| 摘要 | 第4-6页 |
| ABSTRACT | 第6-7页 |
| 缩写词 | 第8-12页 |
| 1 前言 | 第12-26页 |
| 1.1 植物干旱相关基因的研究进展 | 第12-16页 |
| 1.2 转录组测序（RNA-seq） | 第16-21页 |
| 1.2.1 转录组的定义 | 第16页 |
| 1.2.2 RNA-seq的基本原理 | 第16-17页 |
| 1.2.3 RNA-seq的优势 | 第17页 |
| 1.2.4 RNA-Seq的研究现状 | 第17-20页 |
| 1.2.5 RNA-Seq在耐旱基因发掘中的应用 | 第20-21页 |
| 1.2.6 RNA-seq面临的挑战 | 第21页 |
| 1.3 FOX hunting system和Gateway技术 | 第21-23页 |
| 1.3.1 FOX hunting system | 第21-22页 |
| 1.3.2 Gateway技术 | 第22-23页 |
| 1.4 本研究目的与意义 | 第23-26页 |
| 2 材料与方法 | 第26-40页 |
| 2.1 材料 | 第26-27页 |
| 2.1.1 植物材料 | 第26页 |
| 2.1.2 质粒与载体图谱 | 第26-27页 |
| 2.2 常用仪器 | 第27页 |
| 2.3 实验试剂与药品 | 第27-31页 |
| 2.3.1 实验试剂 | 第27-28页 |
| 2.3.2 引物 | 第28-29页 |
| 2.3.3 实验溶液的配制 | 第29-30页 |
| 2.3.4 常用抗生素溶液的配制 | 第30页 |
| 2.3.5 常用培养基的配制 | 第30-31页 |
| 2.4 基础实验方法 | 第31-34页 |
| 2.4.1 实验材料的处理 | 第31页 |
| 2.4.2 油菜总RNA的提取 | 第31-32页 |
| 2.4.3 电转感受态的制备与转化 | 第32-33页 |
| 2.4.4 Floral-dip法转化拟南芥 | 第33-34页 |
| 2.5 RNA-seq流程及数据处理 | 第34-35页 |
| 2.5.1 RNA-seq流程 | 第34-35页 |
| 2.5.2 RNA-seq数据处理过程 | 第35页 |
| 2.6 油菜差异基因的筛选 | 第35-36页 |
| 2.7 文库构建 | 第36-37页 |
| 2.7.1 目的基因全长cDNA克隆 | 第36页 |
| 2.7.2 入门文库和植物表达文库构建 | 第36-37页 |
| 2.7.3 油菜FOX拟南芥文库的构建 | 第37页 |
| 2.8 转基因材料筛选鉴定 | 第37-38页 |
| 2.8.1 T0代转基因植株的筛选与鉴定 | 第37-38页 |
| 2.8.2 T1代FOX植株的胁迫筛选 | 第38页 |
| 2.9 油菜的遗传转化与筛选 | 第38-40页 |
| 3 结果分析 | 第40-56页 |
| 3.1 RNA-Seq结果 | 第40-45页 |
| 3.1.1 Illumina测序以及从头组装 | 第40-41页 |
| 3.1.2 EST-SSR标记的开发 | 第41-42页 |
| 3.1.3 GO和COG功能分类 | 第42-44页 |
| 3.1.4 KEGG通路分析 | 第44页 |
| 3.1.5 差异表达基因的鉴定 | 第44-45页 |
| 3.2 基因克隆与文库构建 | 第45-48页 |
| 3.2.1 油菜潜在抗旱基因的获得 | 第45-46页 |
| 3.2.2 潜在抗旱相关基因cDNA的克隆 | 第46页 |
| 3.2.3 cDNA文库和植物表达文库的构建 | 第46-47页 |
| 3.2.4 农杆菌文库构建 | 第47-48页 |
| 3.3 油菜FOX拟南芥突变体库构建 | 第48页 |
| 3.4 FOX拟南芥突变体库的筛选 | 第48-53页 |
| 3.4.1 FOX植株的筛选与鉴定 | 第48-49页 |
| 3.4.2 FOX植株的抗逆性筛选 | 第49-51页 |
| 3.4.3 抗逆筛选植株的PCR鉴定及测序 | 第51-53页 |
| 3.5 纯合体的筛选及表型重复 | 第53-54页 |
| 3.6 油菜的遗传转化 | 第54-56页 |
| 4 讨论 | 第56-60页 |
| 4.1 转录组测序 | 第56-57页 |
| 4.2 测序材料的选取 | 第57-58页 |
| 4.3 基因文库的构建 | 第58-59页 |
| 4.4 FOX文库表型的初步筛选 | 第59-60页 |
| 5 结论 | 第60-62页 |
| 参考文献 | 第62-68页 |
| 致谢 | 第68页 |