| 摘要 | 第7-9页 |
| ABSTRACT | 第9-11页 |
| 第一章 文献综述 | 第12-18页 |
| 1.1 斑马鱼消化器官突变体的遗传筛选 | 第12-14页 |
| 1.1.1 利用斑马鱼进行遗传筛选的优势 | 第12页 |
| 1.1.2 斑马鱼消化器官的发育 | 第12-13页 |
| 1.1.3 肠道和肝脏发育的分子调控机制 | 第13-14页 |
| 1.1.4 ENU诱变与大规模遗传筛选 | 第14页 |
| 1.2 Ube1蛋白的原核表达纯化及抗体生产 | 第14-18页 |
| 1.2.1 泛素化修饰通路 | 第14-15页 |
| 1.2.2 泛素与类泛素化修饰的重要功能 | 第15-16页 |
| 1.2.3 Ube1蛋白简介 | 第16-18页 |
| 第二章 斑马鱼消化器官突变体的遗传筛选 | 第18-32页 |
| 2.1 材料和方法 | 第18-25页 |
| 2.1.1 斑马鱼的品系与饲养 | 第18页 |
| 2.1.2 受精卵的收集 | 第18页 |
| 2.1.3 E.coli菌株 | 第18页 |
| 2.1.4 质粒载体 | 第18页 |
| 2.1.5 探针合成 | 第18-21页 |
| 2.1.6 全胚胎原位杂交(whole-mount in situ hybridization,WISH) | 第21-22页 |
| 2.1.7 筛选流程 | 第22-24页 |
| 2.1.8 试剂与配方 | 第24-25页 |
| 2.2 结果与分析 | 第25-30页 |
| 2.2.1 ENU诱变与F2家族的建立 | 第25页 |
| 2.2.2 F2代筛选与突变体的传代 | 第25-26页 |
| 2.2.3 F3代筛选与互补实验 | 第26-27页 |
| 2.2.4 F3突变体的表型分类 | 第27页 |
| 2.2.5 斑马鱼肠道和肝脏的调控因子大多是通用的 | 第27-30页 |
| 2.3 讨论 | 第30-32页 |
| 2.3.1 遗传筛选的成就与结果分析 | 第30页 |
| 2.3.2 筛选中存在的问题与限制性因素 | 第30-32页 |
| 第三章 Ube1蛋白的原核表达纯化、抗体生产 | 第32-60页 |
| 3.1 材料和方法 | 第32-44页 |
| 3.1.1 E.coli菌株 | 第32页 |
| 3.1.2 质粒载体 | 第32页 |
| 3.1.3 蛋白原核表达系统的构建 | 第32-34页 |
| 3.1.4 诱导条件测试 | 第34页 |
| 3.1.5 蛋白纯化(亲和层析) | 第34-36页 |
| 3.1.6 Ube1抗体生产与检测 | 第36-37页 |
| 3.1.7 Western blot实验步骤 | 第37-39页 |
| 3.1.8 抗体纯化与检测 | 第39-40页 |
| 3.1.9 试剂与配方 | 第40-43页 |
| 3.1.10 主要实验仪器 | 第43-44页 |
| 3.2 结果与分析 | 第44-57页 |
| 3.2.1 全长ube1 CDS原核表达系统的构建 | 第44-46页 |
| 3.2.2 全长Ube1蛋白的纯化 | 第46-50页 |
| 3.2.3 ube1基因部分表达序列的原核表达系统构建 | 第50-51页 |
| 3.2.4 Ube1 C’terminal 105aa短肽的纯化 | 第51-53页 |
| 3.2.5 生产的Ubel抗体能够作为Western Blot一抗工作 | 第53-54页 |
| 3.2.6 Ube1抗体纯化后效果有明显增强 | 第54-57页 |
| 3.3 讨论 | 第57-60页 |
| 3.3.1 全长Ube1纯化失败的原因分析 | 第57页 |
| 3.3.2 Ube1 C’terminal短肽纯化的成功经验 | 第57页 |
| 3.3.3 抗体生产与纯化 | 第57-60页 |
| 第四章 结论与展望 | 第60-62页 |
| 4.1 斑马鱼肠道和肝脏突变体的正向遗传筛选 | 第60页 |
| 4.2 斑马鱼Ube1蛋白的原核表达、纯化及抗体生产 | 第60-62页 |
| 参考文献 | 第62-70页 |
| 附录 | 第70-88页 |
| 致谢 | 第88-90页 |
| 在读期间发表论文及参与课题 | 第90页 |
| 发表论文 | 第90页 |
| 参与项目 | 第90页 |
| 参与其他课题 | 第90页 |
