摘要 | 第7-9页 |
Abstract | 第9-11页 |
缩略词表 | 第12-14页 |
第一章 文献综述 | 第14-39页 |
1 先天性免疫 | 第14-34页 |
1.1 先天性免疫识别受体 | 第14-27页 |
1.1.1 TLR及其成员间功能差异性 | 第15-18页 |
1.1.2 RLR及其成员间功能差异性 | 第18-23页 |
1.1.3 NLR及其成员间功能差异性 | 第23-26页 |
1.1.4 PRR成员之间的协作与互相调控 | 第26-27页 |
1.2 IFN | 第27-34页 |
1.2.1 IFN的发现及其功能 | 第27-29页 |
1.2.2 IFN的诱导和翻译后修饰在干扰素调控过程中的作用 | 第29-32页 |
1.2.3 鱼类与哺乳动物IFN的差异 | 第32-34页 |
2 草鱼出血病及其免疫学研究进展 | 第34-37页 |
2.1 草鱼呼肠孤病毒 | 第34-35页 |
2.2 草鱼抗GCRV感染IFN系统 | 第35-37页 |
3 本研究问题的由来、目的和意义 | 第37-39页 |
第二章 试验材料和试验方法 | 第39-59页 |
1 试验材料 | 第39-44页 |
1.1 实验鱼、细胞和病毒 | 第39页 |
1.2 实验试剂 | 第39-43页 |
1.2.1 核酸提取相关试剂 | 第39页 |
1.2.2 载体构建相关试剂 | 第39-40页 |
1.2.3 细胞试验相关试剂 | 第40-41页 |
1.2.4 实时荧光定量PCR(real-time quantitative PCR, RT-qPCR)相关试剂 | 第41页 |
1.2.5 免疫印迹(Immumoblotting, IB)和免疫沉淀(Immunoprecipitation, IP)相关试剂 | 第41-42页 |
1.2.5 试验所需溶液配制 | 第42-43页 |
1.3 试验仪器设备 | 第43-44页 |
2 试验方法 | 第44-59页 |
2.1 DNA和RNA提取 | 第44-45页 |
2.1.1 DNA提取 | 第44-45页 |
2.1.2 总RNA提取 | 第45页 |
2.2 反转录 | 第45-46页 |
2.3 载体构建 | 第46-48页 |
2.4 细胞试验相关操作 | 第48-52页 |
2.4.1 细胞传代、冻存和解冻 | 第48-50页 |
2.4.2 细胞瞬时与稳定转染 | 第50-51页 |
2.4.3 GCRV和poly(I:C)处理细胞 | 第51页 |
2.4.4 细胞取样 | 第51-52页 |
2.5 细胞活性检测 | 第52页 |
2.6 双荧光素酶报告试验 | 第52-54页 |
2.7 IB及IP试验 | 第54-55页 |
2.8 激光共聚焦试验 | 第55-56页 |
2.9 RT-qPCR和半定量PCR (Semi-qPCR) | 第56-58页 |
2.10 数据处理与统计学分析 | 第58-59页 |
第三章 试验结果与分析 | 第59-82页 |
1 草鱼RIG-I和MDA5诱导了不同IFN的表达 | 第59-67页 |
1.1 未受到免疫刺激的情况下,RIG-I和MDA5对IFN基因表达的影响 | 第59-61页 |
1.2 GCRV或poly(I:C)刺激下,MDA5比RIG-I诱导出更强的IFN免疫应答 | 第61-67页 |
2 草鱼RIG-I和MDA5对IRF3和IRF7的影响 | 第67-78页 |
2.1 未受到免疫刺激的情况下,MDA5和RIG-I对IRF3和IRF7的表达无显著影响 | 第67-69页 |
2.2 IRF3和IRF7在CIK细胞抗GCRV感染中起到积极作用 | 第69-72页 |
2.3 RIG-I和MDA5不同程度地促进IRF3和IRF7的磷酸化 | 第72-76页 |
2.4 RIG-I和MDA5不同地诱导了IRF3和IRF7的二聚化 | 第76-78页 |
3 草鱼IRF3和IRF7不同的二聚化作用诱导不同的I型IFN应答 | 第78-80页 |
4 草鱼RIG-I和MDA5不同地影响IL-4 和IL-12p40的表达 | 第80-82页 |
第四章 讨论 | 第82-89页 |
全文总结与展望 | 第89-90页 |
参考文献 | 第90-122页 |
作者简历 | 第122-125页 |
致谢 | 第125-127页 |