| 中文摘要 | 第3-6页 |
| Abstract | 第6-8页 |
| 常用符号及缩略语说明 | 第12-13页 |
| 文献综述 禽致病性大肠杆菌的研究现状 | 第13-22页 |
| 1 大肠杆菌的主要特性 | 第13-14页 |
| 2 禽大肠杆菌病临床症状 | 第14页 |
| 3 大肠杆菌的血清型 | 第14页 |
| 4 禽致病性大肠杆菌的致病机理和毒力因子 | 第14-16页 |
| 4.1 细菌aroA基因的功能及应用 | 第15页 |
| 4.2 QS系统与毒力基因的关系 | 第15页 |
| 4.3 细菌luxS基因的功能 | 第15-16页 |
| 5 突变株构建策略研究进展 | 第16-17页 |
| 5.1 使用转座子进行随机插入突变 | 第16页 |
| 5.2 自杀性质粒介导的同源重组方法 | 第16页 |
| 5.3 Red同源重组系统 | 第16-17页 |
| 6 禽大肠杆菌病的防治 | 第17-21页 |
| 6.1 禽大肠杆菌病的药物防治 | 第17页 |
| 6.2 禽大肠杆菌的疫苗防治 | 第17-21页 |
| 6.2.1 禽大肠杆菌灭活苗的研究 | 第17-18页 |
| 6.2.2 禽大肠杆菌弱毒活菌苗的研究 | 第18页 |
| 6.2.3 菌蜕疫苗的研究进展 | 第18-20页 |
| 6.2.4 菌蜕疫苗的应用 | 第20-21页 |
| 7 总结 | 第21-22页 |
| 第一章 禽致病性大肠杆菌的血清型、毒力因子及耐药研究 | 第22-29页 |
| 1 材料与方法 | 第22-24页 |
| 1.1 试剂和菌种 | 第22页 |
| 1.2 APEC的分离鉴定 | 第22页 |
| 1.3 APEC的O血清型鉴定 | 第22页 |
| 1.4 APEC毒力相关基因的检测 | 第22-23页 |
| 1.5 APEC的药物敏感性检测 | 第23-24页 |
| 2 结果 | 第24-27页 |
| 2.1 APEC的分离、鉴定及血清型鉴定 | 第24-25页 |
| 2.2 APEC毒力相关基因的检测 | 第25-26页 |
| 2.3 APEC耐药性检测 | 第26-27页 |
| 2.4 APEC血清型、毒力和耐药性之间的关系 | 第27页 |
| 3 讨论 | 第27-29页 |
| 第二章 禽致病性大肠杆菌aroA缺失株和aroA-luxS双基因缺失株的构建及生物学特性评价 | 第29-43页 |
| 1 实验材料 | 第29-30页 |
| 1.1 菌株和质粒 | 第29页 |
| 1.2 试剂 | 第29页 |
| 1.3 工具酶和试剂盒 | 第29页 |
| 1.4 培养基及试剂配制 | 第29-30页 |
| 1.5 主要仪器设备 | 第30页 |
| 2 方法 | 第30-36页 |
| 2.1 引物合成 | 第30-32页 |
| 2.2 aroA基因上游同源臂片段、下游同源臂片段和氯霉素抗性片段的扩增 | 第32页 |
| 2.3 aroA基因上游和下游同源臂的连接 | 第32-34页 |
| 2.4 缺失打靶片段的制备 | 第34页 |
| 2.5 APEC的aroA缺失步骤及鉴定 | 第34-35页 |
| 2.6 DE17△aroA ΔluxS双基因缺失株的构建同上 | 第35页 |
| 2.7 生长曲线的测定 | 第35-36页 |
| 2.8 黏附与入侵 | 第36页 |
| 2.9 LD_(50)测定实验 | 第36页 |
| 2.10 体内分布实验 | 第36页 |
| 3 实验结果 | 第36-41页 |
| 3.1 缺失株构建的鉴定 | 第36-38页 |
| 3.2 生长曲线的结果 | 第38-39页 |
| 3.3 运动性结果 | 第39页 |
| 3.4 aroA缺失及aroA、luxS双缺对APEC致病性的影响 | 第39-41页 |
| 3.4.1 黏附入侵的结果 | 第39页 |
| 3.4.2 LD_(50)的测定结果 | 第39-41页 |
| 3.4.3 体内分布结果 | 第41页 |
| 4 讨论 | 第41-43页 |
| 第三章 菌蜕溶菌质粒的构建及其灭活效果评价 | 第43-50页 |
| 1 材料与方法 | 第43-45页 |
| 1.1 APEC分离株的复苏 | 第43页 |
| 1.2 溶菌表达质粒的改造 | 第43页 |
| 1.3 APEC菌蜕的制备 | 第43-44页 |
| 1.3.1 DE17感受态细胞制备 | 第43-44页 |
| 1.3.2 电转化重组质粒的筛选和鉴定 | 第44页 |
| 1.4 灭活效果检测 | 第44-45页 |
| 2 结果 | 第45-48页 |
| 2.1 菌蜕各目的基因的PCR扩增 | 第45页 |
| 2.2 透射电镜观察 | 第45-46页 |
| 2.3 溶菌曲线 | 第46页 |
| 2.4 菌蜕裂解效率的测定 | 第46-47页 |
| 2.5 SN对菌蜕基因组的降解作用检测 | 第47页 |
| 2.6 使用冻干或加庆大霉素完全灭活的结果 | 第47-48页 |
| 3 讨论 | 第48-50页 |
| 第四章 动物免疫保护试验 | 第50-55页 |
| 1 材料 | 第50页 |
| 1.1 菌株及动物 | 第50页 |
| 1.2 试剂 | 第50页 |
| 1.3 仪器 | 第50页 |
| 2 方法 | 第50-52页 |
| 2.1 甲醛灭活疫苗的制备 | 第50-51页 |
| 2.2 菌蜕疫苗的制备 | 第51页 |
| 2.3 无菌检验 | 第51页 |
| 2.4 动物免疫实验 | 第51-52页 |
| 2.5 抗体检测 | 第52页 |
| 2.6 攻毒保护实验 | 第52页 |
| 3 结果 | 第52-54页 |
| 3.1 无菌检验 | 第52页 |
| 3.2 免疫保护实验结果 | 第52-53页 |
| 3.3 ELISA结果 | 第53-54页 |
| 4 讨论 | 第54-55页 |
| 全文总结 | 第55-56页 |
| Uncategorized References | 第56-62页 |
| 致谢 | 第62-63页 |
