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拟南芥TOPP4去磷酸化DELLA及六个保守丝/苏氨酸位点对RGA蛋白功能和稳定性影响

中文摘要第3-5页
Abstract第5-6页
缩略词表第7-11页
第一章 前言第11-28页
    1.1 赤霉素的研究现状第12-24页
        1.1.1 赤霉素在植物体内的合成第12-13页
        1.1.2 赤霉素的信号转导途径第13-18页
        1.1.3 赤霉素对植物生殖生长的影响第18-21页
        1.1.4 赤霉素与其它激素的协同或拮抗作用第21-24页
    1.2 蛋白磷酸酶第24-26页
    1.3 研究目的与意义第26-28页
第二章 实验材料与方法第28-38页
    2.1 实验材料第28-31页
        2.1.1 材料类型第28-31页
        2.1.2 培养条件第31页
    2.2 实验方法第31-38页
        2.2.1 酵母双杂交第31-33页
        2.2.2 抗体制备第33-34页
        2.2.3 Pull-down第34页
        2.2.4 免疫共沉淀第34-35页
        2.2.5 免疫印迹第35页
        2.2.6 蛋白去磷酸化实验第35页
        2.2.7 植株总RNA的提取第35页
        2.2.8 反转录第35页
        2.2.9 荧光定量PCR第35页
        2.2.10 点突变第35-36页
        2.2.11 花序浸泡法转化植株第36页
        2.2.12 植株表型鉴定第36页
        2.2.13 生理实验GA_3和PAC处理第36-37页
        2.2.14 RGA蛋白的稳定性第37-38页
第三章 实验结果第38-87页
    3.1 突变体topp4-1表现出GA缺失的表型第38页
    3.2 实验酵母双杂交证明TOPP4能够与DELLA蛋白相互作用第38-40页
    3.3 Pull-down证明TOPP4能够与DELLA蛋白相互作用第40-41页
    3.4 免疫共沉淀(Co-IP)证明TOPP4能够与DELLA蛋白相互作用第41-44页
    3.5 TOPP4蛋白能够将DELLA蛋白去磷酸化第44-45页
    3.6 TOPP4介导了DELLA蛋白RGA、GAI的降解第45-46页
    3.7 TOPP4与DELLA蛋白的C末端相互作用第46-47页
    3.8 TOPP4过表达转基因植株35S: TOPP4在植株高度、叶面积、花序等方面表现出变高、变大的表型第47-51页
    3.9 DELLA蛋白保守丝氨酸/苏氨酸位点单点突变对蛋白功能的影响第51-55页
    3.10 6个保守丝氨酸/苏氨酸多点突变模拟持续磷酸化和持续去磷酸化RGA对蛋白功能和稳定性的影响第55-83页
        3.10.1 过表达模拟持续去磷酸化RGA的转基因植株表现出DELLA蛋白缺失和GA过量的表型第55-66页
        3.10.2 过表达模拟持续磷酸化RGA的转基因植株表现出RGA不降解和GA缺失的表型第66-71页
        3.10.3 模拟去磷酸化/磷酸化的RGA改变了自身的生物学功能第71-74页
        3.10.4 不同磷酸化修饰的RGA影响了转基因植株对GA和PAC的敏感性第74-76页
        3.10.5 磷酸化修饰影响了RGA蛋白的稳定性第76-78页
        3.10.6 磷酸化修饰不影响RGA蛋白与TOPP4、SLY1的相互作用第78-79页
        3.10.7 磷酸化修饰并不影响RGA蛋白的亚细胞定位第79-80页
        3.10.8 35S:RGA6A部分恢复gal-3和gal-13 GA缺失的表型第80-82页
        3.10.9 过表达RGA6A转基因植株的表型不是由于DELLA基因被干扰引起的第82页
        3.10.10 过表达RGA6D的表型不是由于与RGA竞争结合SLY1引起的第82-83页
    3.11 6个保守丝氨酸/苏氨酸多点突变模拟持续磷酸化和去磷酸化GAI对蛋白功能的影响第83-84页
    3.12 DELLA蛋白磷酸化氨基酸位点的质谱鉴定第84-87页
第四章 讨论第87-97页
    4.1 TOPP4能够与DELLA蛋白GRAS结构域相互作用第88-89页
    4.2 TOPP4能够将DELLA去磷酸化第89页
    4.3 TOPP4影响植株DELLA蛋白的含量第89-90页
    4.4 TOPP4过表达使植株变高、变大第90-91页
    4.5 DELLA蛋白单点突变对植株表型的影响第91-92页
    4.6 模拟持续去磷酸化RGA能够增强GA信号第92-93页
    4.7 模拟持续磷酸化的RGA蛋白更稳定并抑制GA信号第93-95页
    4.8 结论与展望第95-97页
        4.8.1 结论第95页
        4.8.2 展望第95-97页
参考文献第97-106页
在学期间的研究成果第106-107页
致谢第107页

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