| 致谢 | 第5-6页 |
| 摘要 | 第6-8页 |
| ABSTRACT | 第8-10页 |
| 缩略语表 | 第11-21页 |
| 第一章 绪论 | 第21-44页 |
| 1.1 癌症与基因治疗 | 第21-22页 |
| 1.2 基因输送技术 | 第22-27页 |
| 1.2.1 物理输送 | 第22-23页 |
| 1.2.2 病毒载体 | 第23-24页 |
| 1.2.3 非病毒载体 | 第24-27页 |
| 1.3 细胞水平上非病毒载体基因输送的关键步骤 | 第27-38页 |
| 1.3.1 细胞内吞 | 第27-32页 |
| 1.3.2 入胞途径对基因转染的影响 | 第32-36页 |
| 1.3.3 纳米复合物解离 | 第36-38页 |
| 1.4 影响非病毒载体基因转染效率的其他因素 | 第38-41页 |
| 1.4.1 三级胺结构聚合物的pH响应性 | 第38页 |
| 1.4.2 聚合物亲疏水性与转染 | 第38-39页 |
| 1.4.3 低剂量DNA下的转染能力 | 第39-40页 |
| 1.4.4 阴离子聚合物修饰后的基因转染 | 第40-41页 |
| 1.5 课题的提出和研究内容 | 第41-44页 |
| 1.5.1 三级胺结构的亲疏水性对基因转染的影响 | 第41-42页 |
| 1.5.2 低剂量下不同纳米复合物转染能力的变化及原因 | 第42页 |
| 1.5.3 不同阴离子聚合物包裹对纳米复合物转染的影响 | 第42-43页 |
| 1.5.4 聚磷酯结构的树状大分子合成,表征与生物应用 | 第43-44页 |
| 第二章 不同亲疏水性单体与聚合物的合成及其转染 | 第44-77页 |
| 2.1 引言 | 第44-45页 |
| 2.2 实验材料和仪器 | 第45-48页 |
| 2.2.1 实验药品及试剂 | 第45-46页 |
| 2.2.2 实验仪器 | 第46-47页 |
| 2.2.3 细胞系 | 第47页 |
| 2.2.4 工作溶液 | 第47-48页 |
| 2.3 实验方法 | 第48-54页 |
| 2.3.1 不同亲疏水性单体的合成 | 第48页 |
| 2.3.2 不同亲疏水性均聚物的合成 | 第48-49页 |
| 2.3.3 不同亲疏水性共聚物的合成 | 第49页 |
| 2.3.4 聚合物母液的制备与保存 | 第49-50页 |
| 2.3.5 质粒的扩增与提取 | 第50页 |
| 2.3.6 纳米复合物的制备 | 第50-51页 |
| 2.3.7 纳米复合物的粒径分布和表面电势测定 | 第51页 |
| 2.3.8 纳米复合物的凝胶阻滞电泳实验 | 第51页 |
| 2.3.9 纳米复合物的细胞毒性 | 第51-52页 |
| 2.3.10 纳米复合物的体外细胞转染实验 | 第52-53页 |
| 2.3.11 激光共聚焦显微镜结合FRET技术观察纳米复合物解离 | 第53-54页 |
| 2.4 结果与讨论 | 第54-75页 |
| 2.4.1 不同亲疏水性单体的核磁表征 | 第54-56页 |
| 2.4.2 不同亲疏水性单体均聚物与共聚物的核磁表征 | 第56-62页 |
| 2.4.3 系列聚合物的分子量与分子量分布表征 | 第62-64页 |
| 2.4.4 纳米复合物的粒径与电势 | 第64-65页 |
| 2.4.5 纳米复合物的凝胶阻滞电泳实验 | 第65-66页 |
| 2.4.6 纳米复合物的细胞毒性 | 第66-68页 |
| 2.4.7 纳米复合物体外细胞转染实验 | 第68-74页 |
| 2.4.8 利用FRET技术使用激光共聚焦显微镜观察纳米复合物解离 | 第74-75页 |
| 2.5 本章小结 | 第75-77页 |
| 第三章 低剂量下的基因转染及其机理探究 | 第77-102页 |
| 3.1 引言 | 第77页 |
| 3.2 实验材料和仪器 | 第77-80页 |
| 3.2.1 实验药品及试剂 | 第77-78页 |
| 3.2.2 实验仪器 | 第78-79页 |
| 3.2.3 细胞系 | 第79页 |
| 3.2.4 工作溶液 | 第79-80页 |
| 3.3 实验方法 | 第80-85页 |
| 3.3.1 透射电镜观察B75D25纳米复合物的形态 | 第80页 |
| 3.3.2 荧光标记的BD聚合物(B77D20E3)的合成 | 第80-81页 |
| 3.3.3 纳米复合物体外细胞水平转染 | 第81-82页 |
| 3.3.4 利用FRET技术探究浓度对纳米复合物稳定性的影响 | 第82-83页 |
| 3.3.5 检测不同浓度下纳米复合物的粒径变化 | 第83页 |
| 3.3.6 流式细胞仪检测细胞吞噬抑制剂对B75D25纳米复合物细胞吞噬的影响 | 第83-84页 |
| 3.3.7 细胞吞噬抑制剂作用下B75D25纳米复合物的体外细胞Luciferase转染 | 第84页 |
| 3.3.8 激光共聚焦显微镜观察B75D25纳米复合物的亚细胞分布 | 第84-85页 |
| 3.3.9 表面接触角实验 | 第85页 |
| 3.3.10 Bis-ANS荧光探针实验 | 第85页 |
| 3.3.11 Molinspiration模拟计算不同亲疏水性聚合物logP | 第85页 |
| 3.4 结果与讨论 | 第85-100页 |
| 3.4.1 透射电镜(TEM)观察纳米复合物的形态 | 第85-86页 |
| 3.4.2 B75D25纳米复合物体外细胞Luciferase转染 | 第86-88页 |
| 3.4.3 B75D25纳米复合物体外细胞EGFP转染 | 第88-89页 |
| 3.4.4 纳米复合物粒径、稳定性与浓度的关系 | 第89-90页 |
| 3.4.5 细胞内吞抑制剂对纳米复合物细胞摄取与转染的影响 | 第90-91页 |
| 3.4.6 激光共聚焦显微镜观察B75D25纳米复合物的亚细胞分布 | 第91-93页 |
| 3.4.7 低剂量下不同亲疏水性纳米复合物体外细胞水平转染 | 第93-94页 |
| 3.4.8 表面接触角实验结果 | 第94-95页 |
| 3.4.9 Bis-ANS荧光探针实验结果 | 第95-97页 |
| 3.4.10 Molinspiration模拟计算logP结果 | 第97-99页 |
| 3.4.11 LogP与系列纳米复合物转染能力变化的拟合结果 | 第99-100页 |
| 3.5 本章小结 | 第100-102页 |
| 第四章 不同阴离子聚合物包裹后的转染与动物抑瘤实验 | 第102-136页 |
| 4.1 引言 | 第102页 |
| 4.2 实验材料和仪器 | 第102-105页 |
| 4.2.1 实验药品及试剂 | 第102-103页 |
| 4.2.2 实验仪器 | 第103-104页 |
| 4.2.3 细胞系及实验动物 | 第104页 |
| 4.2.4 工作溶液 | 第104-105页 |
| 4.3 实验方法 | 第105-112页 |
| 4.3.1 阴离子聚合物包裹下的纳米复合物制备 | 第105页 |
| 4.3.2 不同阴离子聚合物包裹下的纳米复合物粒径与电势 | 第105页 |
| 4.3.3 透射电镜(TEM)观察γ-PGA包裹的纳米复合物的形态 | 第105页 |
| 4.3.4 不同阴离子聚合物包裹下的纳米复合物的体外细胞Luciferase转染 | 第105-106页 |
| 4.3.5 利用FRET技术探究浓度对PBD纳米复合物稳定性的影响 | 第106页 |
| 4.3.6 检测不同浓度对PBD纳米复合物粒径变化的影响 | 第106页 |
| 4.3.7 纳米复合物的体外细胞水平转染 | 第106-108页 |
| 4.3.8 流式细胞仪检测GGsTop对HeLa细胞摄取的影响 | 第108页 |
| 4.3.9 软件模拟γ-PGA对不同纳米复合物的包裹 | 第108页 |
| 4.3.10 流式细胞仪检测细胞吞噬抑制剂对PBD纳米复合物细胞吞噬的影响 | 第108-109页 |
| 4.3.11 细胞吞噬抑制剂作用下PBD纳米复合物的体外细胞Luciferase转染 | 第109-110页 |
| 4.3.12 激光共聚焦显微镜观察PBD纳米复合物的亚细胞分布 | 第110页 |
| 4.3.13 激光共聚焦显微镜观察PBD纳米复合物在细胞内的解离 | 第110页 |
| 4.3.14 PBD纳米复合物的血浆清除 | 第110-111页 |
| 4.3.15 γ-PGA-g-PEG系列聚合物的合成 | 第111页 |
| 4.3.16 γ-PGA-g-PEG修饰的B75D25纳米复合物体外细胞Luciferase转染 | 第111页 |
| 4.3.17 BALB/c荷瘤裸鼠体内抑瘤实验 | 第111-112页 |
| 4.3.18 肿瘤和各重要器官组织病理切片 | 第112页 |
| 4.4 结果与讨论 | 第112-134页 |
| 4.4.1 不同阴离子聚合物包裹B75D25纳米复合物后的粒径与电势 | 第113-115页 |
| 4.4.2 不同阴离子聚合物包裹B75D25纳米复合物后体外细胞Luciferase转染 | 第115-117页 |
| 4.4.3 透射电镜(TEM)观察γ-PGA包裹后的纳米复合物形态 | 第117页 |
| 4.4.4 浓度对PBD纳米复合物稳定性的影响 | 第117-118页 |
| 4.4.5 PBD纳米复合物在不同DNA剂量下体外细胞Luciferase转染 | 第118-119页 |
| 4.4.6 PBD纳米复合物在不同DNA剂量下体外细胞EGFP转染 | 第119页 |
| 4.4.7 γ-PGA包裹不同纳米复合物后体外细胞Luciferase转染变化 | 第119-120页 |
| 4.4.8 γ-PGA包裹PEI、A100与B75D25纳米复合物的软件模拟结果 | 第120-121页 |
| 4.4.9 流式细胞仪检测GGsTop对HeLa细胞摄取PBD纳米复合物的影响 | 第121-122页 |
| 4.4.10 PBD纳米复合物在GGT阳性细胞系上的转染 | 第122-123页 |
| 4.4.11 细胞内吞抑制剂对PBD纳米复合物细胞摄取和转染的影响 | 第123-124页 |
| 4.4.12 PBD纳米复合物的亚细胞分布 | 第124-126页 |
| 4.4.13 PBD纳米复合物在细胞内的解离 | 第126-127页 |
| 4.4.14 PBD纳米复合物的血浆清除 | 第127页 |
| 4.4.15 γ-PGA-g-PEG系列聚合物的核磁表征 | 第127-130页 |
| 4.4.16 γ-PGA-g-PEG修饰的B75D25纳米复合物体外细胞Luciferase转染 | 第130-131页 |
| 4.4.17 体内抑瘤实验 | 第131-133页 |
| 4.4.18 肿瘤和各个器官组织病理切片 | 第133-134页 |
| 4.5 本章小结 | 第134-136页 |
| 第五章 聚磷酯树状大分子的合成、表征及其生物应用 | 第136-164页 |
| 5.1 引言 | 第136-137页 |
| 5.2 实验材料和仪器 | 第137-139页 |
| 5.2.1 实验药品及试剂 | 第137-138页 |
| 5.2.2 实验仪器 | 第138-139页 |
| 5.2.3 细胞系及实验动物 | 第139页 |
| 5.2.4 工作溶液 | 第139页 |
| 5.3 实验方法 | 第139-146页 |
| 5.3.1 聚磷酯树状大分子的合成 | 第139-142页 |
| 5.3.2 磷酯酶C酶解实验 | 第142页 |
| 5.3.3 阿霉素(DOX)载药实验 | 第142-143页 |
| 5.3.4 阿霉素(DOX)体外释放实验 | 第143页 |
| 5.3.5 细胞摄取与亚细胞分布 | 第143页 |
| 5.3.6 MTT法检测体外细胞毒性 | 第143-144页 |
| 5.3.7 PAD-MPC与FBS的相互作用 | 第144页 |
| 5.3.8 PAD-MPCDOX的血浆清除 | 第144页 |
| 5.3.9 荷瘤裸鼠模型的建立 | 第144-145页 |
| 5.3.10 荷瘤裸鼠体内抑瘤实验 | 第145页 |
| 5.3.11 肿瘤组织与心脏组织病理切片的制备 | 第145-146页 |
| 5.4 结果与讨论 | 第146-163页 |
| 5.4.1 甲基丙烯酸亚磷酸酯的核磁表征 | 第146页 |
| 5.4.2 第1代聚磷酯树状大分子的核磁表征 | 第146-147页 |
| 5.4.3 第1.5代聚磷酯树状大分子的核磁表征 | 第147-148页 |
| 5.4.4 各代聚磷酯树状大分子的核磁表征 | 第148-152页 |
| 5.4.5 第1-4代聚磷酯树状大分子的MALDI-TOF-MS以及GPC表征 | 第152-154页 |
| 5.4.6 二硫醇与甲基丙烯酸磷酰胆碱反应产物的核磁表征 | 第154页 |
| 5.4.7 甲基丙烯酸磷酰胆碱修饰后的第4代聚磷酯树状大分子的核磁表征 | 第154-156页 |
| 5.4.8 PAD-MPC的粒径与电镜表征 | 第156页 |
| 5.4.9 PAD-MPC/DOX的酶解与药物释放 | 第156-157页 |
| 5.4.10 PAD-MPC/DOX与DOX在MCF-7及MCF-7/ADR上的亚细胞分布 | 第157-159页 |
| 5.4.11 PAD-MPC/DOX的体外细胞毒性 | 第159-160页 |
| 5.4.12 PAD-MPC与蛋白的相互作用及载药后的血浆清除 | 第160-161页 |
| 5.4.13 PAD-MPC/DOX的抑瘤实验 | 第161-163页 |
| 5.5 本章小结 | 第163-164页 |
| 第六章 结论和展望 | 第164-171页 |
| 6.1 论文总结 | 第164-169页 |
| 6.2 研究展望 | 第169-171页 |
| 参考文献 | 第171-185页 |
| 作者简历及在校期间所取得的科研成果 | 第185页 |
