| 摘要 | 第6-8页 |
| ABSTRACT | 第8-9页 |
| 文献综述 | 第14-29页 |
| 第一章 体细胞克隆胚及精子的研究进展 | 第14-21页 |
| 1 体细胞核移植定义 | 第14页 |
| 2 体细胞克隆胚胎研究进展 | 第14页 |
| 3 影响体细胞核移植效率的因素 | 第14-16页 |
| 3.1 胚胎发育早期的异常重编程 | 第14-15页 |
| 3.2 X染色体与动物克隆 | 第15页 |
| 3.3 DNA甲基化 | 第15-16页 |
| 3.3.1 DNA甲基化及相关应用研究 | 第15页 |
| 3.3.2 组蛋白修饰 | 第15-16页 |
| 3.4 基因组印迹和动物克隆 | 第16页 |
| 3.5 非编码RNA的调控（见第二章） | 第16页 |
| 4 影响体细胞克隆效率的因素 | 第16-21页 |
| 4.1 供体细胞 | 第17-18页 |
| 4.1.1 供体细胞类型 | 第17页 |
| 4.1.2 供体细胞的周期 | 第17-18页 |
| 4.2 受体卵母细胞 | 第18-19页 |
| 4.2.1 卵母细胞质量及培养液因素 | 第18-19页 |
| 4.3 表观遗传修饰药物的应用 | 第19页 |
| 4.4 技术操作方面 | 第19-21页 |
| 4.4.1 融合激活时间 | 第19-20页 |
| 4.4.2 胚胎嵌合体与筛选 | 第20-21页 |
| 第二章 精源性非编码小RNA的结构和生物学功能 | 第21-29页 |
| 1 精子重编程及表观遗传学初步分析 | 第21-24页 |
| 1.1 精子的形成 | 第21-22页 |
| 1.1.1 鱼精蛋白 | 第21-22页 |
| 1.1.1 精子获能与顶体反应 | 第22页 |
| 1.1.2 精子的提取与纯化 | 第22页 |
| 1.2 精子的表观遗传学 | 第22-24页 |
| 1.2.1 精子的基因表达事件 | 第22-23页 |
| 1.2.2 精子表观遗传学的初步研究 | 第23页 |
| 1.2.3 精子小的非编码RNA的研究进展 | 第23-24页 |
| 2 MicroRNA在生殖领域研究进展 | 第24-27页 |
| 2.1 非编码RNA | 第24-25页 |
| 2.2 MiRNA的结构与形成过程 | 第25-26页 |
| 2.2.1 miRNAs与精子发生调控 | 第25页 |
| 2.2.2 精子mi RNA与受精卵发育 | 第25-26页 |
| 2.3 与胚胎发育相关的miRNA | 第26-27页 |
| 2.3.1 miRNA与合子转换期 | 第26页 |
| 2.3.2 miRNA与胚胎的致密化水平 | 第26-27页 |
| 2.3.3 miRNAs与囊胚的发育 | 第27页 |
| 3 Piwi-interacting RNAs (piRNAs)的研究进展 | 第27-29页 |
| 3.1 piRNA生成与调控 | 第27-28页 |
| 3.2 生殖细胞的piRNA | 第28-29页 |
| 实验部分 | 第29-83页 |
| 第三章 牛成熟精子RNA的提取与鉴定 | 第29-39页 |
| 3.1 实验材料 | 第29-30页 |
| 3.1.1 主要实验仪器 | 第29-30页 |
| 3.1.2 试剂与耗材 | 第30页 |
| 3.2 牛附睾和睾丸的收集与成熟精子提取 | 第30-31页 |
| 3.2.1 牛附睾及睾丸收集 | 第30-31页 |
| 3.2.2 牛精子的分离提取 | 第31页 |
| 3.3 精子总RNA的提取 | 第31-34页 |
| 3.3.1 精子质量检测 | 第32-34页 |
| 3.4 结果 | 第34-36页 |
| 3.4.1 精子提取和鉴定 | 第34-36页 |
| 3.5 讨论 | 第36-38页 |
| 3.5.1 精子提纯方面 | 第37页 |
| 3.5.2 精子RNA提取方面 | 第37页 |
| 3.5.3 精子特征性基因验证方面 | 第37-38页 |
| 3.6 小结 | 第38-39页 |
| 第四章 牛成熟精子、卵母细胞和成纤维细胞小RNA文库的构建及精源性mi RNA的筛选鉴定 | 第39-65页 |
| 4.1 实验材料与耗材 | 第39-42页 |
| 4.1.1 实验材料 | 第39页 |
| 4.1.2 实验试剂与耗材 | 第39-40页 |
| 4.1.3 实验仪器 | 第40页 |
| 4.1.4 试剂的配制 | 第40-41页 |
| 4.1.5 数据库与主要分析软件 | 第41-42页 |
| 4.1.6 数据分析程序 | 第42页 |
| 4.2 实验动物与样本采集 | 第42-43页 |
| 4.2.1 牛胎儿成纤维细胞的原代培养 | 第42页 |
| 4.2.2 牛卵母细胞的收集与体外成熟 | 第42页 |
| 4.2.3 牛成熟精子的收集纯化（见第三章） | 第42页 |
| 4.2.4 样品总RNA提取 | 第42-43页 |
| 4.3 牛成熟精子、卵母细胞和成纤维细胞小RNA文库的构建 | 第43页 |
| 4.4 小RNA文库的生物信息学分析 | 第43-44页 |
| 4.4.1 miRNA及靶基因的生物学预测分析 | 第44页 |
| 4.5 精源性miRNA筛选及鉴定 | 第44-46页 |
| 4.5.1 候选mi RNA差异表达分析 | 第44-45页 |
| 4.5.2 实时荧光定量PCR | 第45-46页 |
| 4.6 结果 | 第46-62页 |
| 4.6.1 建库测序数据产出总览 | 第46-49页 |
| 4.6.2 miRNA成簇分析 | 第49页 |
| 4.6.3 miRNA进化分析 | 第49页 |
| 4.6.4 保守性miRNA靶基因和通路分析 | 第49-53页 |
| 4.6.5 新预测的精源性miRNA分析 | 第53-54页 |
| 4.6.6 miRNA-Go-网络分析 | 第54-55页 |
| 4.6.7 miRNAs差异表达分析及精源性候选miRNA的筛选 | 第55-59页 |
| 4.6.8 精源性microRNA定量验证 | 第59-62页 |
| 4.7 讨论 | 第62-64页 |
| 4.7.1 miRNA的鉴定 | 第62页 |
| 4.7.2 Clean数据的获得和质控分析 | 第62-63页 |
| 4.7.3 miRNA簇和种子序列分析 | 第63页 |
| 4.7.4 miRNA的检出和发现 | 第63-64页 |
| 4.7.5 精源性miRNA的定量检测 | 第64页 |
| 4.8 小结 | 第64-65页 |
| 第五章 精源性miRNA-202对早期胚胎发育影响的初步研究 | 第65-73页 |
| 5.1 试剂与材料 | 第65-66页 |
| 5.1.1 仪器 | 第65页 |
| 5.1.2 耗材和试剂 | 第65-66页 |
| 5.2 实验材料与方法 | 第66-68页 |
| 5.3 结果 | 第68-72页 |
| 5.3.1 模拟IVF胚胎精子表达量的注射浓度 | 第68页 |
| 5.3.4 第七天胚胎卵裂统计 | 第68-69页 |
| 5.3.5 胚胎乙酰化染色结果 | 第69-71页 |
| 5.3.6 miR-202相关靶基因分析 | 第71-72页 |
| 5.4 讨论 | 第72页 |
| 5.5 小结 | 第72-73页 |
| 第六章 精子携带的高表达miR-449b对克隆胚早期发育影响 | 第73-83页 |
| 6.1 材料与方法 | 第73-75页 |
| 6.1.1 实验材料 | 第73页 |
| 6.1.2 实验方法 | 第73-75页 |
| 6.2 实验结果 | 第75-81页 |
| 6.2.1 miR-449b的茎环序列及比对结果 | 第75页 |
| 6.2.2 重组载体双酶切电泳图 | 第75-76页 |
| 6.2.3 单克隆细胞结果图 | 第76-77页 |
| 6.2.4 miR-449b的表达情况检测 | 第77-78页 |
| 6.2.5 胚胎卵裂情况 | 第78页 |
| 6.2.6 胚胎染色结果 | 第78-80页 |
| 6.2.7 囊胚凋亡染色 | 第80页 |
| 6.2.8 miRNA-449b靶基因初步研究 | 第80-81页 |
| 6.3 讨论 | 第81-82页 |
| 6.4 小结 | 第82-83页 |
| 全文总结 | 第83-84页 |
| 参考文献 | 第84-93页 |
| 致谢 | 第93-95页 |
| 作者简介 | 第95页 |
