 | 第24-25页 |
| ·牡蛎样品石蜡切片的制备 | 第25页 |
| 2 结果 | 第25-27页 |
| ·牡蛎血涂片及组织印记的观察 | 第25-26页 |
| ·石蜡切片观察的结果 | 第26-27页 |
| 3 讨论 | 第27-29页 |
| 研究二 包拉米虫PCR 及酶切分析(PCR-RFLP)检测方法的建立 | 第29-39页 |
| 1 材料与方法 | 第29-35页 |
| ·材料 | 第29-30页 |
| ·牡蛎样品 | 第29页 |
| ·仪器和试剂 | 第29-30页 |
| ·培养基的配制 | 第30页 |
| ·主要溶液的配制 | 第30页 |
| ·方法 | 第30-35页 |
| ·样品基因组DNA 的提取 | 第30-31页 |
| ·包拉米虫PCR 检测方法的建立 | 第31-32页 |
| ·包拉米虫克隆鉴定 | 第32-34页 |
| ·包拉米虫PCR 扩增产物的酶切分析(PCR-RFLP) | 第34-35页 |
| 2 结果 | 第35-37页 |
| ·包拉米虫PCR 检测结果 | 第35页 |
| ·PCR 扩增产物测序结果 | 第35-36页 |
| ·阳性克隆PCR 鉴定结果 | 第36页 |
| ·重组质粒序列测定结果 | 第36-37页 |
| ·包拉米虫PCR 扩增产物的酶切分析(PCR-RFLP)结果 | 第37页 |
| 3 讨论 | 第37-39页 |
| 研究三 包拉米虫原位杂交(IN-SITU HYBRIDIZATION ISH)检测方法的建立 | 第39-44页 |
| 1 实验材料与方法 | 第39-41页 |
| ·材料 | 第39-40页 |
| ·材料来源 | 第39页 |
| ·主要仪器和耗材 | 第39页 |
| ·主要试剂 | 第39-40页 |
| ·方法 | 第40-41页 |
| ·地高辛试剂盒标记DNA 探针的制备 | 第40页 |
| ·效率标记的测定 | 第40-41页 |
| ·包拉米虫石蜡切片原位杂交 | 第41页 |
| 2 结果 | 第41-42页 |
| ·探针的制备及效率标记结果 | 第41-42页 |
| ·包拉米虫石蜡切片原位杂交的结果 | 第42页 |
| 3 讨论 | 第42-44页 |
| 研究四 包拉米虫TAQMAN探针荧光PCR 方法的建立 | 第44-56页 |
| 1 材料与方法 | 第44-46页 |
| ·材料 | 第44页 |
| ·材料来源 | 第44页 |
| ·试剂和仪器 | 第44页 |
| ·方法 | 第44-46页 |
| ·TAQMAN 荧光PCR 方法引物和探针的设计 | 第44-45页 |
| ·TAQMAN 荧光PCR 方法反应条件的建立及优化 | 第45页 |
| ·TAQMAN 荧光PCR 方法灵敏度的检测 | 第45页 |
| ·TAQMAN 荧光PCR 方法特异性的检测 | 第45-46页 |
| ·包拉米虫TAQMAN荧光PCR 检测方法敏感性和特异性的检测 | 第46页 |
| 2 结果 | 第46-53页 |
| ·TAQMAN 荧光PCR 反应体系的优化结果 | 第46-51页 |
| ·MG504浓度的优化结果 | 第46-47页 |
| ·探针浓度的优化结果 | 第47页 |
| ·引物浓度的优化结果 | 第47-48页 |
| ·DNTP 浓度的优化结果 | 第48-49页 |
| ·RTAQ 酶浓度的优化结果 | 第49页 |
| ·温度的优化结果 | 第49-50页 |
| ·优化反应条件和反应体系后建立荧光PCR 检测方法 | 第50-51页 |
| ·反应灵敏度的检测结果 | 第51页 |
| ·反应标准曲线的结果 | 第51-52页 |
| ·反应特异性的检测结果 | 第52-53页 |
| ·包拉米虫TAQMAN荧光PCR 检测方法敏感性和特异性的检测结果 | 第53页 |
| 3 讨论 | 第53-56页 |
| 结论 | 第56-57页 |
| 致谢 | 第57-58页 |
| 参考文献 | 第58-64页 |
| 作者简介 | 第64页 |
