| 中文摘要 | 第4-7页 |
| Abstract | 第7-10页 |
| 引言 | 第17-19页 |
| 第一篇 文献综述 | 第19-47页 |
| 第1章 新城疫病毒 | 第19-27页 |
| 1.1 新城疫病毒分子生物学 | 第19-21页 |
| 1.1.1 新城疫病毒分类地位与形态特征 | 第19-20页 |
| 1.1.2 新城疫病毒基因组 | 第20页 |
| 1.1.3 新城疫病毒主要结构和功能蛋白 | 第20-21页 |
| 1.2 新城疫病毒基因分型及分子流行病学 | 第21-22页 |
| 1.3 新城疫病毒致病力及分子基础 | 第22-27页 |
| 第2章 新城疫病毒反向遗传学研究进展 | 第27-39页 |
| 2.1 NDV 反向遗传操作技术的进展 | 第28-33页 |
| 2.1.1 NDV 反向遗传操作技术的建立 | 第28-30页 |
| 2.1.2 NDV 反向遗传操作系统 | 第30-33页 |
| 2.2 NDV 反向遗传操作技术的应用 | 第33-39页 |
| 2.2.1 活病毒载体 | 第33-34页 |
| 2.2.2 重组疫苗载体 | 第34-39页 |
| 第3章 鹅细小病毒研究进展 | 第39-47页 |
| 3.1 鹅细小病毒概述 | 第39页 |
| 3.2 鹅细小病毒分子生物学 | 第39-47页 |
| 3.2.1 形态结构与分类地位 | 第39-40页 |
| 3.2.2 基因组结构 | 第40页 |
| 3.2.3 结构蛋白 | 第40-41页 |
| 3.2.4 非结构蛋白 | 第41页 |
| 3.2.5 病毒分子检测技术 | 第41-42页 |
| 3.2.6 抗体检测技术 | 第42-43页 |
| 3.2.7 GPV 疫苗研究进展 | 第43-47页 |
| 第二篇 研究内容 | 第47-111页 |
| 第1章 基于CMV 启动子NDVNA-1 株反向遗传操作系统的建立 | 第47-67页 |
| 1.1 材料 | 第48-49页 |
| 1.1.1 病毒、细胞与载体 | 第48页 |
| 1.1.2 SPF 鸡和 SPF 鸡胚 | 第48页 |
| 1.1.3 主要试剂与仪器 | 第48-49页 |
| 1.2 方法 | 第49-55页 |
| 1.2.1 引物设计与合成 | 第49-50页 |
| 1.2.2 NDV 全基因组 cDNA 克隆及辅助质粒的构建 | 第50-52页 |
| 1.2.3 表达 eGFP 重组 NDV 基因组全长 cDNA 克隆的构建 | 第52页 |
| 1.2.4 病毒的拯救 | 第52-53页 |
| 1.2.5 重组病毒的 RT-PCR 鉴定 | 第53页 |
| 1.2.6 重组病毒的间接免疫荧光鉴定 | 第53-54页 |
| 1.2.7 重组病毒的电镜观察 | 第54页 |
| 1.2.8 rNA-eGFP 复制特性与外源蛋白表达的鉴定 | 第54页 |
| 1.2.9 重组病毒生物学特性测定 | 第54-55页 |
| 1.3 结果 | 第55-64页 |
| 1.3.1 NDV 全基因组 cDNA 克隆及辅助质粒的构建 | 第55-58页 |
| 1.3.2 表达 eGFP 重组 NDV 基因组全长 cDNA 克隆的构建 | 第58页 |
| 1.3.3 重组病毒基因水平鉴定 | 第58-60页 |
| 1.3.4 重组病毒的间接免疫荧光鉴定 | 第60-61页 |
| 1.3.5 重组病毒形态观察 | 第61页 |
| 1.3.6 rNA-eGFP 外源蛋白表达与复制特性的鉴定 | 第61-63页 |
| 1.3.7 重组病毒体外生长特性测定 | 第63页 |
| 1.3.8 重组病毒致病性测定 | 第63-64页 |
| 1.4 讨论 | 第64-66页 |
| 1.5 小结 | 第66-67页 |
| 第2章 鹅源基因 VII 型新城疫病毒 NA-1 致弱株的构建 | 第67-79页 |
| 2.1 材料与方法 | 第68-72页 |
| 2.1.1 细胞和质粒 | 第68页 |
| 2.1.2 SPF 鸡和 SPF 鸡胚 | 第68页 |
| 2.1.3 主要试剂与仪器 | 第68页 |
| 2.1.4 引物设计与合成 | 第68-69页 |
| 2.1.5 NDV NA-1 株 F 裂解位点突变全长 cDNA 克隆构建 | 第69页 |
| 2.1.6 NDV NA-1 株 F 蛋白裂解位点突变病毒拯救 | 第69-70页 |
| 2.1.7 突变株 rmNA-1 的 RT-PCR 鉴定与电镜观察 | 第70页 |
| 2.1.8 突变株 rmNA-1 细胞培养特性检测 | 第70-71页 |
| 2.1.9 突变株 rmNA-1 致病力检测 | 第71页 |
| 2.1.10 突变株 rmNA-1 体外生长动力学曲线 | 第71-72页 |
| 2.1.11 突变株 rmNA-1 遗传稳定性检测 | 第72页 |
| 2.2 结果 | 第72-75页 |
| 2.2.1 NDV NA-1 株 F 裂解位点突变全长 cDNA 克隆构建 | 第72-73页 |
| 2.2.2 突变株 rmNA-1 的 RT-PCR 鉴定与电镜观察 | 第73页 |
| 2.2.3 突变株 rmNA-1 细胞培养特性 | 第73-74页 |
| 2.2.4 突变株 rmNA-1 致病力检测结果 | 第74页 |
| 2.2.5 突变株 rmNA-1 体外生长动力学曲线 | 第74-75页 |
| 2.2.6 突变株 rmNA-1 遗传稳定性检测 | 第75页 |
| 2.3 讨论 | 第75-78页 |
| 2.4 小结 | 第78-79页 |
| 第3章 表达双荧光蛋白重组 NDV 的构建及其生物学特性评价 | 第79-93页 |
| 3.1 材料与方法 | 第80-84页 |
| 3.1.1 细胞和质粒 | 第80页 |
| 3.1.2 SPF 鸡和 SPF 鸡胚 | 第80页 |
| 3.1.3 主要试剂与仪器 | 第80-81页 |
| 3.1.4 引物设计与合成 | 第81页 |
| 3.1.5 双外源基因重组 NDV 全长 cDNA 克隆的构建 | 第81-82页 |
| 3.1.6 病毒的拯救 | 第82页 |
| 3.1.7 拯救病毒 RT-PCR 鉴定 | 第82-83页 |
| 3.1.8 重组病毒的荧光鉴定 | 第83页 |
| 3.1.9 重组病毒的 Western bloting 检测 | 第83页 |
| 3.1.10 病毒滴定及致病力检测 | 第83页 |
| 3.1.11 生长曲线 | 第83-84页 |
| 3.2 结果 | 第84-89页 |
| 3.2.1 双外源基因重组 NDV 全长 cDNA 克隆的构建 | 第84-85页 |
| 3.2.2 拯救病毒 RT-PCR 鉴定 | 第85页 |
| 3.2.3 重组病毒的荧光鉴定 | 第85-86页 |
| 3.2.4 重组病毒的 Western bloting 鉴定 | 第86-87页 |
| 3.2.5 病毒滴定及致病力检测 | 第87-88页 |
| 3.2.6 重组病毒生长曲线 | 第88-89页 |
| 3.3 讨论 | 第89-91页 |
| 3.4 小结 | 第91-93页 |
| 第4章 表达 GPV VP3 蛋白重组 NDV 的构建及其免疫原性分析 | 第93-111页 |
| 4.1 材料 | 第94-95页 |
| 4.1.1 病毒、细胞和质粒 | 第94页 |
| 4.1.2 SPF 鸡、SPF 鸡胚及鹅胚与雏鹅 | 第94-95页 |
| 4.1.3 主要试剂与仪器 | 第95页 |
| 4.2 方法 | 第95-100页 |
| 4.2.1 引物设计与合成 | 第95-96页 |
| 4.2.2 表达 VP3 基因重组 NDV 全长 cDNA 克隆的构建 | 第96页 |
| 4.2.3 病毒的拯救 | 第96-97页 |
| 4.2.4 重组病毒的 RT-PCR 鉴定 | 第97页 |
| 4.2.5 重组病毒的电镜观察 | 第97页 |
| 4.2.6 重组病毒的激光共聚焦检测 | 第97页 |
| 4.2.7 重组病毒的 Western bloting 检测 | 第97-98页 |
| 4.2.8 重组病毒致病性及遗传稳定性检测 | 第98页 |
| 4.2.9 重组病毒体外生长动力学曲线 | 第98-99页 |
| 4.2.10 重组病毒对雏鹅免疫研究 | 第99页 |
| 4.2.11 血清抗体水平测定 | 第99-100页 |
| 4.3 结果 | 第100-107页 |
| 4.3.1 表达 VP3 蛋白重组新城疫病毒的构建 | 第100-101页 |
| 4.3.2 重组病毒的 RT-PCR 鉴定 | 第101-102页 |
| 4.3.3 重组病毒的电镜观察 | 第102页 |
| 4.3.4 重组病毒的激光共聚焦检测 | 第102-103页 |
| 4.3.5 重组病毒的 Western bloting 检测 | 第103-104页 |
| 4.3.6 重组病毒致病性及遗传稳定检测 | 第104-105页 |
| 4.3.7 重组病毒体外生长特性 | 第105页 |
| 4.3.8 重组病毒在雏鹅上免疫效力 | 第105-107页 |
| 4.4 讨论 | 第107-109页 |
| 4.5 小结 | 第109-111页 |
| 结论 | 第111-113页 |
| 参考文献 | 第113-133页 |
| 导师简介 | 第133-135页 |
| 作者简介 | 第135-137页 |
| 攻读学位期间的科研成果 | 第137-139页 |
| 致谢 | 第139页 |
