摘要 | 第2-4页 |
Summary | 第4-6页 |
前言 | 第11-12页 |
第一章 文献综述 | 第12-20页 |
1.1 植物中AP2/EREB基因家族研究进展 | 第12-17页 |
1.1.1 AP2/EREB基因家族结构特点与分类 | 第12-13页 |
1.1.2 AP2/EREB基因家族起源与进化 | 第13-14页 |
1.1.3 AP2/EREB转录因子的作用 | 第14-17页 |
1.2 ANT功能研究进展 | 第17-19页 |
1.2.1 ANT结构特点及分类 | 第17-18页 |
1.2.2 ANT功能 | 第18-19页 |
1.3 试验目的及意义 | 第19-20页 |
第二章 AP2亚家族生物信息学分析 | 第20-35页 |
2.1 方法 | 第20-21页 |
2.1.1 生物信息检索 | 第20页 |
2.1.2 大白菜AP2亚家族成员鉴定 | 第20页 |
2.1.3 序列分析方法 | 第20页 |
2.1.4 蛋白质理化性质分析 | 第20页 |
2.1.5 系统进化树构建方法 | 第20-21页 |
2.1.6 模体(Motif)结构分析 | 第21页 |
2.1.7 基因结构分析 | 第21页 |
2.1.8 简单重复序列(SSR)分析 | 第21页 |
2.1.9 基因染色体分布分析 | 第21页 |
2.1.10 大白菜AP2亚家族成员表达模式分析 | 第21页 |
2.2 结果与分析 | 第21-33页 |
2.2.1 大白菜AP2亚族成员基本信息 | 第21-23页 |
2.2.2 大白菜AP2结构域基本信息 | 第23-25页 |
2.2.3 大白菜AP2亚家族基因结构 | 第25页 |
2.2.4 大白菜AP2亚家族简单重复序列基本信息 | 第25-26页 |
2.2.5 大白菜亚家族成员共线性信息 | 第26-27页 |
2.2.6 大白菜AP2亚家族染色体定位 | 第27-28页 |
2.2.7 大白菜AP2亚家族氨基酸序列比对分析 | 第28-29页 |
2.2.8 AP2亚家族系统进化分析 | 第29-30页 |
2.2.9 大白菜AP2亚家族进化树及模体分析 | 第30-32页 |
2.2.10 大白菜AP2亚家族基因表达模式分析 | 第32-33页 |
2.3 小结 | 第33-35页 |
第三章 大白菜Br ANT基因克隆与功能分析 | 第35-57页 |
3.1 材料 | 第35-36页 |
3.1.1 试验材料 | 第35页 |
3.1.2 大肠杆菌、农杆菌菌株和载体 | 第35-36页 |
3.1.3 生化试剂 | 第36页 |
3.2 方法 | 第36-45页 |
3.2.1 植物组织DNA提取 | 第36页 |
3.2.2 RNA提取 | 第36-37页 |
3.2.3 反转录 | 第37页 |
3.2.4 荧光定量PCR引物设计及反应参数 | 第37-38页 |
3.2.5 DNA胶回收 | 第38页 |
3.2.6 质粒提取 | 第38-39页 |
3.2.7 目的基因克隆 | 第39-40页 |
3.2.8 目的基因转化克隆载体 | 第40-41页 |
3.2.9 超表达载体构建 | 第41-42页 |
3.2.10 农杆菌转化 | 第42页 |
3.2.11 农杆菌介导拟南芥转化 | 第42-44页 |
3.2.12 转基因拟南芥筛选 | 第44页 |
3.2.13 PCR检测转基因植株 | 第44页 |
3.2.14 转基因植株表型形状研究 | 第44-45页 |
3.3 结果与分析 | 第45-55页 |
3.3.1 基因克隆 | 第45页 |
3.3.2 大白菜Br ANT基因家族表达模式分析 | 第45-48页 |
3.3.3 转基因株系目的基因表达分析 | 第48-49页 |
3.3.4 转基因植株幼苗表型分析 | 第49-51页 |
3.3.5 转基因(35s:Br ANT2)拟南芥成熟期表型分析 | 第51-53页 |
3.3.6 温度胁迫对转基因拟南芥幼苗影响 | 第53-54页 |
3.3.7 盐胁迫对转基因拟南芥幼苗影响 | 第54-55页 |
3.4 讨论 | 第55-57页 |
第四章 转基因(35S:Br ANT2)拟南芥转录组分析 | 第57-75页 |
4.1 材料 | 第57页 |
4.1.1 试验材料 | 第57页 |
4.1.2 生化试剂 | 第57页 |
4.2 方法 | 第57-62页 |
4.2.1 RNA提取及反转录 | 第57页 |
4.2.2 转录组测序 | 第57页 |
4.2.3 文库构建 | 第57-58页 |
4.2.4 文库质量检测及上机测序 | 第58页 |
4.2.5 测序数据及其质量控制 | 第58-59页 |
4.2.6 测序数据生物信息学分析 | 第59-61页 |
4.2.7 差异表达基因的荧光实时定量PCR(RT-qPCR)验证 | 第61页 |
4.2.8 差异表达基因的GO功能显著性富集分析 | 第61-62页 |
4.3 结果与分析 | 第62-72页 |
4.3.1 RNA-Seq测序数据质量分析 | 第62-65页 |
4.3.2 RNA-Seq测序数据分析 | 第65-66页 |
4.3.3 基因表达模式分析 | 第66-70页 |
4.3.4 差异表达基因的RT-q PCR验证 | 第70-72页 |
4.4 讨论 | 第72-75页 |
4.4.1 参与调控细胞生长的差异表达基因 | 第72-73页 |
4.4.2 光形态建成相关差异表达基因 | 第73页 |
4.4.3 生长发育相关差异表达基因 | 第73-74页 |
4.4.4 编码钙信号传导相关蛋白的差异表达基因 | 第74页 |
4.4.5 衰老相关蛋白的差异表达基因 | 第74-75页 |
第五章 结论 | 第75-76页 |
附录1:真核克隆载体pMD 18-T图谱 | 第76-77页 |
附录2:过量表达载体pCAMBIA2300-35S-OCS图谱 | 第77-78页 |
附录3:DNA、RNA质量检测图片 | 第78-79页 |
附录4:PMD18-T- Br ANT2和pCAMBIA-35S-OCS空载体的双酶切 | 第79-80页 |
附录5:pCAMBIA-35S-OCS-Br ANT2菌落PCR及双酶切检测 | 第80-81页 |
附录6:转基因植株纯合体筛选 | 第81-82页 |
参考文献 | 第82-96页 |
致谢 | 第96-97页 |
导师简介 | 第97-98页 |
作者简介 | 第98-99页 |