| 摘要 | 第4-6页 |
| ABSTRACT | 第6-7页 |
| 第一章 真菌生物合成基因的研究进展 | 第13-27页 |
| 前言 | 第13页 |
| 1 真菌生物合成基因的主要类型 | 第13-22页 |
| 1.1 聚酮合酶基因 | 第13-15页 |
| 1.2 萜类合成酶基因 | 第15-17页 |
| 1.3 非核糖体多肽合成酶基因 | 第17-20页 |
| 1.4 细胞色素P450基因 | 第20-22页 |
| 1.5 其他一些修饰酶基因 | 第22页 |
| 2 真菌生物合成基因对其自身的影响 | 第22-24页 |
| 3 本论文的研究意义、内容和方法 | 第24-27页 |
| 第二章 少孢节丛孢中5个生物合成基因的筛选、敲除和验证 | 第27-64页 |
| 1 实验材料与方法 | 第27-44页 |
| 1.1 实验材料 | 第27-30页 |
| 1.1.1 供试菌株及质粒 | 第27页 |
| 1.1.2 主要试剂及试剂盒 | 第27页 |
| 1.1.3 供试培养基 | 第27-28页 |
| 1.1.4 溶液的配制 | 第28-29页 |
| 1.1.5 仪器与设备 | 第29-30页 |
| 1.2 研究方法 | 第30-44页 |
| 1.2.1 基因功能分析 | 第30页 |
| 1.2.2 敲除载体的构建 | 第30-38页 |
| 1.2.3 原生质体的制备及转化 | 第38-42页 |
| 1.2.4 敲除转化子的筛选及PCR验证 | 第42-43页 |
| 1.2.5 敲除株的Southern blot验证 | 第43-44页 |
| 2 实验结果与分析 | 第44-62页 |
| 2.1 基因功能分析 | 第44-52页 |
| 2.1.1 聚酮合酶基因 | 第45-46页 |
| 2.1.2 萜类合成酶基因 | 第46-47页 |
| 2.1.3 细胞色素P450基因 | 第47-52页 |
| 2.2 敲除载体的构建 | 第52-59页 |
| 2.2.1 上下游片段扩增 | 第52-53页 |
| 2.2.2 上下游同源片段连接和酶切验证 | 第53-58页 |
| 2.2.3 全长片段扩增 | 第58-59页 |
| 2.3 转化子的PCR验证 | 第59-61页 |
| 2.3.1 基因AOL_s00043g740敲除转化子的验证 | 第59页 |
| 2.3.2 基因AOL_s00079g224敲除转化子的验证 | 第59-60页 |
| 2.3.3 基因AOL_s00079g225敲除转化子的验证 | 第60页 |
| 2.3.4 基因AOL_s00079g496-KS敲除转化子的验证 | 第60页 |
| 2.3.5 基因AOL_s00079g496-KR敲除转化子的验证 | 第60-61页 |
| 2.3.6 基因AOL_s00210g57敲除转化子的验证 | 第61页 |
| 2.4 敲除突变株的Southern blot验证 | 第61-62页 |
| 2.4.1 探针片段的扩增 | 第61-62页 |
| 2.4.2 Southern blot验证 | 第62页 |
| 3 小结与讨论 | 第62-64页 |
| 第三章 少孢节丛孢野生菌株及突变菌株表型特征的比较和分析 | 第64-80页 |
| 1 实验材料与方法 | 第64-65页 |
| 1.1 实验材料 | 第64页 |
| 1.1.1 供试菌株及线虫 | 第64页 |
| 1.1.2 供试培养基 | 第64页 |
| 1.1.3 仪器与设备 | 第64页 |
| 1.2 研究方法 | 第64-65页 |
| 1.2.1 少孢节丛孢野生菌株及突变菌株生长速率的比较 | 第64页 |
| 1.2.2 少孢节丛孢野生菌株及突变菌株产孢量及孢子萌发率的比较 | 第64-65页 |
| 1.2.3 少孢节丛孢野生菌株及突变菌株捕食能力的比较 | 第65页 |
| 2 实验结果与分析 | 第65-78页 |
| 2.1 少孢节丛孢野生菌株及突变菌株生长速率和形态的比较 | 第65-70页 |
| 2.1.1 聚酮合酶基因AOL_s00079g496不同结构域敲除后对少孢节丛孢生长速率和形态的影响 | 第65-67页 |
| 2.1.2 萜类合成酶基因AOL_s00079g224敲除后对少孢节丛孢生长速率和形态的影响 | 第67-68页 |
| 2.1.3 三个P450基因分别敲除后对少孢节丛孢生长速率和形态的影响 | 第68-70页 |
| 2.2 少孢节丛孢野生菌株及突变菌株产孢量及孢子萌发率的比较 | 第70-72页 |
| 2.2.1 野生菌株与突变菌株产孢量的比较 | 第70-71页 |
| 2.2.2 野生菌株与突变菌株孢子萌发率的比较 | 第71-72页 |
| 2.3 少孢节丛孢野生菌株及突变菌株捕食能力的比较 | 第72-78页 |
| 2.3.1 聚酮合酶基因AOL_s00079g496不同的结构域的敲除对捕食能力的影响 | 第72-73页 |
| 2.3.2 萜类合成酶基因AOL_s00079g224的敲除对捕食能力的影响 | 第73-74页 |
| 2.3.3 三个P450基因分别敲除后对少孢节丛孢捕食能力的影响 | 第74-78页 |
| 3 小结与讨论 | 第78-80页 |
| 第四章 少孢节丛孢野生菌株及突变菌株中次生代谢产物的比较和分析 | 第80-110页 |
| 1 实验材料与方法 | 第80-82页 |
| 1.1 实验材料 | 第80-81页 |
| 1.1.1 供试菌株 | 第80页 |
| 1.1.2 供试培养基 | 第80页 |
| 1.1.3 主要试剂和材料 | 第80页 |
| 1.1.4 仪器与设备 | 第80-81页 |
| 1.2 研究方法 | 第81-82页 |
| 1.2.1 PDB发酵培养及样品处理 | 第81页 |
| 1.2.2 高效液相色谱(HPLC)检测 | 第81-82页 |
| 1.2.3 气相色谱质谱(GC-MS)检测 | 第82页 |
| 2 实验结果与分析 | 第82-98页 |
| 2.1 聚酮合酶基因AOL_s00079g496突变菌株与野生菌株代谢产物的比较与分析 | 第82-89页 |
| 2.1.1 突变菌株△AOL_s00079g496-KS与野生菌株PDB发酵液代谢产物的比较与分析 | 第82-85页 |
| 2.1.2 突变菌株△AOL_s00079g496-KR与野生菌株PDB发酵液代谢产物的比较与分析 | 第85-87页 |
| 2.1.3 突变菌株△AOL_s00079g496-KS与△AOL_s00079g496-KR PDB发酵液代谢产物的比较与分析 | 第87-89页 |
| 2.2 萜类合成酶基因AOL_s00079g224突变菌株与野生菌株代谢产物的比较与分析 | 第89-92页 |
| 2.2.1 突变菌株△AOL_s00079g224与野生菌株PDB发酵液的高效液相色谱(HPLC)检测 | 第89-90页 |
| 2.2.2 萜类合成酶基因AOL_s00079g224突变菌株与野生菌株发酵液的气相色谱质谱(GC-MS)检测 | 第90-92页 |
| 2.3 三个细胞色素P450基因突变菌株与野生菌株代谢产物的比较与分析 | 第92-98页 |
| 2.3.1 P450基因AOL_s00043g740突变菌株与野生菌株发酵液代谢产物的比较与分析 | 第92-94页 |
| 2.3.2 P450基因AOL_s00079g225突变菌株与野生菌株发酵液代谢产物的比较与分析 | 第94-96页 |
| 2.3.3 P450基因AOL_s0021057突变菌株与野生菌株发酵液代谢产物的比较与分析 | 第96-98页 |
| 3 小结与讨论 | 第98-110页 |
| 第五章 少孢节丛孢野生菌株及突变菌株基因表达谱差异的初步分析 | 第110-114页 |
| 1 实验材料与方法 | 第110-114页 |
| 1.1 实验材料 | 第110页 |
| 1.1.1 供试菌株 | 第110页 |
| 1.1.2 供试培养基 | 第110页 |
| 1.1.3 仪器与设备 | 第110页 |
| 1.2 研究方法 | 第110页 |
| 1.2.1 样品制备 | 第110页 |
| 1.2.2 基因表达谱测序与数据分析 | 第110页 |
| 2 实验结果与分析 | 第110-112页 |
| 3 小结与讨论 | 第112-114页 |
| 全文总结与展望 | 第114-117页 |
| 附录 | 第117-138页 |
| 附录1 本文中使用的质粒pAg1-H3图谱 | 第117-118页 |
| 附录2 野生菌株与突变菌株△AOL_s00079g496-KS PDB发酵液的GC-MS检测结果 | 第118-121页 |
| 附录3 野生菌株与突变菌株△AOL_s00079g496-KR PDB发酵液的GC-MS检测结果 | 第121-124页 |
| 附录4 突变菌株△AOL_s00079g496-KS与△AOL_s00079g496-KR PDB发酵液的GC-MS检测结果 | 第124-126页 |
| 附录5 野生菌株与突变菌株△AOL_s00079g224 PDB发酵液的GC-MS检测结果 | 第126-129页 |
| 附录6 野生菌株与突变菌株△AOL_s00043g740 PDB发酵液的GC-MS检测结果 | 第129-132页 |
| 附录7 野生菌株与突变菌株△AOL_s00079g225 PDB发酵液的GC-MS检测结果 | 第132-135页 |
| 附录8 野生菌株与突变菌株△AOL_s00210g57 PDB发酵液的GC-MS检测结果 | 第135-138页 |
| 参考文献 | 第138-146页 |
| 致谢 | 第146-147页 |
