| 摘要 | 第7-8页 |
| Abstract | 第8页 |
| 第一章 文献综述 | 第9-22页 |
| 1.1 前言 | 第9页 |
| 1.2 乳链菌肽的结构特征 | 第9-10页 |
| 1.2.1 化学结构 | 第9-10页 |
| 1.2.2 结构与功能的关系 | 第10页 |
| 1.3 乳链菌肽的特性 | 第10-11页 |
| 1.4 乳链菌肽的生物合成 | 第11-13页 |
| 1.4.1 Nisin合成相关基因 | 第11-12页 |
| 1.4.2 乳链菌肽的成熟过程 | 第12-13页 |
| 1.5 乳链菌肽的抑菌机制和抑菌谱 | 第13-14页 |
| 1.5.1 作用机制 | 第13-14页 |
| 1.5.2 抑菌谱 | 第14页 |
| 1.6 乳链菌肽的应用 | 第14-15页 |
| 1.7 Nisin的检测 | 第15-16页 |
| 1.7.1 琼脂扩散法 | 第15页 |
| 1.7.2 生物体发光检测法 | 第15页 |
| 1.7.3 免疫测定法 | 第15页 |
| 1.7.4 分光光度测定法 | 第15-16页 |
| 1.8 Nisin产生菌株的筛选及高产菌株的选育 | 第16-17页 |
| 1.8.1 Nisin产生菌株的筛选 | 第16页 |
| 1.8.2 Nisin高产菌株的选育进展 | 第16-17页 |
| 1.9 Nisin的发酵生产 | 第17页 |
| 1.9.1 培养基成分 | 第17页 |
| 1.9.2 操作条件 | 第17页 |
| 1.9.3 发酵类型 | 第17页 |
| 1.10 乳链菌肽的分离纯化 | 第17-19页 |
| 1.10.1 有机溶剂法 | 第17-18页 |
| 1.10.2 菌体吸附法 | 第18页 |
| 1.10.3 免疫吸附法 | 第18页 |
| 1.10.4 透析及浓缩 | 第18-19页 |
| 1.11 乳酸乳球菌耐酸的主要机制 | 第19-21页 |
| 1.12 本课题的研究背景及目的 | 第21-22页 |
| 第二章 Nisin高产菌株的选育 | 第22-31页 |
| 2.1 前言 | 第22页 |
| 2.2 材料与方法 | 第22-26页 |
| 2.2.1 菌种 | 第22页 |
| 2.2.2 培养基 | 第22-23页 |
| 2.2.3 试剂 | 第23页 |
| 2.2.4 仪器设备 | 第23-24页 |
| 2.2.5 乳酸乳球菌灯CC11454生长曲线的绘制 | 第24页 |
| 2.2.6 诱变用菌悬液的制备 | 第24页 |
| 2.2.7 杀菌曲线的绘制 | 第24页 |
| 2.2.8 诱变处理 | 第24-25页 |
| 2.2.9 初筛 | 第25页 |
| 2.2.10 发酵复筛 | 第25-26页 |
| 2.2.11 菌种保存 | 第26页 |
| 2.3 结果与分析 | 第26-30页 |
| 2.3.1 生长曲线 | 第26-27页 |
| 2.3.2 杀菌曲线 | 第27-29页 |
| 2.3.5 诱变谱系 | 第29页 |
| 2.3.6 高产菌的遗传稳定性 | 第29-30页 |
| 2.4 本章小节 | 第30-31页 |
| 第三章 工程菌的构建 | 第31-53页 |
| 3.1 前言 | 第31页 |
| 3.2 材料与方法 | 第31-44页 |
| 3.2.1 菌株和质粒 | 第31-32页 |
| 3.2.2 试剂 | 第32页 |
| 3.2.3 主要溶液的配制 | 第32-33页 |
| 3.2.4 仪器 | 第33-34页 |
| 3.2.5 培养基和培养条件 | 第34-35页 |
| 3.2.6 碱裂解法提取大肠杆菌质粒DNA | 第35-36页 |
| 3.2.7 大肠杆菌质粒DNA的少量快速提取及检测 | 第36页 |
| 3.2.8 大肠杆菌TG1总DNA的提取 | 第36页 |
| 3.2.9 乳酸乳球菌质粒DNA的抽提 | 第36-37页 |
| 3.2.10 乳酸乳球菌IL1403总DNA的提取 | 第37页 |
| 3.2.11 大肠杆菌质粒DNA的氯化钙转化感受态制备 | 第37-38页 |
| 3.2.12 大肠杆菌质粒DNA的氯化钙转化 | 第38页 |
| 3.2.13 乳酸乳球菌ATTCC11454电转化感受态制备 | 第38页 |
| 3.2.14 乳酸乳球菌质粒DNA的电击转化 | 第38页 |
| 3.2.15 PCR产物切胶回收 | 第38-39页 |
| 3.2.16 大肠杆菌TG1的谷氨酸脱羧酶基因gadB在乳酸乳球菌MELN4中的克隆与表达 | 第39-40页 |
| 3.2.17 乳酸乳球菌IL1403的谷氨酸脱羧酶系基因gadCB在乳酸乳球菌ATCC11454中的克隆与表达分析 | 第40-44页 |
| 3.3 结果与分析 | 第44-52页 |
| 3.3.1 大肠杆菌TG1的谷氨酸脱羧酶基因gadB在乳酸乳球菌MELN4中的克隆与表达 | 第44-46页 |
| 3.3.1.1 大肠杆菌TG1的谷氨酸脱羧酶基因gadB的PCR | 第44页 |
| 3.3.1.2 重组表达质粒pMG36egadB的酶切和测序验证 | 第44-45页 |
| 3.3.1.3 重组菌MELN4gadB01的PCR验证 | 第45-46页 |
| 3.3.1.4 重组菌MELN4gadB01和原始菌MELN4的谷氨酸脱羧酶酶活测定 | 第46页 |
| 3.3.1.5 重组菌MELN4gadB01和原始菌MELN4的发酵性能测定 | 第46页 |
| 3.3.2 乳酸乳球菌IL1403的谷氨酸脱羧酶系基因gadCB在乳酸乳球菌ATCC11454中的克隆与表达 | 第46-52页 |
| 3.3.2.1 乳酸乳球菌IL1403总DNA的提取 | 第46页 |
| 3.3.2.2 乳酸乳球菌IL1403中谷氨酸脱羧酶系基因gadCB的PCR | 第46-47页 |
| 3.3.2.3 表达载体pMG36e的抽提与酶切 | 第47-48页 |
| 3.3.2.4 重组表达质粒pMG36egad的构建与验证 | 第48-49页 |
| 3.3.2.5 重组菌MELgad104的PCR验证 | 第49-50页 |
| 3.3.2.6 重组菌MELgad104中谷氨酸脱羧酶系的表达 | 第50-51页 |
| 3.3.2.7 重组菌MELgad104和原始菌ATCC11454的发酵性能比较 | 第51-52页 |
| 3.4 本章小结 | 第52-53页 |
| 第四章 结论与展望 | 第53-56页 |
| 4.1 结论 | 第53-54页 |
| 4.2 展望 | 第54-56页 |
| 参考文献 | 第56-61页 |
| 致谢 | 第61页 |
