| 摘要 | 第3-5页 |
| Abstract | 第5页 |
| 前言 | 第8页 |
| 1 材料与方法 | 第8-21页 |
| 1.1 实验材料 | 第8-12页 |
| 1.1.1 研究对象 | 第8页 |
| 1.1.2 主要试剂/试剂盒 | 第8-9页 |
| 1.1.3 主要设备 | 第9页 |
| 1.1.4 主要试剂的配制 | 第9-10页 |
| 1.1.4.1 EDTA配制 | 第9页 |
| 1.1.4.2 DMEM培养基 | 第9页 |
| 1.1.4.3 0.25%胰蛋白酶 | 第9页 |
| 1.1.4.4 细胞冻存液 | 第9-10页 |
| 1.1.4.5 TAE琼脂糖凝胶电泳缓冲液(PH8.0)1L | 第10页 |
| 1.1.4.6 10×磷酸盐缓冲液 | 第10页 |
| 1.1.4.7 10×转膜缓冲液 | 第10页 |
| 1.1.4.8 NC膜洗脱液 | 第10页 |
| 1.1.4.9 5mg/mL的MTT溶液 | 第10页 |
| 1.1.5 细胞培养 | 第10-12页 |
| 1.1.5.1 细胞株的冻存 | 第10-11页 |
| 1.1.5.2 细胞复苏 | 第11页 |
| 1.1.5.3 细胞传代 | 第11页 |
| 1.1.5.4 细胞计数 | 第11-12页 |
| 1.2 慢病毒载体介导沉默EN2 | 第12-15页 |
| 1.2.1 Lentivirus病毒包装 | 第12-13页 |
| 1.2.2 病毒的收获及浓缩 | 第13页 |
| 1.2.3 孔稀释法测定Lentivirus滴度 | 第13-14页 |
| 1.2.4 慢病毒感染HK-2 细胞 | 第14-15页 |
| 1.3 RT-qPCR检测各处理组EN2 mRNA的表达水平 | 第15-17页 |
| 1.3.1 总RNA抽提 | 第15页 |
| 1.3.2 总RNA纯度和完整性检测 | 第15-16页 |
| 1.3.3 逆转录 | 第16-17页 |
| 1.3.4 定量PCR | 第17页 |
| 1.4 westernblot检测各处理组EN2蛋白的表达水平 | 第17-18页 |
| 1.4.1 总蛋白抽提 | 第17页 |
| 1.4.2 SDS-PAGE电泳 | 第17页 |
| 1.4.3 蛋白质转移 | 第17-18页 |
| 1.4.4 免疫印记 | 第18页 |
| 1.5 MTT检测细胞增殖 | 第18-19页 |
| 1.6 流式检测细胞凋亡 | 第19页 |
| 1.7 流式检测细胞周期 | 第19-20页 |
| 1.8 transwell检测细胞侵袭能力 | 第20页 |
| 1.9 细胞划痕试验检测慢病毒干扰后细胞迁移能力 | 第20-21页 |
| 1.10 统计学处理 | 第21页 |
| 2 结果 | 第21-29页 |
| 2.1 转染后细胞倒置荧光镜下观 | 第21-22页 |
| 2.2 RT-qPCR显示Lv-shEN2组EN2 mRNA的表达明显下调 | 第22-24页 |
| 2.2.1 总RNA的提取 | 第22页 |
| 2.2.2 EN2 mRNA的定量分析 | 第22-24页 |
| 2.3 成功抑制HK-2 细胞中EN2蛋白的表达 | 第24页 |
| 2.4 抑制EN2的表达可促进HK-2 细胞增殖活性 | 第24-25页 |
| 2.5 Lv-shEN2转染组活性细胞数目增加 | 第25-26页 |
| 2.6 下调HK-2 细胞中EN2的表达能抑制细胞凋亡 | 第26-27页 |
| 2.7 抑制HK-2 细胞中EN2的表达能增强侵袭能力 | 第27-28页 |
| 2.8 各组细胞迁移能力无显著差异 | 第28-29页 |
| 3 讨论 | 第29-34页 |
| 3.1 同源异型盒基因与肿瘤发生的关系 | 第29-30页 |
| 3.2 Engrailed-2 基因与肿瘤发生的关系 | 第30-31页 |
| 3.3 Engrailed-2 基因发挥抑癌基因的作用 | 第31-34页 |
| 4 结论 | 第34页 |
| 参考文献 | 第34-39页 |
| 致谢 | 第39-40页 |
| 在学期间发表论文清单 | 第40页 |
