| 摘要 | 第4-9页 |
| ABSTRACT | 第9-15页 |
| 缩略词 | 第19-20页 |
| 第一章 综述 | 第20-40页 |
| 1.1 催乳素的研究现状 | 第20-31页 |
| 1.1.1 催乳素的结构 | 第20-21页 |
| 1.1.2 PRL的信号通路 | 第21-28页 |
| 1.1.2.1 PRL诱导PRLR二聚化 | 第22-23页 |
| 1.1.2.2 JAK2酪氨酸磷酸化 | 第23-24页 |
| 1.1.2.3 JAK2的活化 | 第24页 |
| 1.1.2.4 PRLR的磷酸化 | 第24-26页 |
| 1.1.2.5 Stat二聚化诱导靶基因 | 第26-28页 |
| 1.1.3 催乳素的功能 | 第28-29页 |
| 1.1.4 催乳素与乳腺癌的关系 | 第29-31页 |
| 1.2 染色质免疫共沉淀(ChIP) | 第31-40页 |
| 1.2.1 ChIP的基本原理与步骤 | 第32-34页 |
| 1.2.1.1 交联 | 第32-33页 |
| 1.2.1.2 染色质片段化 | 第33页 |
| 1.2.1.3 杂交 | 第33-34页 |
| 1.2.2 ChIP结果的检测 | 第34页 |
| 1.2.3 ChIP-seq数据分析 | 第34-38页 |
| 1.2.3.1 获得Clean Reads | 第34-35页 |
| 1.2.3.2 Peaks扫描 | 第35-38页 |
| 1.2.3.3 生物信息学分析 | 第38页 |
| 1.2.4 ChIP-seq和RNA-seq联合分析 | 第38-40页 |
| 第二章 乳腺特异性转PRL基因载体的构建与检测 | 第40-59页 |
| 摘要 | 第40-41页 |
| 2.1 材料与试剂 | 第41-42页 |
| 2.1.1 材料 | 第41页 |
| 2.1.2 分子克隆试剂 | 第41-42页 |
| 2.1.3 细胞转染与检测试剂 | 第42页 |
| 2.2 仪器与设备 | 第42-43页 |
| 2.3 实验方法 | 第43-45页 |
| 2.3.1 PRL基因的克隆 | 第43-44页 |
| 2.3.2 乳腺特异表达载体的构建 | 第44页 |
| 2.3.3 Bcap-37细胞转染与检测 | 第44-45页 |
| 2.4 结果 | 第45-56页 |
| 2.4.1 PRL基因的克隆 | 第45-46页 |
| 2.4.2 乳腺特异表达水牛PRL基因载体的构建 | 第46-53页 |
| 2.4.2.1 PRL片段插入 | 第47页 |
| 2.4.2.2 BCN启动子的插入 | 第47页 |
| 2.4.2.3 标记基因表达元件的插入 | 第47-53页 |
| 2.4.3 PRL转基因载体转染Bcap-37细胞与检测 | 第53-56页 |
| 2.5 讨论 | 第56-58页 |
| 2.6 结论 | 第58-59页 |
| 第三章 乳腺特异性表达PRL基因小鼠模型的建立与分析 | 第59-82页 |
| 摘要 | 第59-60页 |
| 3.1 材料与试剂 | 第60-61页 |
| 3.2 仪器与设备 | 第61页 |
| 3.3 实验方法 | 第61-68页 |
| 3.3.1 转基因载体的纯化与转基因小鼠的制备 | 第61-62页 |
| 3.3.2 转基因小鼠PCR鉴定 | 第62页 |
| 3.3.3 Southern Blot分析 | 第62-63页 |
| 3.3.4 EGFP表达荧光检测 | 第63页 |
| 3.3.5 转基因小鼠的扩繁 | 第63-64页 |
| 3.3.6 外源基因拷贝数分析 | 第64-65页 |
| 3.3.7 外源基因整合位点检测 | 第65-66页 |
| 3.3.8 Western Blot检测外源PRL基因的表达 | 第66页 |
| 3.3.9 ELISA检测外源PRL基因的表达 | 第66-67页 |
| 3.3.10 QRT-PCR检测外源PRL表达对乳汁分泌相关基因的影响 | 第67页 |
| 3.3.11 外源PRL基因的表达对转基因小鼠生殖情况的影响 | 第67-68页 |
| 3.4 结果 | 第68-79页 |
| 3.4.1 转PRL基因小鼠的制备 | 第68页 |
| 3.4.2 转基因小鼠的鉴定 | 第68-74页 |
| 3.4.2.1 F0代小鼠鉴定 | 第68-69页 |
| 3.4.2.2 F0代小鼠荧光检测 | 第69-70页 |
| 3.4.2.3 子代转基因小鼠的检测 | 第70-71页 |
| 3.4.2.4 转基因小鼠外源基因拷贝数分析 | 第71-72页 |
| 3.4.2.5 转基因小鼠外源基因整合位点分析 | 第72-74页 |
| 3.4.3 转基因小鼠的分析 | 第74-76页 |
| 3.4.3.1 转基因小鼠组织中PRL基因的表达 | 第74页 |
| 3.4.3.2 转基因小鼠乳汁中PRL蛋白表达分析 | 第74-75页 |
| 3.4.3.3 转基因小鼠乳汁中PRL蛋白含量测定 | 第75-76页 |
| 3.4.4 外源PRL蛋白表达对乳汁生成相关基因表达的影响 | 第76-77页 |
| 3.4.5 转基因小鼠的安全性检测 | 第77-79页 |
| 3.4.5.1 外源PRL蛋白表达对转基因小鼠血清中PRL含量的影响 | 第77-78页 |
| 3.4.5.2 外源PRL蛋白表达对转基因小鼠产仔数的影响 | 第78-79页 |
| 3.5 讨论 | 第79-81页 |
| 3.6 结论 | 第81-82页 |
| 第四章 转录因子Stat5a靶基因的筛选与分析 | 第82-113页 |
| 摘要 | 第82-83页 |
| 4.1 材料与试剂 | 第83-84页 |
| 4.2 仪器与设备 | 第84页 |
| 4.3 实验方法 | 第84-90页 |
| 4.3.1 QRT-PCR检测Stats基因的表达情况 | 第84-85页 |
| 4.3.2 乳腺组织样本的准备 | 第85页 |
| 4.3.3 小鼠乳腺组织ChP | 第85-87页 |
| 4.3.4 小鼠RNA-seq样本的制备与测序 | 第87页 |
| 4.3.5 数据分析 | 第87-89页 |
| 4.3.6 QRT-PCR验证RNA-seq数据准确性 | 第89-90页 |
| 4.4 结果与分析 | 第90-109页 |
| 4.4.1 乳腺不同发育阶段Stats的表达分析 | 第90-91页 |
| 4.4.2 ChIP-seq数据分析 | 第91-97页 |
| 4.4.2.1 Reads数据统计 | 第91页 |
| 4.4.2.2 Reads覆盖深度 | 第91-92页 |
| 4.4.2.3 Peaks数据统计 | 第92-93页 |
| 4.4.2.4 Peaks在基因组中的分布 | 第93-94页 |
| 4.4.2.5 样本间Peaks差异分析 | 第94页 |
| 4.4.2.6 Peaks相关基因差异分析 | 第94-95页 |
| 4.4.2.7 Peaks相关基因GO聚类分析 | 第95-97页 |
| 4.4.3 RNA-seq数据分析 | 第97-101页 |
| 4.4.3.1 Reads数据的统计 | 第97页 |
| 4.4.3.2 测序结果可靠性分析 | 第97-98页 |
| 4.4.3.3 基因覆盖度分析 | 第98-100页 |
| 4.4.3.4 基因表达差异分析 | 第100页 |
| 4.4.3.5 RNA-seq数据分析中表达差异基因的验证 | 第100-101页 |
| 4.4.3.6 表达差异基因的GO聚类分析 | 第101页 |
| 4.4.4 ChIP-seq联合RNA-seq数据分析 | 第101-109页 |
| 4.4.4.1 Stat5a在靶位点的结合对靶基因表达的影响 | 第101-106页 |
| 4.4.4.2 转录因子Stat5a在乳腺细胞分化中的作用分析 | 第106-109页 |
| 4.4.4.3 外源PRL基因表达对Stat5a靶基因的影响 | 第109页 |
| 4.5 讨论 | 第109-113页 |
| 4.6 结论 | 第113页 |
| 参考文献 | 第113-131页 |
| 致谢 | 第131-132页 |
| 攻读学位期间发表论文情况 | 第132页 |
