| 英文缩写说明(Abbreviations) | 第1-5页 |
| 摘要 | 第5-8页 |
| Abstract | 第8-17页 |
| 第一部分 文献综述 | 第17-31页 |
| 1.四川甘孜色达藏区、牦牛和牧民的概述 | 第18-19页 |
| 2 动物、人源大肠杆菌概述 | 第19-21页 |
| 3.磺胺耐药性及耐药基因研究进展 | 第21-24页 |
| 4 氟苯尼考耐药性及耐药基因研究进展 | 第24-25页 |
| 5 脉冲场凝胶电泳PFGE分析细菌遗传相关性研究进展 | 第25-29页 |
| 6.存在的问题 | 第29-31页 |
| 第二部分 实验部分 | 第31-130页 |
| 第一章 四川甘孜色达藏区牦牛、牧民源大肠杆菌分离、血清学鉴定及16S rRNA分析 | 第32-53页 |
| 摘要 | 第33-34页 |
| 一、引言 | 第34-36页 |
| 二 材料与方法 | 第36-43页 |
| ·材料 | 第36-38页 |
| ·样品 | 第36-37页 |
| ·标准菌株 | 第37页 |
| ·培养基 | 第37-38页 |
| ·主要试剂 | 第38页 |
| ·实验动物 | 第38页 |
| ·主要仪器 | 第38页 |
| ·方法 | 第38-43页 |
| ·样品采集与用药背景调查 | 第38-39页 |
| ·不同采样、分离、保存方式的研究 | 第39页 |
| ·生化实验鉴定试验 | 第39-40页 |
| ·大肠杆菌的血清学鉴定 | 第40-41页 |
| ·致病性试验 | 第41页 |
| ·牦牛、牧民的大肠杆菌的16S rRNA鉴定 | 第41-43页 |
| 三、结果 | 第43-50页 |
| ·样品采集与用药背景调查结果 | 第43页 |
| ·在高海拔、高寒条件下不同采样、接种、菌株保存方式 | 第43-44页 |
| ·生化实验鉴定试验结果 | 第44页 |
| ·牦牛、牧民源大肠杆菌的血清学鉴定 | 第44-45页 |
| ·牦牛源大肠杆菌血清型鉴定结果 | 第44页 |
| ·牧民源大肠杆菌血清型鉴定结果 | 第44-45页 |
| ·牦牛、牧民源大肠杆菌的血清型比较 | 第45页 |
| ·牦牛、牧民源大肠杆菌致病性试验 | 第45-46页 |
| ·牦牛、牧民源大肠杆菌16S rRNA鉴定 | 第46-50页 |
| ·牦牛、牧民源大肠杆菌16S rRNA PCR扩增 | 第46-47页 |
| ·牦牛、牧民源大肠杆菌16S rRNA的序列分析 | 第47-48页 |
| ·牦牛、牧民源大肠杆菌16S rRNA的序列系统进化分析 | 第48-50页 |
| 四、讨论 | 第50-52页 |
| ·适用于高海拔、高寒地区样品采集、细菌分离及保存方法 | 第50页 |
| ·牦牛致病性大肠杆菌血清型的比较 | 第50-51页 |
| ·色达牧民源大肠杆菌血清型与非藏区的比较 | 第51-52页 |
| ·牦牛、牧民源大肠杆菌的16SRNA亲缘关系分析与比较 | 第52页 |
| 五 小结 | 第52-53页 |
| 第二章 藏区牦牛、牧民对大肠杆菌对15种常用抗生素的MIC测定及比较 | 第53-66页 |
| 摘要 | 第54-55页 |
| 一、引言 | 第55-56页 |
| 二 材料与方法 | 第56-58页 |
| ·实验材料 | 第56页 |
| ·标准菌株 | 第56页 |
| ·待检菌株 | 第56页 |
| ·试验药物 | 第56页 |
| ·试验仪器与耗材 | 第56页 |
| ·方法 | 第56-58页 |
| ·藏区牦牛、牧民源大肠杆菌MIC值的测定 | 第56-57页 |
| ·藏区牦牛、牧民源大肠杆菌的药敏结果比较 | 第57-58页 |
| 三 结果 | 第58-60页 |
| ·牦牛源大肠杆菌药敏结果 | 第58页 |
| ·牧民源大肠杆菌药敏结果 | 第58-59页 |
| ·牦牛与牧民源大肠杆菌药敏结果的比较 | 第59-60页 |
| 四 讨论 | 第60-65页 |
| ·牦牛源大肠杆菌耐药性的特点及分析 | 第60-62页 |
| ·牧民源大肠杆菌耐药性特点及分析 | 第62-63页 |
| ·牦牛源大肠杆菌耐药性与牧民源大肠杆菌耐药性的比较 | 第63-64页 |
| ·牦牛、牧民耐药性与用药背景的关系 | 第64-65页 |
| 五 小结 | 第65-66页 |
| 第三章 藏区牦牛、牧民源大肠杆菌对磺胺类和氟苯尼考耐药基因的PCR检测 | 第66-90页 |
| 摘要 | 第67-68页 |
| 一 引言 | 第68-69页 |
| 二 材料与方法 | 第69-78页 |
| ·实验材料 | 第69-71页 |
| ·菌株和载体 | 第69-70页 |
| ·培养基 | 第70页 |
| ·溶液和缓冲液 | 第70-71页 |
| ·主要试剂 | 第71页 |
| ·主要仪器 | 第71页 |
| ·方法 | 第71-78页 |
| ·建立检测磺胺耐药基因Sul1、Sul2、Sul3三重PCR方法 | 第71-76页 |
| ·应用三重PCR方法检测耐磺胺大肠杆菌的耐药基因 | 第76页 |
| ·建立PCR方法检测耐氟苯尼考大肠杆菌的耐药基因 | 第76-78页 |
| ·PCR方法检测耐氟苯尼考大肠杆菌的耐药基因 | 第78页 |
| 三 结果 | 第78-85页 |
| ·磺胺耐药基因三重PCR检测方法的建立 | 第78-81页 |
| ·磺胺耐药基因测序及序列数据分析 | 第78-80页 |
| ·磺胺耐药基因三重PCR检测方法体系的建立 | 第80-81页 |
| ·应用三重PCR方法检测耐磺胺大肠杆菌的耐药基因结果 | 第81-84页 |
| ·牦牛源大肠杆菌耐磺胺药基因的检测结果 | 第81-82页 |
| ·牧民源大肠杆菌耐磺胺药基因的检测结果 | 第82-83页 |
| ·牦牛、牧民源大肠杆菌磺胺耐药基因型的比较结果 | 第83页 |
| ·三重PCR检测结果与耐药表型的比较结果 | 第83-84页 |
| ·氟苯尼考耐药基因测序及序列数据分析 | 第84-85页 |
| ·应用PCR方法检测耐氟苯尼考大肠杆菌的耐药基因结果 | 第85页 |
| ·牦牛和牧民源大肠杆菌耐氟苯尼考基因的检测结果 | 第85页 |
| 四 讨论 | 第85-89页 |
| ·建立的磺胺耐药基因三重PCR检测方法 | 第85-86页 |
| ·牦牛、牧民源大肠杆菌耐磺胺药基因分布的比较 | 第86-87页 |
| ·三重PCR检测结果与耐药表型的比较 | 第87-88页 |
| ·牧民源大肠杆菌对氟苯尼考耐药基因的分析研究 | 第88-89页 |
| 五 小结 | 第89-90页 |
| 第四章 用PFGE对牦牛、牧民相同耐药基因型菌株的分析研究 | 第90-112页 |
| 摘要 | 第91-92页 |
| 一 引言 | 第92-93页 |
| 二 材料与方法 | 第93-102页 |
| ·实验材料 | 第93-97页 |
| ·菌株 | 第93页 |
| ·主要试剂 | 第93-96页 |
| ·主要仪器及耗材 | 第96-97页 |
| ·方法 | 第97-102页 |
| ·PFGE试验参数条件筛选 | 第97-101页 |
| ·细菌基因组DNA包块的制备 | 第97-98页 |
| ·菌液培养 | 第97页 |
| ·计算菌数 | 第97-98页 |
| ·灌制凝胶块 | 第98页 |
| ·酶解凝胶块中的细菌 | 第98-100页 |
| ·灌制电泳胶 | 第100页 |
| ·电泳 | 第100-101页 |
| ·染色 | 第101页 |
| ·结果分析 | 第101页 |
| ·同牧场耐磺胺药的相同基因Sul1型的牦牛与牧民源大肠杆菌的PFGE结果 | 第101页 |
| ·携带Sul1但不同来源的大肠杆菌PFGE聚类矩阵分析 | 第101-102页 |
| ·牦牛、牧民携带flor的大肠杆菌的PFGE | 第102页 |
| ·牦牛、牧民携带flor基因的大肠杆菌PFGE聚类矩阵分析 | 第102页 |
| 三 结果 | 第102-108页 |
| ·最佳试验效果的参数和条件 | 第102-103页 |
| ·同牧场耐磺胺药的相同基因Sul1型的牦牛与牧民源大肠杆菌的PFGE结果 | 第103-104页 |
| ·携带Sul1但不同来源的大肠杆菌PFGE聚类矩阵分析 | 第104-106页 |
| ·牦牛、牧民携带flor的大肠杆菌的PFGE结果 | 第106-107页 |
| ·牦牛、牧民携带flor基因的大肠杆菌PFGE聚类矩阵分析结果 | 第107-108页 |
| 四 讨论 | 第108-111页 |
| ·PFGE实验条件的影响 | 第108-109页 |
| ·牦牛和牧民耐药大肠杆菌的关系 | 第109-111页 |
| 五 小结 | 第111-112页 |
| 第五章 携带磺胺耐药基因和氟苯尼考耐药基因大肠杆菌的转化试验和接合性试验 | 第112-130页 |
| 摘要 | 第113-114页 |
| 一 引言 | 第114-115页 |
| 二 材料与方法 | 第115-120页 |
| ·实验材料 | 第115-118页 |
| ·菌株 | 第115-116页 |
| ·主要试剂 | 第116-118页 |
| ·方法 | 第118-120页 |
| ·质粒提取 | 第118页 |
| ·质粒DNA的检测 | 第118-119页 |
| ·质粒的转化试验 | 第119页 |
| ·携带耐药质粒的菌株与E.coli C600的接合实验 | 第119-120页 |
| ·转化子与接合转移子的药物敏感性试验(MIC) | 第120页 |
| 三 结果 | 第120-126页 |
| ·耐药大肠杆菌的质粒的电泳检测结果 | 第120-121页 |
| ·转化试验结果 | 第121-125页 |
| ·质粒转化结果 | 第121-123页 |
| ·转化子的MIC测定结果 | 第123-124页 |
| ·转化子质粒耐药基因检测 | 第124-125页 |
| ·携带耐药质粒的菌株与E.coli C600的接合实验结果 | 第125-126页 |
| ·与E.coli C600的接合实验结果 | 第125页 |
| ·接合子的MIC测定结果 | 第125-126页 |
| ·接合子质粒检测和耐药基因的检测 | 第126页 |
| 四 讨论 | 第126-129页 |
| ·牦牛和牧民源大肠杆菌的质粒图谱比较分析 | 第126-127页 |
| ·牦牛、牧民耐药大肠杆菌质粒的鉴定方法选择 | 第127-128页 |
| ·通过大肠杆菌接合方式研究耐药性的水平传递比较与探讨 | 第128-129页 |
| 五 小结 | 第129-130页 |
| 全文总结 | 第130-132页 |
| 参考文献 | 第132-152页 |
| 在读期间已经发表的文章和待发表文章 | 第152-154页 |
| 致谢 | 第154页 |
