| 致谢 | 第4-5页 |
| 摘要 | 第5-7页 |
| ABSTRACT | 第7-8页 |
| 1 文献综述 | 第12-30页 |
| 1.1 羧酸酯酶 | 第12-14页 |
| 1.1.1 酯酶的分类和来源 | 第12页 |
| 1.1.2 羧酸酯酶的结构和催化水解机制 | 第12-13页 |
| 1.1.3 羧酸酯酶的工业化应用现状 | 第13-14页 |
| 1.2 酶的立体选择性在手性药物拆分中的应用 | 第14-15页 |
| 1.2.1 手性药物的研究意义 | 第14页 |
| 1.2.2 手性药物的生物学效应 | 第14-15页 |
| 1.2.3 酶催化消旋体拆分合成手性化合物 | 第15页 |
| 1.3 酶的定向进化研究 | 第15-17页 |
| 1.3.1 酶的定向进化 | 第15-16页 |
| 1.3.2 定向进化的原理与目的 | 第16页 |
| 1.3.3 定向进化中高通量筛选模型的建立 | 第16-17页 |
| 1.4 有机溶剂中酶的催化活性研究 | 第17-19页 |
| 1.4.1 有机溶剂中酶的催化反应特征 | 第17-18页 |
| 1.4.2 有机相中酶催化活性的影响因素 | 第18-19页 |
| 1.5 分子模拟 | 第19-28页 |
| 1.5.1 分子动力学 | 第20-24页 |
| 1.5.2 分子对接法 | 第24-28页 |
| 1.6 本研究的目的与意义 | 第28-30页 |
| 2 Rsp酯酶立体选择性的的定向进化研究 | 第30-40页 |
| 2.1 材料与方法 | 第30-35页 |
| 2.1.1 材料 | 第30-31页 |
| 2.1.2 实验方法 | 第31-35页 |
| 2.2 实验结果与分析 | 第35-39页 |
| 2.2.1 易错PCR条件的确定 | 第35-36页 |
| 2.2.2 突变体基因文库的构建 | 第36-37页 |
| 2.2.3 突变体的pH指示初筛和高效液相色谱(HPLC)定量复筛 | 第37-38页 |
| 2.2.4 突变体基因的序列分析 | 第38-39页 |
| 2.3 本章小结 | 第39-40页 |
| 3 野生型Rsp酯酶及其三个突变体酯酶的催化底物谱研究 | 第40-56页 |
| 3.1 材料与方法 | 第40-45页 |
| 3.1.1 材料 | 第40-41页 |
| 3.1.2 实验方法 | 第41-45页 |
| 3.2 实验结果与分析 | 第45-54页 |
| 3.2.1 野生型Rsp酯酶及三个突变体的表达 | 第45页 |
| 3.2.2 底物标准曲线的制作 | 第45-50页 |
| 3.2.3 野生型Rsp酯酶及其突变体催化不同底物的反应结果 | 第50-53页 |
| 3.2.4 野生型Rsp酯酶的纯化 | 第53-54页 |
| 3.2.5 野生型Rsp酯酶的结构分析 | 第54页 |
| 3.3 本章小结 | 第54-56页 |
| 4 Rsp酯酶及其三个突变体的分子对接研究 | 第56-60页 |
| 4.1 材料与方法 | 第56-58页 |
| 4.1.1 材料 | 第56页 |
| 4.1.2 方法 | 第56-58页 |
| 4.2 结果与分析 | 第58-59页 |
| 4.3 本章小结 | 第59-60页 |
| 5 Rsp酯酶及其三个突变体的分子动力学研究 | 第60-72页 |
| 5.1 材料与方法 | 第60-63页 |
| 5.1.1 材料 | 第60页 |
| 5.1.2 方法 | 第60-63页 |
| 5.2 结果与分析 | 第63-70页 |
| 5.2.1 定向进化结果的分析 | 第63-67页 |
| 5.2.2 催化底物谱的分析 | 第67-70页 |
| 5.3 本章小结 | 第70-72页 |
| 6 Rsp酯酶及其三个突变体在有机相中的催化活性研究 | 第72-80页 |
| 6.1 材料与方法 | 第72-74页 |
| 6.1.1 材料 | 第72-73页 |
| 6.1.2 方法 | 第73-74页 |
| 6.2 结果与分析 | 第74-78页 |
| 6.2.1 不同有机溶剂对转酯反应过程中酶特性的影响 | 第74-75页 |
| 6.2.2 酯酶在有机溶剂中的稳定性 | 第75-76页 |
| 6.2.3 不同温度对转酯反应过程中酶特性的影响 | 第76-77页 |
| 6.2.4 野生型与三种突变体酯酶的催化特性比较结果 | 第77-78页 |
| 6.3 本章小结 | 第78-80页 |
| 7 结论与展望 | 第80-84页 |
| 7.1 结论 | 第80-81页 |
| 7.2 展望 | 第81-84页 |
| 参考文献 | 第84-88页 |
| 附录 | 第88-90页 |
