| 摘要 | 第5-7页 |
| Abstract | 第7-8页 |
| 缩写与符号 | 第14-15页 |
| 第一章 绪论 | 第15-23页 |
| 1.1 油菜在我国农业生产中的地位 | 第15页 |
| 1.2 影响油菜生产的重要限制因素 | 第15-19页 |
| 1.2.1 核盘菌对油菜农业生产的影响 | 第15-16页 |
| 1.2.2 种子萌发速度对油菜生产的影响 | 第16-18页 |
| 1.2.3 种子含油量对油菜生产的影响 | 第18-19页 |
| 1.3 植物GDSL脂肪酶研究进展 | 第19-20页 |
| 1.3.1 植物GDSL脂肪酶结构特点 | 第19-20页 |
| 1.3.2 植物GDSL脂肪酶功能应用 | 第20页 |
| 1.4 研究目的和意义 | 第20-21页 |
| 1.5 研究内容和技术路线 | 第21-23页 |
| 1.5.1 主要研究内容 | 第21-22页 |
| 1.5.2 技术路线 | 第22-23页 |
| 第二章 AtGDSL1和BnGDSL1序列生物信息学比较分析 | 第23-31页 |
| 2.1 材料 | 第23页 |
| 2.2 方法 | 第23-24页 |
| 2.2.1 保守结构域和二级结构分析 | 第23页 |
| 2.2.2 理化性质等分析 | 第23页 |
| 2.2.3 序列比对和进化树分析 | 第23-24页 |
| 2.3 结果与分析 | 第24-30页 |
| 2.3.1 AtGDSL1保守结构域及二级结构分析 | 第24页 |
| 2.3.2 AtGDSL1理化性质分析 | 第24-25页 |
| 2.3.3 AtGDSL1跨膜结构和信号肽分析 | 第25-26页 |
| 2.3.4 AtGDSL1蛋白序列亚细胞定位 | 第26-27页 |
| 2.3.5 AtGDSL1磷酸化、糖基化位点预测 | 第27-28页 |
| 2.3.6 AtGDSL1序列同源性以及进化树分析 | 第28-30页 |
| 2.4 讨论与小结 | 第30-31页 |
| 第三章 AtGDSL1脂肪酶功能验证 | 第31-44页 |
| 3.1 材料与试剂 | 第31-33页 |
| 3.1.1 菌种材料 | 第31页 |
| 3.1.2 主要试剂 | 第31-32页 |
| 3.1.3 基本溶液的配制 | 第32-33页 |
| 3.1.4 主要仪器设备 | 第33页 |
| 3.2 方法 | 第33-38页 |
| 3.2.1 引物设计及PCR反应 | 第33-34页 |
| 3.2.2 目的片段的回收 | 第34页 |
| 3.2.3 pMDTM18-T Vector连接反应 | 第34页 |
| 3.2.4 大肠杆菌感受态细胞的制备与转化 | 第34页 |
| 3.2.5 质粒的小量抽提 | 第34页 |
| 3.2.6 双酶切反应 | 第34-35页 |
| 3.2.7 连接T载体后验证测序 | 第35页 |
| 3.2.8 双酶切后连接 | 第35页 |
| 3.2.9 阳性克隆鉴定 | 第35-36页 |
| 3.2.10 AtGDSL1-pGEX-4T-1 重组蛋白诱导表达 | 第36-37页 |
| 3.2.11 AtGDSL1-pGEX-4T-1 重组蛋白的纯化 | 第37页 |
| 3.2.12 脂肪酶活性验证 | 第37-38页 |
| 3.3 结果与分析 | 第38-43页 |
| 3.3.1 AtGDSL1-pGEX-4T-1 原核表达载体构建 | 第38-41页 |
| 3.3.2 AtGDSL1-pGEX-4T-1 融合蛋白诱导表达与纯化 | 第41-42页 |
| 3.3.3 AtGDSL1-pGEX-4T-1 融合蛋白脂肪酶活性验证 | 第42-43页 |
| 3.4 讨论与小结 | 第43-44页 |
| 第四章 AtGDSL1烟草中亚细胞定位分析 | 第44-54页 |
| 4.1 材料和试剂 | 第44-46页 |
| 4.1.1 植物材料、载体与菌种 | 第44页 |
| 4.1.2 主要试剂 | 第44页 |
| 4.1.3 基本溶液的配制 | 第44-45页 |
| 4.1.4 主要仪器设备 | 第45-46页 |
| 4.1.5 引物设计 | 第46页 |
| 4.2 方法 | 第46-49页 |
| 4.2.1 AtGDSL1亚细胞定位载体构建 | 第46-48页 |
| 4.2.2 农杆菌感受态制备及冻融法转化 | 第48页 |
| 4.2.3 烟草叶片的瞬时转化 | 第48页 |
| 4.2.4 烟草原生质体细胞的酶解制备和纯化 | 第48-49页 |
| 4.2.5 亚细胞定位观察 | 第49页 |
| 4.3 结果与分析 | 第49-53页 |
| 4.3.1 AtGDSL1亚细胞定位载体的构建 | 第49-52页 |
| 4.3.2 AtGDSL1的亚细胞定位 | 第52-53页 |
| 4.4 讨论和小结 | 第53-54页 |
| 第五章 BnGDSL1在甘蓝型油菜中的诱导表达 | 第54-64页 |
| 5.1 材料和试剂 | 第54-55页 |
| 5.1.1 材料 | 第54页 |
| 5.1.2 试剂 | 第54-55页 |
| 5.2 方法 | 第55-60页 |
| 5.2.1 样品处理 | 第55-56页 |
| 5.2.2 样品采集 | 第56页 |
| 5.2.3 油菜总RNA的提取以及cDNA的制备 | 第56-58页 |
| 5.2.4 荧光定量PCR | 第58-60页 |
| 5.3 结果与分析 | 第60-63页 |
| 5.3.1 BnGDSL1在非生物胁迫下的响应分析 | 第60-61页 |
| 5.3.2 BnGDSL1在不同激素处理下的响应分析 | 第61页 |
| 5.3.3 BnGDSL1在生物胁迫核盘菌处理下的响应分析 | 第61-62页 |
| 5.3.4 BnGDSL1各组织器官的表达分析 | 第62-63页 |
| 5.4 讨论与小结 | 第63-64页 |
| 第六章 GDSL转基因植株构建以及抗菌核病分析 | 第64-79页 |
| 6.1 材料与试剂 | 第64-65页 |
| 6.1.1 植物材料和菌种 | 第64页 |
| 6.1.2 试剂 | 第64页 |
| 6.1.3 基本溶液的配制 | 第64-65页 |
| 6.1.4 引物设计 | 第65页 |
| 6.2 方法 | 第65-70页 |
| 6.2.1 BnGDSL1和AtGDSL1过表达载体构建 | 第65-66页 |
| 6.2.2 BnGDSL1-RNAi表达载体的构建 | 第66-68页 |
| 6.2.3 抗生素筛选转化植株 | 第68页 |
| 6.2.4 转化植株的PCR鉴定 | 第68-69页 |
| 6.2.5 Q-PCR进一步鉴定转化植株 | 第69页 |
| 6.2.6 核盘菌处理油菜转化株 | 第69页 |
| 6.2.7 台盼蓝染色 | 第69-70页 |
| 6.2.8 数据分析 | 第70页 |
| 6.3 结果与分析 | 第70-77页 |
| 6.3.1 BnGDSL1和AtGDSL1在烟草中瞬时表达后接菌 | 第70-71页 |
| 6.3.2 BnGDSL1-RNAi抑制表达载体的鉴定 | 第71-73页 |
| 6.3.3 BnGDSL1和AtGDSL1过表达及BnGDSL1-RNAi植株PCR鉴定 | 第73页 |
| 6.3.4 BnGDSL1和AtGDSL1过表达及BnGDSL1-RNAi植株Q-PCR鉴定 | 第73-74页 |
| 6.3.5 过量表达AtGDSL1增强油菜对菌核病的抗性 | 第74-75页 |
| 6.3.6 台盼蓝染色结果 | 第75-76页 |
| 6.3.7 AtGDSL1高水平的表达激活PR-1、PDF1.2 和EIN3的表达 | 第76-77页 |
| 6.4 讨论与小结 | 第77-79页 |
| 第七章 过表达BnGDSL1和AtGDSL1提高种子萌发速度 | 第79-84页 |
| 7.1 材料与试剂 | 第79-80页 |
| 7.2 方法 | 第80页 |
| 7.2.1 种子萌发培养 | 第80页 |
| 7.2.2 植物RNA的提取、cDNA的制备以及荧光定量PCR | 第80页 |
| 7.3 结果 | 第80-83页 |
| 7.3.1 萌发初期种子中GDSL转录水平显著提高 | 第80-81页 |
| 7.3.2 过表达BnGDSL1和AtGDSL1促进种子萌发 | 第81-83页 |
| 7.4 讨论 | 第83-84页 |
| 第八章 抑制BnGDSL1表达提高种子含油量 | 第84-87页 |
| 8.1 材料和试剂 | 第84页 |
| 8.2 方法 | 第84页 |
| 8.2.1 种子含油量分析 | 第84页 |
| 8.2.2 脂肪酸组成分析 | 第84页 |
| 8.3 结果 | 第84-86页 |
| 8.3.1 抑制BnGDSL1表达提高种子含油量 | 第84-85页 |
| 8.3.2 抑制BnGDSL1改变种子脂肪酸组成 | 第85-86页 |
| 8.4 讨论 | 第86-87页 |
| 第九章 总结与展望 | 第87-89页 |
| 9.1 工作总结 | 第87-88页 |
| 9.2 展望 | 第88-89页 |
| 参考文献 | 第89-92页 |
| 致谢 | 第92-94页 |
| 在学期间发表论文 | 第94页 |
