| 摘要 | 第4-5页 |
| Abstract | 第5-6页 |
| 引言 | 第10-11页 |
| 1 文献综述 | 第11-27页 |
| 1.1 昆虫生长发育 | 第11-14页 |
| 1.1.1 昆虫的发育与变态 | 第11-12页 |
| 1.1.2 昆虫的生殖 | 第12-13页 |
| 1.1.3 叶酸在昆虫生长发育中的作用 | 第13-14页 |
| 1.2 二氢叶酸还原酶 | 第14-19页 |
| 1.2.1 二氢叶酸还原酶的基本性质 | 第14-15页 |
| 1.2.2 二氢叶酸还原酶的功能 | 第15-18页 |
| 1.2.3 昆虫DHFR的研究进展 | 第18-19页 |
| 1.3 二氢叶酸还原酶抑制剂 | 第19-23页 |
| 1.3.1 抗癌药物氨甲蝶呤(Methotreate,MTX) | 第19-20页 |
| 1.3.2 其他抑制剂 | 第20页 |
| 1.3.3 二氢叶酸还原酶抑制剂对生物体的影响 | 第20-21页 |
| 1.3.4 二氢叶酸还原酶抑制剂诱发生物体功能异常的分子机制 | 第21-23页 |
| 1.4 RNA干扰技术在昆虫基因功能研究中的应用 | 第23-25页 |
| 1.4.1 RNAi技术的原理 | 第23-24页 |
| 1.4.2 鳞翅目昆虫的RNAi | 第24-25页 |
| 1.5 本论文的研究意义与内容 | 第25-27页 |
| 1.5.1 选题依据 | 第25-26页 |
| 1.5.2 研究内容 | 第26-27页 |
| 2 亚洲玉米螟二氢叶酸还原酶基因的调取与序列分析 | 第27-42页 |
| 2.1 引言 | 第27页 |
| 2.2 实验材料与方法 | 第27-31页 |
| 2.2.1 实验动物 | 第27-28页 |
| 2.2.2 总RNA提取 | 第28页 |
| 2.2.3 cDNA的合成 | 第28-29页 |
| 2.2.4 基因获取策略 | 第29页 |
| 2.2.5 PCR扩增 | 第29-30页 |
| 2.2.6 3’RACE技术 | 第30页 |
| 2.2.7 5’RACE技术 | 第30-31页 |
| 2.2.8 3’RACE和5’RACE序列验证 | 第31页 |
| 2.2.9 克隆载体的构建及测序 | 第31页 |
| 2.2.10 生物信息学分析 | 第31页 |
| 2.3 实验结果 | 第31-40页 |
| 2.3.1 洲玉米螟RNA提取 | 第31-32页 |
| 2.3.2 PCR扩增 | 第32-33页 |
| 2.3.3 3’RACE | 第33-34页 |
| 2.3.4 5’RACE | 第34页 |
| 2.3.5 3’RACE和5’RACE序列验证 | 第34-35页 |
| 2.3.6 克隆载体的构建及测序 | 第35页 |
| 2.3.7 生物信息学分析 | 第35-40页 |
| 2.4 结果分析与讨论 | 第40-41页 |
| 2.5 小结 | 第41-42页 |
| 3 二氢叶酸还原酶基因表达模式研究 | 第42-49页 |
| 3.1 引言 | 第42页 |
| 3.2 实验材料与方法 | 第42-44页 |
| 3.2.1 洲玉米螟的人工饲养技术 | 第42-43页 |
| 3.2.2 Quantitative real-time PCR反应及标准曲线的建立及定量方法 | 第43页 |
| 3.2.3 二氢叶酸还原酶基因在玉米螟不同生长时期的表达情况 | 第43-44页 |
| 3.2.4 二氢叶酸还原酶在玉米螟不同组织中的表达 | 第44页 |
| 3.3 实验结果 | 第44-47页 |
| 3.3.1 Quantitative real-time PCR反应及标准曲线的建立 | 第44-45页 |
| 3.3.2 二氢叶酸还原酶基因在玉米螟不同生长时期的表达 | 第45-46页 |
| 3.3.3 二氢叶酸还原酶基因在玉米螟不同组织中的表达 | 第46-47页 |
| 3.4 结果分析与讨论 | 第47-48页 |
| 3.5 小结 | 第48-49页 |
| 4 OfDHFR的RNA干扰及干扰后的表型分析 | 第49-56页 |
| 4.1 引言 | 第49页 |
| 4.2 实验方法 | 第49-51页 |
| 4.2.1 用于合成dsRNA的模板DNA的制备 | 第49页 |
| 4.2.2 双链RNA的合成 | 第49-50页 |
| 4.2.3 5龄幼虫的RNA干扰 | 第50页 |
| 4.2.4 雌性成虫的RNA干扰 | 第50-51页 |
| 4.3 实验结果 | 第51-55页 |
| 4.3.1 用于合成dsRNA的模板DNA的制备 | 第51页 |
| 4.3.2 dsRNA的合成 | 第51-52页 |
| 4.3.3 5龄幼虫的RNAi水平检测和表型分析 | 第52-53页 |
| 4.3.4 雌性成虫的RNAi水平检测和表型分析 | 第53-55页 |
| 4.4 结果分析与讨论 | 第55页 |
| 4.5 小结 | 第55-56页 |
| 5 抑制剂氨甲蝶呤对玉米螟生长发育的影响 | 第56-63页 |
| 5.1 引言 | 第56页 |
| 5.2 实验材料与方法 | 第56-57页 |
| 5.2.1 供试药剂：氨甲蝶呤(MTX)购自上海源叶生物 | 第56页 |
| 5.2.2 喂食MTX对玉米螟生长发育的影响 | 第56页 |
| 5.2.3 喂食MTX对玉米螟体内DHFR基因表达水平的影响 | 第56-57页 |
| 5.3 实验结果 | 第57-61页 |
| 5.3.1 喂食MTX对玉米螟死亡率的影响 | 第57页 |
| 5.3.2 喂食MTX对玉米螟生长发育的影响 | 第57-59页 |
| 5.3.3 喂食MTX对玉米螟化蛹率的影响 | 第59页 |
| 5.3.4 喂食MTX对玉米螟羽化率的影响 | 第59-60页 |
| 5.3.5 喂食MTX对玉米螟体内OfDHFR基因表达水平的影响 | 第60-61页 |
| 5.4 结果分析与讨论 | 第61-62页 |
| 5.5 小结 | 第62-63页 |
| 结论 | 第63-64页 |
| 参考文献 | 第64-68页 |
| 附录A OfDHFR的cDNA序列与编码的氨基酸序列 | 第68-69页 |
| 攻读硕士学位期间发表学术论文情况 | 第69-70页 |
| 致谢 | 第70-71页 |
