| 摘要 | 第4-6页 |
| Abstract | 第6-7页 |
| 目录 | 第8-12页 |
| CONTENTS | 第12-16页 |
| 缩写 | 第16-17页 |
| 第一章 绪论 | 第17-24页 |
| 1.1 醛酮还原酶家族命名 | 第17页 |
| 1.2 醛糖还原酶 | 第17-19页 |
| 1.2.1 醛糖还原酶的结构 | 第17-18页 |
| 1.2.2 醛糖还原酶的分布 | 第18-19页 |
| 1.2.3 醛糖还原酶的生理功能 | 第19页 |
| 1.3 醛还原酶的介绍 | 第19-21页 |
| 1.3.1 醛还原酶的结构 | 第19-20页 |
| 1.3.2 醛还原酶的分布 | 第20页 |
| 1.3.3 醛还原酶的生理功能 | 第20-21页 |
| 1.4 入脑蛋白设计 | 第21-24页 |
| 1.4.1 霍乱毒素蛋白 | 第21-22页 |
| 1.4.2 增强型绿色荧光蛋白 | 第22页 |
| 1.4.3 TAT蛋白 | 第22页 |
| 1.4.4 脑靶向蛋白转运功能 | 第22-24页 |
| 第二章 醛糖还原酶的克隆、表达与研究 | 第24-50页 |
| 2.1 引言 | 第24页 |
| 2.2 实验材料、试剂和仪器 | 第24-29页 |
| 2.2.1 菌株和质粒 | 第24页 |
| 2.2.2 试剂 | 第24-25页 |
| 2.2.3 溶液配制 | 第25-28页 |
| 2.2.4 仪器 | 第28-29页 |
| 2.3 实验方法 | 第29-38页 |
| 2.3.1 AKR1B1基因片段的获得 | 第29页 |
| 2.3.2 pET-22b(+)-AKR1B1重组表达载体构建 | 第29-34页 |
| 2.3.3 表达宿主菌的选择 | 第34页 |
| 2.3.4 测定Rosetta(DE3)的生长曲线 | 第34页 |
| 2.3.5 目的蛋白的表达 | 第34页 |
| 2.3.6 目的蛋白的纯化 | 第34-36页 |
| 2.3.7 目的蛋白鉴定 | 第36页 |
| 2.3.8 AKR1B1-(His)_6酶浓度测定 | 第36-37页 |
| 2.3.9 重组AKR1B1-(His)_6酶活性测定及动力学分析 | 第37-38页 |
| 2.4 实验结果与讨论 | 第38-49页 |
| 2.4.1 目的基因PCR扩增 | 第38页 |
| 2.4.2 pET-22b-AKR1B1-(His)_6表达载体的构建 | 第38-42页 |
| 2.4.3 表达菌种的选择 | 第42-43页 |
| 2.4.4 测定Rosetta(DE3)的生长曲线 | 第43-44页 |
| 2.4.5 目的蛋白的表达 | 第44-45页 |
| 2.4.6 目的蛋白的纯化 | 第45-46页 |
| 2.4.7 目的蛋白鉴定 | 第46-47页 |
| 2.4.8 目的蛋白氨基酸测序 | 第47页 |
| 2.4.9 醛糖还原酶溶度测定 | 第47-48页 |
| 2.4.10 醛糖还原酶活性测定 | 第48-49页 |
| 2.5 本章小结 | 第49-50页 |
| 第三章 醛还原酶的克隆、表达与活性测定 | 第50-63页 |
| 3.1 引言 | 第50页 |
| 3.2 实验材料、试剂和仪器 | 第50-51页 |
| 3.2.1 菌株和质粒 | 第50页 |
| 3.2.2 试剂 | 第50页 |
| 3.2.3 溶液配制 | 第50-51页 |
| 3.2.4 仪器 | 第51页 |
| 3.3 实验方法 | 第51-54页 |
| 3.3.1 (His)_6-DDDDK-AKR1A1基因的优化与合成 | 第51页 |
| 3.3.2 pET-22b-(His)_6-DDDDK-AKR1A1重组表达质粒的构建及鉴定 | 第51-52页 |
| 3.3.3 融合蛋白的表达、纯化及肠激酶切割 | 第52-53页 |
| 3.3.4 融合蛋白的诱导表达条件优化 | 第53页 |
| 3.3.5 目的蛋白鉴定 | 第53-54页 |
| 3.3.6 重组AKR1A1酶活性测定及动力学分析 | 第54页 |
| 3.4 实验结果与讨论 | 第54-62页 |
| 3.4.1 pET-22b-(His)_6-DDDDK-AKR1A1原核表达质粒的构建 | 第54-58页 |
| 3.4.2 pe1B-(His)_6-DDDDK-AKR1A1表达、纯化及肠激酶切割 | 第58-59页 |
| 3.4.3 pe1B-(His)_6-DDDDK-AKR1A1重组蛋白表达条件的优化 | 第59-61页 |
| 3.4.4 重组蛋白鉴定 | 第61页 |
| 3.4.5 AKR1A1蛋白的活性测定 | 第61-62页 |
| 3.5 本章小结 | 第62-63页 |
| 第四章 非甾体抗炎药对醛糖还原酶与醛还原酶抑制性的研究 | 第63-68页 |
| 4.1 引言 | 第63页 |
| 4.2 实验材料、试剂和仪器 | 第63-64页 |
| 4.2.1 试剂 | 第63-64页 |
| 4.2.2 溶液配制 | 第64页 |
| 4.2.3 仪器 | 第64页 |
| 4.3 实验方法 | 第64-65页 |
| 4.3.1 非甾体抗炎药物对AKR1B1的抑制研究 | 第64-65页 |
| 4.3.2 非甾体抗炎药物对AKR1A1的抑制研究 | 第65页 |
| 4.4 实验结果与讨论 | 第65-67页 |
| 4.4.1 抗炎药对AKR1A1、AKR1B1的IC_(50)值测定 | 第65-67页 |
| 4.5 本章小结 | 第67-68页 |
| 第五章 不相容双质粒共表达霍乱毒素类似嵌合蛋白 | 第68-85页 |
| 5.1 介绍 | 第68-69页 |
| 5.2 实验材料、试剂和仪器 | 第69页 |
| 5.2.1 菌株、质粒 | 第69页 |
| 5.2.2 试剂 | 第69页 |
| 5.2.3 溶液配制 | 第69页 |
| 5.2.4 仪器 | 第69页 |
| 5.3 实验方法 | 第69-73页 |
| 5.3.1 编码CTB基因的工程菌构建 | 第69-70页 |
| 5.3.2 编码EGFP-CTA2-TAT基因的工程菌构建 | 第70页 |
| 5.3.3 分步转化获得目的蛋白表达工程菌 | 第70-71页 |
| 5.3.4 测定BL21(DE3)的生长曲线 | 第71页 |
| 5.3.5 重组蛋白在大肠杆菌中的表达 | 第71-72页 |
| 5.3.6 目的蛋白鉴定 | 第72-73页 |
| 5.4 实验结果 | 第73-84页 |
| 5.4.1 pET-28a-CTB原核表达质粒的构建 | 第73-76页 |
| 5.4.2 pET-22b-EGFP-CTA2-TAT原核表达质粒的构建 | 第76-79页 |
| 5.4.3 分步转化获得目的蛋白表达工程菌 | 第79-81页 |
| 5.4.4 细菌生长曲线测定 | 第81页 |
| 5.4.5 目的蛋白表达、纯化 | 第81-83页 |
| 5.4.6 目的蛋白的鉴定 | 第83-84页 |
| 5.5 本章小结 | 第84-85页 |
| 结论与展望 | 第85-87页 |
| 参考文献 | 第87-93页 |
| 攻读硕士学位期间发表的论文 | 第93-94页 |
| 附录 | 第94-98页 |
| 致谢 | 第98页 |
