| 摘要 | 第5-10页 |
| Abstract | 第10-16页 |
| 英文缩写词(Abbreviations) | 第21-22页 |
| 引言 | 第22-25页 |
| 第一章 杜氏盐藻RBX1多克隆抗体的制备 | 第25-44页 |
| 1 材料与方法 | 第25-34页 |
| 1.1 实验材料 | 第25-28页 |
| 1.1.1 主要设备仪器 | 第25-26页 |
| 1.1.2 主要试剂及试剂盒 | 第26-27页 |
| 1.1.3 常用试剂配制 | 第27-28页 |
| 1.1.4 质粒和菌株 | 第28页 |
| 1.1.5 引物 | 第28页 |
| 1.2 实验方法 | 第28-34页 |
| 1.2.1 杜氏盐藻总RNA的提取与cDNA模板制备 | 第28-29页 |
| 1.2.2 扩增杜氏盐藻RBX1基因的cDNA片段 | 第29页 |
| 1.2.3 杜氏盐藻RBX1基因的鉴定 | 第29-30页 |
| 1.2.4 杜氏盐藻RBX1基因 3'端的扩增及鉴定 | 第30-31页 |
| 1.2.5 杜氏盐藻RBX1基因的序列全长拼接及验证 | 第31页 |
| 1.2.6 pET28a-DsRBX1载体的构建及原核表达 | 第31-33页 |
| 1.2.7 DsRBX1蛋白的大量表达和纯化 | 第33页 |
| 1.2.8 DsRBX1多克隆抗体的制备 | 第33-34页 |
| 2 结果 | 第34-42页 |
| 2.1 DsRBX1基因cDNA片段的扩增 | 第34页 |
| 2.2 DsRBX1基因的 3'端cDNA | 第34-35页 |
| 2.3 DsRBX1 cDNA序列的克隆与分析 | 第35-39页 |
| 2.4 原核表达载体pET28a-DsRBX1的鉴定 | 第39页 |
| 2.5 DsRBX1融合蛋白的表达和纯化 | 第39-40页 |
| 2.6 抗血清效价的测定 | 第40-42页 |
| 3 讨论 | 第42-43页 |
| 4 小结 | 第43-44页 |
| 第二章 RBX1对杜氏盐藻鞭毛调控作用的初步研究 | 第44-50页 |
| 1 材料与方法 | 第44-46页 |
| 1.1 实验材料 | 第44-45页 |
| 1.1.1 主要仪器设备 | 第44页 |
| 1.1.2 主要试剂 | 第44-45页 |
| 1.2 实验方法 | 第45-46页 |
| 1.2.1 RT-PCR | 第45页 |
| 1.2.2 Western Blotting | 第45-46页 |
| 2 结果 | 第46-48页 |
| 2.1 DsRBX1在杜氏盐藻鞭毛解聚时RNA水平的变化 | 第46-47页 |
| 2.2 DsRBX1在杜氏盐藻鞭毛解聚时蛋白水平的变化 | 第47-48页 |
| 3 讨论 | 第48-49页 |
| 4 小结 | 第49-50页 |
| 第三章 RBX1在食管鳞癌发生发展中的作用 | 第50-86页 |
| 1 材料与方法 | 第53-64页 |
| 1.1 实验材料 | 第53-55页 |
| 1.1.1 组织标本来源 | 第53页 |
| 1.1.2 细胞株 | 第53-54页 |
| 1.1.3 实验动物及饲养 | 第54页 |
| 1.1.4 主要试剂、试剂盒及抗体 | 第54页 |
| 1.1.5 主要仪器 | 第54-55页 |
| 1.2 实验方法 | 第55-64页 |
| 1.2.1 免疫组化检测RBX1在食管鳞癌组织中表达 | 第55页 |
| 1.2.2 Western blotting | 第55-57页 |
| 1.2.3 RBX1基因干扰靶点设计 | 第57页 |
| 1.2.4 RBX1基因干扰慢病毒载体的包装与滴度测定 | 第57-59页 |
| 1.2.5 RBX1的shRNA慢病毒感染 | 第59页 |
| 1.2.6 细胞增殖的检测 | 第59-60页 |
| 1.2.7 细胞周期的检测 | 第60页 |
| 1.2.8 细胞凋亡的检测 | 第60-61页 |
| 1.2.9 细胞迁移的检测 | 第61页 |
| 1.2.10 细胞纤毛的检测 | 第61-62页 |
| 1.2.11 EC9706细胞接种裸鼠 | 第62页 |
| 1.2.12 移植瘤组织的HE染色、免疫组化染色及凋亡检测 | 第62-64页 |
| 2 结果 | 第64-83页 |
| 2.1 RBX1在食管鳞癌组织中的表达 | 第64-65页 |
| 2.2 RBX1在三株细胞中的表达 | 第65页 |
| 2.3 shRBX1慢病毒的滴度 | 第65-66页 |
| 2.4 shRBX1慢病毒感染EC1细胞的预实验结果 | 第66页 |
| 2.5 shRBX1慢病毒感染EC1细胞 | 第66-67页 |
| 2.6 三株shRBX1慢病毒感染效果的判断 | 第67-68页 |
| 2.7 shRBX1干扰对三株细胞后对细胞增殖的影响 | 第68-70页 |
| 2.8 shRBX1干扰对三株细胞后对细胞周期的影响 | 第70-72页 |
| 2.9 shRBX1干扰对三株细胞后对细胞侵袭的影响 | 第72-73页 |
| 2.10 shRBX1干扰对三株细胞后对细胞凋亡的影响 | 第73-76页 |
| 2.11 shRBX1干扰三株细胞后对细胞纤毛的影响 | 第76-79页 |
| 2.12 shRBX1干扰后对移植瘤的作用 | 第79-81页 |
| 2.13 移植瘤组织的HE染色结果 | 第81-82页 |
| 2.14 移植瘤组织的免疫组染色结果 | 第82页 |
| 2.15 移植瘤组织的凋亡的检测 | 第82-83页 |
| 3 讨论 | 第83-85页 |
| 4 小结 | 第85-86页 |
| 第四章 RBX1调控食管鳞癌发生的分子机制 | 第86-98页 |
| 1 材料与方法 | 第88-90页 |
| 1.1 实验材料 | 第88页 |
| 1.2 实验方法 | 第88-90页 |
| 1.2.1 细胞总蛋白质提取 | 第88-89页 |
| 1.2.2 Western blotting | 第89-90页 |
| 1.2.3 pcDNA3.1- RBX1转染Het-1A细胞 | 第90页 |
| 2 结果 | 第90-96页 |
| 2.1 shRBX1干扰三株细胞后抑制了抗凋亡蛋白Bcl-2 的表达 | 第90-91页 |
| 2.2 shRBX1干扰三株细胞后增加了E-cadherin的表达 | 第91-92页 |
| 2.3 shRBX1干扰三株细胞后抑制了Aurora A的表达 | 第92-93页 |
| 2.4 shRBX1干扰三株细胞后抑制了m TOR信号通路的活性 | 第93-94页 |
| 2.5 pcDNA3.1- RBX1转染Het-1A细胞 | 第94-96页 |
| 3 讨论 | 第96-97页 |
| 4 小结 | 第97-98页 |
| 参考文献 | 第98-102页 |
| 结论 | 第102-103页 |
| 综述 | 第103-118页 |
| 参考文献 | 第111-118页 |
| 博士期间参加的学术会议 | 第118-119页 |
| 致谢 | 第119页 |
