| 摘要 | 第4-6页 |
| ABSTRACT | 第6-8页 |
| 第一章 文献综述 | 第12-25页 |
| 1.1 L-半胱氨酸的性质和应用 | 第12-13页 |
| 1.2 微生物转化法生产L-半胱氨酸的三种工艺 | 第13-15页 |
| 1.3 假单胞菌转化 DL-ATC生成 L-半胱氨酸研究进展 | 第15-21页 |
| 1.3.1 产酶条件和酶学性质研究 | 第15-17页 |
| 1.3.2 DL-ATC的生物转化途径研究 | 第17-18页 |
| 1.3.3 固定化细胞转化研究 | 第18-19页 |
| 1.3.4 基因工程菌的研究 | 第19-20页 |
| 1.3.5 脱巯基酶的研究 | 第20-21页 |
| 1.4 重组蛋白分离纯化的一般方法 | 第21-23页 |
| 1.5 论文思路 | 第23-25页 |
| 第二章 L-ATC水解酶基因的克隆和序列分析 | 第25-38页 |
| 2.1 前言 | 第25-26页 |
| 2.2 实验材料 | 第26-29页 |
| 2.2.1 菌种和质粒 | 第26页 |
| 2.2.2 生化试剂 | 第26-27页 |
| 2.2.3 培养基 | 第27-28页 |
| 2.2.4 主要仪器和设备 | 第28-29页 |
| 2.3 实验方法 | 第29-34页 |
| 2.3.1 模板 DNA的制备 | 第29-30页 |
| 2.3.2 目的基因的克隆 | 第30-33页 |
| 2.3.3 转化和筛选鉴定 | 第33页 |
| 2.3.4 测序和序列分析 | 第33-34页 |
| 2.4 结果与讨论 | 第34-37页 |
| 2.4.1 PCR结果 | 第34页 |
| 2.4.2 蓝白斑筛选 | 第34-35页 |
| 2.4.3 双酶切鉴定 | 第35-36页 |
| 2.4.4 序列分析 | 第36-37页 |
| 2.5 本章小结 | 第37-38页 |
| 第三章 L-ATC水解酶的表达和纯化 | 第38-55页 |
| 3.1 前言 | 第38-39页 |
| 3.2 实验材料 | 第39-41页 |
| 3.2.1 菌种和质粒 | 第39页 |
| 3.2.2 主要仪器 | 第39-40页 |
| 3.2.3 主要试剂 | 第40-41页 |
| 3.3 实验方法 | 第41-47页 |
| 3.3.1 表达质粒的构建 | 第41-43页 |
| 3.3.2 重组菌的筛选鉴定 | 第43-45页 |
| 3.3.3 诱导条件的优化 | 第45页 |
| 3.3.4 包涵体的提取 | 第45页 |
| 3.3.5 包涵体纯化 | 第45页 |
| 3.3.6 包涵体复性 | 第45-46页 |
| 3.3.7 蛋白质含量测定 | 第46-47页 |
| 3.4 结果及讨论 | 第47-54页 |
| 3.4.1 表达质粒的构建 | 第47-48页 |
| 3.4.2 SDS-PAGE筛选 | 第48-54页 |
| 3.5 本章小结 | 第54-55页 |
| 第四章 L-ATC水解酶的活性研究 | 第55-68页 |
| 4.1 前言 | 第55页 |
| 4.2 材料与方法 | 第55-59页 |
| 4.2.1 菌种 | 第56页 |
| 4.2.2 主要试剂 | 第56页 |
| 4.2.3 L-ATC水解酶基因功能鉴定方法 | 第56-58页 |
| 4.2.4 IPTG诱导条件研究 | 第58页 |
| 4.2.5 转化条件研究 | 第58页 |
| 4.2.6 酶活定义 | 第58-59页 |
| 4.3 结果与讨论 | 第59-66页 |
| 4.3.1 薄层鉴定结果 | 第59页 |
| 4.3.2 诱导条件对酶活的影响 | 第59-62页 |
| 4.3.3 酶浓度对酶活力的影响 | 第62-63页 |
| 4.3.4 底物浓度对酶活的影响 | 第63页 |
| 4.3.5 反应时间对酶活力的影响 | 第63-64页 |
| 4.3.6 温度对酶活力的影响 | 第64-65页 |
| 4.3.7 转化液中不同添加物对酶活力的影响 | 第65-66页 |
| 4.4 本章小结 | 第66-68页 |
| 第五章 L-NCC水解酶基因的克隆和序列分析 | 第68-76页 |
| 5.1 前言 | 第68-69页 |
| 5.2 材料与方法 | 第69-70页 |
| 5.2.1 菌种与材料 | 第69页 |
| 5.2.2 实验方法 | 第69-70页 |
| 5.3 结果与讨论 | 第70-75页 |
| 5.3.1 PCR结果 | 第70-71页 |
| 5.3.2 蓝白斑筛选 | 第71页 |
| 5.3.3 双酶切鉴定 | 第71-72页 |
| 5.3.4 序列分析 | 第72-75页 |
| 5.4 本章小结 | 第75-76页 |
| 第六章 结论和建议 | 第76-79页 |
| 6.1 结论 | 第76-77页 |
| 6.2 存在的问题和建议 | 第77-79页 |
| 参考文献 | 第79-87页 |
| 致谢 | 第87-88页 |
| 攻读硕士期间发表的论文 | 第88页 |