冰球运动员永生化细胞系建立及其耐力相关基因表达研究
| 摘要 | 第5-6页 |
| Abstract | 第6-7页 |
| 1.前言 | 第8-14页 |
| 1.1 运动员遗传资源保存的现状和方法 | 第8-9页 |
| 1.1.1 运动员遗传资源保存的现状 | 第8页 |
| 1.1.2 运动员遗传资源保存的方法 | 第8-9页 |
| 1.2 永生化细胞概述 | 第9页 |
| 1.3 耐力相关基因概述 | 第9-12页 |
| 1.3.1 耐力相关基因研究现状 | 第9-11页 |
| 1.3.2 耐力相关基因在运动中的意义 | 第11-12页 |
| 1.4 本研究的目的意义 | 第12-14页 |
| 2.实验材料 | 第14-17页 |
| 2.1 实验对象 | 第14页 |
| 2.2 实验所需仪器设备 | 第14-15页 |
| 2.3 实验所需试剂 | 第15-16页 |
| 2.4 实验所需耗材 | 第16-17页 |
| 3.实验方法 | 第17-26页 |
| 3.1 EBV转化B淋巴细胞永生化 | 第17-18页 |
| 3.1.1 血样采集 | 第17页 |
| 3.1.2 外周血B淋巴细胞的制备 | 第17页 |
| 3.1.3 EBV溶液的制备 | 第17页 |
| 3.1.4 EBV转染B淋巴细胞 | 第17-18页 |
| 3.1.5 建立B淋巴细胞永生化细胞系 | 第18页 |
| 3.2 永生化细胞生物学特性鉴定 | 第18-26页 |
| 3.2.1 永生化细胞冻存活率检测 | 第18页 |
| 3.2.2 永生化细胞复苏活率检测 | 第18-19页 |
| 3.2.3 检测复苏永生化细胞活力 | 第19页 |
| 3.2.4 永生化细胞核型分析 | 第19-20页 |
| 3.2.5 永生化细胞凋亡检测 | 第20页 |
| 3.2.6 永生化细胞细胞周期检测 | 第20页 |
| 3.2.7 永生化细胞DNA的提取 | 第20-21页 |
| 3.2.8 永生化细胞表面标志物检测 | 第21-22页 |
| 3.2.9 阳性率检测 | 第22-23页 |
| 3.2.10 免疫荧光 | 第23-24页 |
| 3.2.11 qPCR | 第24页 |
| 3.2.12 Western Blot | 第24-26页 |
| 4.结果分析 | 第26-38页 |
| 4.1 EBV转化B淋巴细胞永生化 | 第26-30页 |
| 4.1.1 B95-8细胞的复苏和培养 | 第26-27页 |
| 4.1.2 B95-8细胞传代 | 第27页 |
| 4.1.3 B95-8细胞冻存 | 第27-28页 |
| 4.1.4 EBV溶液的制备 | 第28页 |
| 4.1.5 EBV和B淋巴细胞共培养 | 第28-29页 |
| 4.1.6 永生化细胞培养 | 第29-30页 |
| 4.2 永生化细胞生物学特性鉴定 | 第30-35页 |
| 4.2.1 永生化细胞复苏活率和冻存活率检测 | 第30页 |
| 4.2.2 永生化细胞复苏后活力检测 | 第30-31页 |
| 4.2.3 永生化细胞核型分析 | 第31-32页 |
| 4.2.4 细胞凋亡流式图分析 | 第32-33页 |
| 4.2.5 细胞周期流式图分析 | 第33页 |
| 4.2.6 表面标志物检测 | 第33-34页 |
| 4.2.7 阳性率检测 | 第34页 |
| 4.2.8 免疫荧光检测 | 第34-35页 |
| 4.3 耐力基因表达量检测 | 第35-38页 |
| 4.3.1 PCR检测 | 第35-36页 |
| 4.3.2 qPCR检测 | 第36页 |
| 4.3.3 Western Blot | 第36-38页 |
| 5.讨论 | 第38-48页 |
| 5.1 永生化细胞培养 | 第38-42页 |
| 5.1.1 细胞污染 | 第38页 |
| 5.1.2 无菌条件 | 第38-39页 |
| 5.1.3 血清的选择 | 第39-40页 |
| 5.1.4 换液和传代 | 第40页 |
| 5.1.5 培养环境 | 第40页 |
| 5.1.6 培养基的pH值 | 第40-41页 |
| 5.1.7 细胞冻存 | 第41页 |
| 5.1.8 PHA的使用 | 第41页 |
| 5.1.9 CyA的使用 | 第41页 |
| 5.1.10 实验后消毒操作 | 第41-42页 |
| 5.2 永生化细胞生物学特性 | 第42-46页 |
| 5.2.1 细胞密度及细胞计数 | 第42页 |
| 5.2.2 冻存和复苏细胞活率检测 | 第42-43页 |
| 5.2.3 绘制细胞生长曲线评判细胞活力 | 第43页 |
| 5.2.4 核型 | 第43-44页 |
| 5.2.5 细胞凋亡检测 | 第44页 |
| 5.2.6 细胞周期检测 | 第44-45页 |
| 5.2.7 表面标志物检测 | 第45页 |
| 5.2.8 阳性率检测 | 第45页 |
| 5.2.9 免疫荧光检测 | 第45-46页 |
| 5.3 耐力基因检测 | 第46-48页 |
| 5.3.1 RT-PCR | 第46-47页 |
| 5.3.2 qPCR | 第47页 |
| 5.3.3 Western Blot | 第47-48页 |
| 6.结论 | 第48-49页 |
| 致谢 | 第49-50页 |
| 参考文献 | 第50-54页 |
| 个人简历 | 第54页 |
